求助ELISA实验中,tmb显色反应原理液B TMB如何稳定

TMB显色液(ELISA HRP显色用)
TMB显色液(ELISA HRP显色用)
&产品编号: P0209
&产品包装: 100ml
&产品价格: 213.00元
产品简介:
&&&&TMB显色液(ELISA&HRP显色用)(TMB&Horseradish&Peroxidase&Color&Development&Solution&for
ELISA)是一种采用了最新单一溶液TMB显色技术,通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色,用于ELISA等的显色液。本显色液也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
&&&&通常的TMB显色试剂由多个组份组成,必须在使用前进行配制,并且容易产生沉淀,使用相对不太方
便,并且也容易导致检测结果不太稳定。本TMB显色液采用了最新的TMB显色技术,把所有的相关试剂全部配制在一个溶液中,仅由单一溶液组成,简化了操作步骤,并且使检测结果更加稳定可靠。
&&&&TMB,即3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine,是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或
其他适当过氧化物酶的催化下,TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。
&&&&辣根过氧化物酶催化TMB显蓝色后可以使用2M&H2SO4终止反应。加入硫酸后,溶液呈黄色,此时可以在
450nm测定吸光度。
&&&&本试剂盒最常用于ELISA检测,也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
&&&&用于ELISA检测时,每个样品通常使用0.2毫升显色液,一个包装的本产品共可以检测约500个样品。
包装清单:
TMB显色液(ELISA HRP显色用)
保存条件:
&&&&4℃避光保存,一年有效。
注意事项:
&&&&TMB对人体有刺激性,请注意适当防护。
&&&&如果发现TMB显色液出现混浊或颜色变成蓝色,应该停止使用。
&&&&为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 对于ELSIA检测:
&&&a. 参考ELISA试剂盒的实验步骤,在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每
&&&&&&次3-5分钟。
&&&b. 洗涤完毕后,去除洗涤液,加入200微升TMB显色液。
&&&c. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时),直至显色至预期深浅。
&&&d. 直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入50微升2M H2SO4终止反应,随后在450nm测定吸光度。
2. 对于在96孔板内进行的其他适当检测 (例如检测组织或细胞样品内源性的过氧化物酶):
&&&a. 直接在96孔板内每孔加入10-20微升样品。
&&&b. 加入200微升TMB显色液。
&&&c. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时),直至显色至预期深浅。
&&&d. 直接在370nm或620-650nm测定吸光度。或加入50微升2M H2SO4终止反应,随后在450nm测定吸光度。
常见问题:
1. 背景显色太深。
&&&a. 如果背景(没有样品的对照)显色太深,一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭,例如选购适当的封
&&&&&&闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面,请选购经过适当吸附的二抗,以减小
&&&&&&二抗的非特异性吸附。
&&&b. 可以考虑缩短显色时间,或降低二抗浓度。另外,选择适当强度的洗涤液,或延长洗涤时间也会有所
&&&&&&帮助。
2. 没有显色或显色太弱。
&&&a. 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果,滴一滴稀释二抗在离心管内,检测二抗是否可以被正常
&&&&&&显色。
&&&b. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系,例如使用生物素检测体系。
&&&c. 可以适当延长显色时间。
&&&d. 如果上述改进不能获得预期效果,可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。
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使用本产品的相关论文:
1. Guan KL, Yu W, Lin Y, Xiong Y, Zhao S.
&&&Nat Protoc. ):1583-95. Epub 2010 Sep 2.
2. Du G, Ye L, Zhang G, Dong Q, Liu K, Tian J.
&& J Cancer Res Clin Oncol. 2012 Jun 15.
3. Xiao G, Tang L, Yuan F, Zhu W, Zhang S, Liu Z, Geng Y, Qiu X, Zhang Y, Su L.
&& PLoS One. 2013 Sep 16;8(9):e73571. doi: 10.1371/journal.pone.0073571. eCollection 2013.您所在位置: &
&nbsp&&nbsp&nbsp&&nbsp
正交试验优化ELISA检测中TMB%2fHRP显色体系的研究论文.pdf5页
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