Captopril_LCMS_13195_MedChemExpress-学路网-学习路上 有我相伴
Captopril_LCMS_13195_MedChemExpress
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贡献&责任编辑：李志 &时间: 7:33:42
刀柄的各种刀柄介绍答：图1.5为Sandvik公司生产的CAPTO刀柄。这种刀柄的结构不是圆锥形,而是三棱圆锥,其棱为圆弧形,锥度为1/20,并且空心短锥结构,采用锥面与端面同时接触定位。三棱圆锥...【化学专业英文】captodativeeffect翻译成中文是...问：就是那个”一个供电子基和一个吸电子基同时连在自由基上会让自由基十分稳...答：国内教科书中好像没有出现过，在Carey的AdvancedOrganicChemistry中有，在自由基那一章中有相对详细的介绍，你可以去参考下，就是推拉电子效应，翻译的话可以翻译成“推拉效应”CAPTO刀具系统的刚性值是多少，网上有个17KN位移0....答：呵呵，你刚好遇上我这个专业的。你说的这个是CAPTO的C5的接口，是抗弯强度，作用点是60mm。相对于其它接口形式，Capto确实是最可靠的，但是17KN也是最大的施加力，超过这个值刀柄就会有永久变形，也就是报废了。当然，在这个力作用下，很多刀...Captopril_LCMS_13195_MedChemExpress(图2)Captopril_LCMS_13195_MedChemExpress(图4)Captopril_LCMS_13195_MedChemExpress(图6)Captopril_LCMS_13195_MedChemExpress(图8)Captopril_LCMS_13195_MedChemExpress(图10)Captopril_LCMS_13195_MedChemExpress(图12)(Captopril_LCMS_13195_MedChemExpress图1)captoderm中文翻译为什么？答：没有captoderm这个单词，比较相近单词是：captor翻译成中文是：捕获者；俘虏者captor英['kæptə]美['kæpt防抓取，学路网提供内容。MS Report from Instrument: HY-LCMS-02蛋白质过Capto-MMC纯化问题求助答：无题防抓取，学路网提供内容。capto刀具系统还是伊斯卡的专利吗答：winxp+ie7+office2003是最初的平台，开发最早，最稳定，很多问题都已经解决；现在Cpc的最新更新已经可以在windows8+office2010机器上运行了，不过问题相对比较多。最好把你用的什么系统，无法运行的提示说出来。captoderm中文翻译为什么？答：没有captoderm这个单词，比较相近单词是：captor翻译成中文是：捕获者；俘虏者captor英['kæptə]美['kæptɚ]n.捕获者；俘虏者例句：Hiscaptorhadnotsearchedhimquiteasthoroughlyashemighthave.他的...
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【求助】关于蛋白纯化的pH问题求教
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这个帖子发布于3年零197天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
平时培养细菌的时候所用的LB培养基的pH基本在7.0左右。一直以来用Ni柱纯化带有6his标签的各种蛋白，最近正在纯化一个蛋白，但遇到了挂不上柱的麻烦，求高手赐教。以下是基本信息：1.目的蛋白的pI在8.9左右。
2.纯化时所用的缓冲液及洗脱液的pH在8.0左右。根据这两条信息，大神们知道挂不上Ni柱的原因吗？上清上柱的时候流速很慢，应该达到了让它们相互结合所需的时间，可是结果还是90%的都流出了。郁闷ing。泳道2是超声上清，泳道三是过NI柱的流出液，最粗的条带即是目的蛋白。请大神们指点迷津…………
不知道邀请谁？试试他们
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NI柱属于亲和柱，对于pH只有很低时才会挂不上柱，你的目的蛋白如果是可溶的上清，你的结合缓冲液没有给出信息，咪唑浓度尽量低点。还有挂不上也有可能是蛋白折叠把HIS包裹在内部了，可以尝试换到蛋白另一端进行表达
