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【优秀毕业论文】血浆beta-D-葡萄糖检测用于系统性真菌感染诊断的实验研究.pdf 55页
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第三军医大学
硕士学位论文
血浆beta-D-葡萄糖检测用于系统性真菌感染诊断的实验研究
姓名：廖军
申请学位级别：硕士
专业：皮肤病及性病学
指导教师：郝飞
血浆beta-D-葡聚糖检测用于系统性
真菌感染诊断的实验研究+
近年来，随着抗生素及免疫抑制剂的广泛应用，系统性真菌感染发病
率呈逐年增高趋势。(由于真菌感染常常发生在重症患者中，且成为重要的
致死原因之一，因而系统性真菌感染的早期快速诊断对于患者的及时治疗
显得非常重要。系统性真菌感染本身的特征，以及真菌体外生长特性，使
得常规体外分离培养真菌难以满足临床诊断的需要。＼目前，针对患者体液
中真菌组成成分和代谢产物进行系统性真菌感染的诊断已做了较多工作，
统性白念珠菌感染和系统性曲霉感染模型的基础上，采用G试验检测血浆
(1一&3)一beta—D一葡聚糖水平，并将其与组织病理和常规真菌分离培养进行比
较，同时腹腔内注射伊曲康唑治疗系统性白念珠菌感染动物，以评价其对
系统性真菌感染的早期诊断及疗效监测价值。
／研究发现，系统性白念珠菌感染模型和系统性曲霉感染模型的血浆
beta．D．葡聚糖浓度随感染时间的延长而逐渐增高，检测两种真菌感染的敏
感性为80％和70％，特异性为100％年n100％，阳性预测值为100％和100％，
阴性预测值为55．6％和45．4％。感染组与对照组存在显著性差异，阳性结
果明显早于组织病理。以伊曲康唑50mg／kg行腹腔内注射治疗系统性白念
珠菌感染，血浆beta．D．葡聚糖浓度随治疗时间的延长而降低，各组间存在
显著性差异。用G试验方法检测溶血后的血标本以及肾衰透析动物血标本，
结果示其血浆beta—D一葡聚糖明显高于20pg／ml，G试验反应呈假阳性，提
示溶血、肾衰透析可影响G试验检测结果。
重庆市科委应用基础项目
将实验动物的肝、肾及肺等组织匀浆后接种于无菌沙堡氏琼脂平皿培
养基上，接种5天后，测量并记录菌落圈大小。菌落圈直径越大，提示内
脏含有越多真菌。结果显示，随着体内真菌感染程度的增加，各内脏组织
中的真菌含量也在增加，提示血浆(1。&3)一beta．D．葡聚糖水平可反映体内真
菌感染的数量。
结果提示，利用G试验早期诊断系统性真菌感染，能够较早得到阳性
结果，且真菌感染严重程度与血浆(1．&3)．beta．D．葡聚糖浓度呈平行关系。
因此，我们认为利用G试验检测血浆(1．&31一beta—D一葡聚糖的方法对于系统
性真菌感染的早期诊断有重要价值，并可用于疗效的监测。＼
关键词：G试验；组织病理；真菌培养；白念珠菌
曲霉；系统性真菌感染
ResearchaboutDetectionofPlama
Laboratory
beta--D·-glucanDiagnosis
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fish检测快诊断曲霉菌感染的临床价值
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华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
FISH 检测快速诊断曲霉菌感染的临床价值
华中科技大学同济医学院附属协和医院儿科 430022
硕士研究生： 肖 晶
师： 孟 浦 副教授
目的 曲霉菌是自然界广泛存在的真菌，是引起侵袭性真菌感染（IFI ）的
主要病原菌。IFI 多见于免疫受损人群，死亡率较高，而临床缺乏快速诊断方法，
其实验室早期诊断至关重要。本研究旨在探讨荧光原位杂交技术（FISH ）在检
测系统性曲霉感染临床标本的可行性和特异性，以期早期诊断真菌感染。
方法 实验组为27 例可疑真菌感染的福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片，
阳性对照为标准曲霉菌，阴性对照为未感染曲霉菌的组织石蜡切片，空白对照是
不加探针的标本切片。将石蜡切片进行二甲苯脱蜡、系列乙醇水化。以上分组采
用经地高辛末端标记的与曲霉菌18S rRNA 序列互补的18S-1 寡核苷酸探针分别
进行FISH 检测，同时对组织石蜡切片进行HE 及PAS 染色。
结果 实验组中14 例标本可见阳性杂交信号，杂交信号为绿色颗粒状荧光；
例未见杂交信号。阳性对照显示菌丝壁及菌丝内杂交信号呈绿色的颗粒状，
呈局灶性或散在分布。阴性对照及空白对照未见杂交信号。HE 及PAS 染色可疑
真菌感染分别为23 例和27 例，部分组织显示真菌的菌丝体，HE 染色菌丝呈现
红色，着色不良，PAS 染色菌丝呈品红色，不能鉴定真菌种属。
讨论 本研究利用针对曲霉菌靶序列的探针特异地检测出组织石蜡切片中
的曲霉菌，其阳性信号清晰可见，可确定曲霉菌感染，因此可根据不同种属曲霉
菌设计出DNA 序列特异性探针，明确各种曲霉菌种。而HE 及PAS 染色只能从
形态学上观察真菌形态，易漏诊、误诊，更不能鉴别真菌菌种。在进一步的研究
中有望应用该FISH 方法快速检测各种临床标本中的真菌感染，可以作为IFI 早
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
期诊断的一种新策略，并协助合理选用抗真菌药物。
关键词 曲霉菌；荧光原位杂交；侵袭性真菌感染；早期诊断
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
The clinical Value of FISH in the Detection of Aspergillus Infection
for rapid Diagnosis
The object of this study is to evaluate the application of fluorescence
in situ hybridization (FISH) technology in the diagnosis of pediatric invasive fungal
infections.
widespread
Aspergillus
pathogenicbacteria of invasive fungal infections (IFI). Not only is IFI more common
immunocompromised
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侵袭性曲霉菌感染早期诊断的实验研究与临床应用
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常见深部机会致病性真菌分子流行病学研究进展
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