如何诱导需求产生的原因玉米产生更多的气生根

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验证码输入错误,请重新输入玉米茎尖分生组织丛生芽高频诱导和再生体系建立--《华中农业大学》2012年硕士论文
玉米茎尖分生组织丛生芽高频诱导和再生体系建立
【摘要】:玉米是世界三大粮食作物之一,转基因是提高玉米产量和品质的有效方法。成功的转基因体系依赖于良好的受体系统。目前,幼胚仍然是玉米转化受体系统中最重要的外植体。而由成熟胚茎尖分生组织诱导而来的丛生芽与传统的幼胚相比,具有不受季节限制,诱导率高,再生植株无变异等优势。如何高频的诱导丛生芽并再生成为完整植株正是本课题的研究目的所在。本研究主要获得的结果有以下几点:
1、以CML295茎尖分生组织为受体材料,根据实验所得浓度范围分别配制8种含有不同浓度6-BA和2,4-D的诱导培养基进行诱导,每种培养基包含3次重复试验,并最终以诱导频率的高低作为评价标准进行极差分析,诱导频率最高达到63%。
2、以3.5:0.5和3.0:0.5两种诱导培养基上诱导出的丛生芽为对象,研究丛生芽的继代和扩繁能力。3.5:0.5诱导培养基上的丛生芽能继代培养6个月左右,后期扩繁能力较差:3.0:0.5诱导培养基上的丛生芽可以继代12个月左右,后期仍具有一定的扩繁能力:而在3.5:0.5诱导培养基上诱导并在3.0:0.5诱导培养基上继代培养的丛生芽在继代16个月后仍有较好的生长状态和较高的增殖能力。
3、通过对各诱导培养基上所诱导出丛生芽的质量进行对比分析,建立丛生芽质量评价标准。将诱导频率,增殖速度和诱导质量等因素相结合,得到6-BA浓度为3.2mg/L,2,4-D浓度为0.5mg/L的诱导培养基最为适宜
4、用不同生长时期的丛生芽制作样品进行扫描电镜观察。观察到诱导前、中、后期三个阶段芽组织及周围幼叶的不同形态特征。诱导前期茎尖生长不明显;中期形成瘤状突起,幼叶上有少量纤毛状突起;后期丛生芽形成,幼叶上布满纤毛状突起。
5、丛生芽诱导完成后,分别取继代培养2个月、4个月和6个月的丛生芽块进行分化再生,得到的结果是继代培养2个月的丛生芽分化培养20天的分化率达到80%,生根率60%,继代培养4个月的丛生芽分化率为50%,而培养6个月的丛生芽短时间未能分化成苗。
【关键词】:
【学位授予单位】:华中农业大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2012【分类号】:S513【目录】:
摘要6-7Abstract7-8缩略语8-91 前言9-16 1.1 玉米转基因方法研究进展9-12
1.1.1 农杆菌介导的基因转化9-10
1.1.2 基因枪转化法10
1.1.3 PEG介导法10
1.1.4 花粉管通道法10-11
1.1.5 子房注射法11
1.1.6 茎尖直接转化法11-12
1.1.7 电激法12 1.2 玉米转化受体的选择12-14
1.2.1 愈伤组织12-13
1.2.2 原生质体13
1.2.3 悬浮细胞系13-14
1.2.4 外植体14 1.3 本课题的研究目的和意义14-162 实验材料与方法16-23 2.1 实验材料16-18
2.1.1 成熟胚材料16
2.1.2 转化用质粒16
2.1.3 主要培养基配方16-18 2.2 方法18-23
2.2.1 组织培养方法18
2.2.1.1 种子的无菌处理及萌发18
2.2.1.2 茎尖分生组织丛生芽的诱导与继代18
2.2.1.3 茎尖分生组织丛生芽的分化与生根18
2.2.2 形态观察18-19
2.2.2.1 取样与固定18-19
2.2.2.2 扫描电镜镜检及照相19
2.2.3 基因枪转化,筛选及检测19-23
2.2.3.1 转化受体的准备19
2.2.3.2 微弹的制备19-20
2.2.3.3 基因枪准备及轰击20
2.2.3.4 转基因丛生芽的PCR检测20-233 结果与分析23-40 3.1 茎尖分生组织丛生芽高频诱导体系的建立23-34
3.1.1 诱导培养基中激素种类及浓度的选择23
3.1.2 不同诱导培养基上丛生芽生长速度分析23-26
3.1.3 不同诱导培养基上丛生芽诱导的质量分析26-32
3.1.4 不同诱导培养基上丛生芽继代相关研究32-34
3.1.5 诱导培养基诱导频率极差分析34 3.2 不同诱导阶段的分生组织的扫描电镜观察34-35
3.2.1 诱导初期茎尖分生组织的扫描电镜观察34
3.2.2 诱导中期茎尖分生组织的扫描电镜观察34
3.2.3 诱导后期茎尖分生组织的扫描电镜观察34-35 3.3 丛生芽的分化和高频植株再生35-39
3.3.1 丛生芽的分化研究35-36
3.3.2 幼苗的生根与移栽36-39 3.4 诱导培养基配方的确定39 3.5 转ZmBr基因丛生芽块的分子检测39-404 讨论40-44 4.1 成熟胚茎尖分生组织的取材对诱导丛生芽产生的影响40 4.2 幼叶的生长对丛生芽诱导,继代产生的影响40-41 4.3 丛生芽继代培养操作细节相关研究41 4.4 丛生芽继代时间对丛生芽增殖能力,分化能力的影响41 4.5 光照和黑暗条件对丛生芽诱导的不同影响41-42 4.6 丛生芽与愈伤组织在分化、生根过程中的区别42 4.7基于本研究可以开展的下一步工作42-44参考文献44-51致谢51-52附录52-54
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亩用60g&,兑水15kg&
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全生育期均可与除草剂、杀虫剂、杀菌剂混合喷施或单独喷施、省时省工。
晴天下午5时后叶面喷施。
注意事项:
1、&喷施前后不再使用其它植物生长延缓剂。
2、&沉淀物为有效成份,用时倒净搅拌均匀。
3、&使用本品不能代替正常的水肥管理。
4、&干旱地块应酌情减少用量。
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