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huguojun1330 NI柱属于亲和柱，对于pH只有很低时才会挂不上柱，你的目的蛋白如果是可溶的上清，你的结合缓冲液没有给出信息，咪唑浓度尽量低点。还有挂不上也有可能是蛋白折叠把HIS包裹在内部了，可以尝试换到蛋白另一端进行表达我的结合缓冲液就是用20mM Tris-HCl、氯化钠配制的，pH8.0。我看一些资料上讲述Ni柱的纯化原理当中有一条是：组氨酸（His）的R基上带有1个咪唑基团，咪唑基团pKa值在6左右，在pH＞7的条件下，咪唑基团带负电，容易与Ni离子结合。我的目的蛋白的等电点pI=8.91，而当缓冲液的pH<蛋白的等电点pI时，蛋白带正电，那么我的蛋白岂不是和Ni离子相排斥了？在这种组氨酸亲和Ni离子，整个蛋白排斥Ni离子的情况下，是不是我的蛋白与Ni柱的结合能力就减弱了呢？3Q
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蛋白纯化些常见问题总结
蛋白纯化些常见问题总结
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蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了下几个蛋白纯化实验中的遇见的问题及其解决方式。
1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。
请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50～60%左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的条件下切割完后目的蛋白会沉淀，我用0.5%CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的蛋白疏水性比较强。
既然是疏水性很强你可以加点甘油或者乙二醇降低极性，这样溶解就会好得多，此外你也直接加2%的PEG这样也降低极性，同时保护你的蛋白，你再做纯化就可以了，我以前遇到这样的蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG5000，这样的情况下蛋白还是活性回收率很高，我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好，你失去活性你可以监测一下提取，纯化，酶切到底哪里失去了活性，这样更容易解决你的问题。还有注意缓冲液PH值，看看改变它对溶解度有没有影响。蛋白有沉淀那你可以稍微把蛋白的浓度降低点，这也是个办法。
2)请问有没有合成过配体为FMN的亲和胶?
亲和的填料合成过20来种，你是希望用它来纯化某种脱氢酶吗，我看FMN可偶联的有限，倒是FAD有活泼的氨基好偶联，何况它们几乎是同一个辅酶，你是不是考虑把FAD连上去。当然FMN的结构上也有个仲胺，可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上，而溴化氰活化或别的活化的介质都不大好，因此我觉得这个没有什么问题。
此外如果是以FMN为辅酶的，那我还可以建议你试试蓝色琼脂糖凝胶，因为它的配基的结构和FMN的三个环很相似，它能纯化不少脱氢酶和激酶。
我已经给你发了相关一些偶联的材料，请查收，现在一般要自己合成亲和填料，有很多公司都提供活化好的介质，自己偶联就可以，其中比较常用的有溴化氰琼脂糖凝胶，环氧琼脂糖凝胶，氨基琼脂糖凝胶，羧基琼脂糖凝胶，活化酯琼脂糖凝胶，以及巯基琼脂糖凝胶等，但是如果是小分子的配基最好选择有3-10碳作为手臂的活化介质为好，此外也曾经有文献报导固定辅酶时，偶联位置不同，选择性有差别，因此你可以选择自己适合的活化介质。
不同的活化的介质对偶联的配基有不同的要求，所以要对自己的配基了解比较清楚就可以选择合适的活化介质。
我一般在合成的时候大多选择环氧琼脂糖凝胶，它能应用的范围广氨基巯基羟基都可以，而且合成的介质刚性好，非特异吸附少，所以不需要特殊处理未反应基团。此外键合的键很稳定，配基脱落少。我觉得是不错的选择。
包涵体的蛋白复性做得不多，但是我记得有个哥们说最管用的办法也是最简单的方法，他说在复性的时候尽量别想什么太高难的技术，那些时髦但不一定好用，常用的有透析复性，稀释复性，包括国外的专家也这么说。我觉得有时候开始摸不出来未必就是方法不行，关键要经常改变条件。
层析复性很时髦，但是真正能用的不很多，我觉得蛋白这东西难就在于大多都不相同，所以关键要多看文献，多琢磨自己蛋白的特性，多尝试。
3)Sephadex G-25(medium)柱脱盐时，盐浓度太高对柱效有影响吗?若有，一般对盐浓度限度如何?
大家别客气，除盐对于浓度应该也是有一定的限制的，同样的样品盐浓度高的自然要比浓度低的要在柱子上走的峰要宽些，相对需要的柱子的分辨率也要高点，但是在正常的范围如1-2M应该影响不大，不过要除得很干净还是尽量少上点样品，我觉得上样的体积毕竟比浓度的影响更大。
4)我的蛋白17kd左右，能跟肝素亲和，一般用离子交换和亲和层析纯化，现在我用聚乙二醇修饰它，分子量增加5000左右，修饰率不可能达到100%，请问修饰后能用什么纯化方法可以把修饰的和未经修饰的分开?(当然修饰后还残留有聚乙二醇，这个小分子也要除掉)
他们大多用凝胶过滤，我觉得这也不错的做法，毕竟PEG是链状的分子，在柱子上和普通蛋白行为不一样，修饰度越高那么出峰也越后，因此你的蛋白选择sephadex G50试试，它的范围在，应该是不错的选择。此外PEG是个疏水性的链，修饰后的蛋白疏水性增强，修饰度越高，疏水性越强，可以用这个原理分离。离子交换也可以选择，因为同样道理，修饰度越高，电荷被屏蔽也越多，电荷也越少，因此应该修饰度越高越先出。亲和也离子交换一样的道理，你可以试试，你手头的亲和能不能分开，你在这几个方法里选择看哪个更经济好用就可以。
5)我是个新手，谢谢楼主给我解决了许多难题。
我有个问题困绕很久，从细菌中提取酶，好象用常规的方法(超声波破壁，缓冲液提取)，总是拿不到我要的蛋白。是不是这种蛋白也是疏岁水性较强，需要加助溶剂才能提取出来?另外，我是不是也可以加点甘油或者PEG来提取?
其实这个问题我觉得是这样的，既然你是提取那肯定是有沉淀和上清，你的目标蛋白的分子量你是应该知道的，那么跑电泳先看它到底是在上清还是沉淀里，剩下的问题你再解决如何提取。
对于不同的酶要看酶稳定如何，你可以用不同的PH去提取，我曾经提取一个酶用水就是提取不出来，需要用盐才能提取出来，多试试，设计个方案，这样才能解决问题，所以不一定加甘油就管用，你还得注意破碎本身会不会有问题，倒回去做做也许能找到真正的原因。有什么问题继续探讨。
6)HPLC是用来分析检测or分离纯化?
如果可以用来纯化，上样量那么小有什么意义呢?
如果是用来分析检测，怎样指导以后的分离纯化工作呢?
HPLC既可以做分析也可以做制备，纯化上样量小，这样分离效果好，就可能得到很纯的物质，同时配合质谱等就何以得到很多单一蛋白的特性包括序列等，这些纯度高的组分是用一般的纯化方法做不到的。HPLC重现性好，定量准确，所以也可以用于定量和定性，是分析中不可缺少的工具。
分析出来后如果这个物质很稳定，直接线性放大就可以做大规模的制备，因此摸好了分析的条件也就相应有了制备的条件。
推荐书籍：《蛋白纯化与实验鉴定指南》、《生物工程下游技术》、《酶工程》、《酶制剂工业》
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【求助】FPLC过分子筛问题
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这个帖子发布于7年零88天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
今天过了FPLC分子筛，我的蛋白分子量24KD，本来应该在10-12ml左右出峰，结果蛋白没有分开，一直到21ml处还在出峰，如图
开始以为是蛋白降解了，然后取了20ml处出峰的样品跑了个SDS-PAGE胶，结果条带显示是我要的蛋白。我的蛋白怎么会拖到这么后面还在出峰，这是怎么回事啊？大家支支招啊！谢谢了！！
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多大的柱子？填料类型?层析buffer? 上样体积？
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分子筛分离蛋白不仅与蛋白的分子量有关还与蛋白的空间构象有关
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sunfound说的对。假如你的目的蛋白空间结构折叠成了球形，那么在分子筛上表现的分子量会比直链状态小的多，想想分子筛的原理，这个就好理解了。你可以适当降低上样量，18ml峰和20ml峰之间的峰谷会降的更低，各峰的纯度会有提高。或者加大洗脱流速，低分子量的物质分离效果会更好。我记得Superdex预装柱的说明书上是这么说的，你可以再查一下。祝顺
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蛋白质分离纯化实验疑难问题与解答
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