转基因小鼠模型的建立(SOP).pdf
扫描二维码，下载文件到手机
当前文件信息
浏览：231次
您的VIP会员已过期，是否续费？
用户应遵守著作权法，尊重著作权人合法权益，不违法上传、存储并分享他人作品。举报邮箱：
京网文[0号 京ICP证100780号请选择栏目：
当前位置： &&&&&& > 正文
转基因动物模型
　来源：&&　　 |
　　转基因动物在免疫毒理学中的应用可以为外源化学物的免疫毒性的检测和免疫毒作用机制研究提供重要的工具。如利用转基因技术可以建立对免疫毒物更为敏感的动物免疫，用于免疫毒性筛检和试验；通过对某个或某些目的基因的上调或下调、Knock-out或Knock-in，可以了解这些基因在免疫应答中的作用机制，或外源化学物的免疫毒作用机制等。值得注意的是，医.学教育网搜集整理人工转入的基因产物与内源性基因产物蛋白或多肽分子可能存在差异，两者介导的免疫学效应也可能并不完全相同。因此，虽然转基因动物可以作为免疫毒性检测和机制的重要工具，但并不能替代用常规方法进行的免疫毒性试验。
2017公卫执业/执业医师网络辅导班次介绍
<a href="/yishizigekaoshi/kaoshidongtai/ya.shtml" target="_blank" title="2017年医师资格考试现场报名缴费通知汇总|
1、凡本网注明“来源：医学教育网”的所有作品，版权均属医学教育网所有，未经本网授权不得转载、链接、转贴或以其他方式使用；已经本网授权的，应在授权范围内使用，且必须注明“来源：医学教育网”。违反上述声明者，本网将追究其法律责任。
2、本网部分资料为网上搜集转载，均尽力标明作者和出处。对于本网刊载作品涉及版权等问题的，请作者与本网站联系，本网站核实确认后会尽快予以处理。
&#12288;&#12288;本网转载之作品，并不意味着认同该作品的观点或真实性。如其他媒体、网站或个人转载使用，请与著作权人联系，并自负法律责任。
3、本网站欢迎积极投稿
4、联系方式：
编辑信箱：
电话：010-
　|　　|　　|　调控原理及其在转基因小鼠模型上的应用_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
调控原理及其在转基因小鼠模型上的应用
上传于|0|0|暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用1下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩2页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢您现在的位置：&&&
转基因小鼠艾滋病模型
来源：《人类疾病动物模型》
作者：刘恩岐 李亮平 师长宏
责任编辑：wlladmin
摘要：转基因小鼠艾滋病模型
非人灵长类动物由于饲养成本高，且需要特殊的饲养环境，更重要的是目前针对灵长类动物的试剂很少，这些因素都限制了其在动物模型研究中的应用。相比较而言，啮齿类动物体型小、易于饲养、试剂来源方便等因素决定了其在动物模型研究中有独特的优势。
【造模机制】小鼠对HIV-1病毒不易感， HIV-1病毒不能在其体内增殖。产生这种现象的原因一是小鼠和人的CD4分子序列有差异，导致 HIV-1囊膜蛋白不能结合到鼠CD4+T细胞。也有研究发现HIV-1病毒序列中长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)介导的转录活性在鼠源性细胞活性较低，这也是导致HIV-1病毒不能感染小鼠的原因之一。此外，HIV-1病毒的一些辅助调控蛋白，如，核输出信号分子Rev在鼠源性细胞中的功能下降明显，不能有效介导HIV-1mRNA出核，从而影响病毒蛋白翻译和包装。随着转基因技术的发展，将HIV-1病毒受体CD4及其辅助受体CCR5和 CXCR4基因融合后显微注射到小鼠受精卵细胞，可制备表达人CD4-CCR5/CXCR4转基因小鼠，该小鼠由于表达HIV-1病毒受体及辅助受体，因而对 HIV-1病毒的易感性提高，感染后可表现出AIDS部分症状。将HIV-1病毒全序列或结构基因/调控基因克隆后通过显微注射方法也可建立表达 HIV-1特异蛋白的转基因小鼠。
【造模方法】通过显微注射方法建立的表达 HIV-1病毒全序列或结构基因/调控基因的转基因小鼠可直接用于抗HIV药物筛选、疫苗评价等相关研究领域。300 TCID50的HIV-1病毒脾内接种或8000 TCID50 HIV-1病毒静脉接种CD4-CCR5转基因小鼠，2～4周后动物脏器中可检测到HIV-1病毒DNA。
【模型特点】
1．表达HIV-1病毒序列转基因小鼠 &HIV-1前病毒DNA序列显微注射到受精卵细胞后制备出可用于AIDS研究的转基因小鼠，子代动物中50％～80％表现为表皮增生、淋巴炎症、脾大及肺淋巴细胞浸润等病理表现，皮肤、脾脏及淋巴结中可检测到HIV病毒颗粒。也有研究者用缺失Gag-Pol基因的HIV-1病毒基因序列制备AIDS转基因小鼠模型，该小鼠肾脏中可检测到HIV-1的特异性表达，后期小鼠可发展为有蛋白尿症状的肾病表现，致死率较高，因此该小鼠用于HIV-1引起的肾病模型研究。表达复制缺陷性HIV-1的转基因小鼠也可发展有进行性肾小球硬化为表现的严重肾病综合征。表达Rev蛋白的转基因小鼠肾小球硬化，表皮增生，小鼠皮肤组织中也可检测到病毒RNA。这些模型是研究HIV相关肾病的良好模型。研究发现用MMTV启动子代替HIV启动子后，Env蛋白的gp160、gp120和Gag蛋白的p55、p24在转基因小鼠体内表达上调，该现象尤其在哺乳期雌性小鼠中表现尤甚。
2．HIV-1 LTR转基因小鼠 &机体感染HIV-1后有较长的潜伏期，临床症状出现较晚，这与病毒转录活性密切相关。研究发现一些外界因素(如细胞因子、紫外线等)及具有转录活性的调控元件可加速病毒的致病过程，基于此研究者用HIV基因中具有转录活性的LTR制备转基因小鼠，HIV-1 LTR与报告基因大肠埃希菌氯霉素酰基转移酶(chloramphenicol transferase,CAT)或人抗胰蛋白酶基因(&-1 antitrypsin，&-1-AT)融合后建立了转基因小鼠，该小鼠眼组织中CAT表达升高5倍，血清中&-AT表达上调10～20倍。在外界因素作用下，如紫外线照射后，皮肤组织中CAT可上调30倍以上。表达HIV-1 LTR Tat的转基因小鼠可在皮肤组织中检测到LTR Tat RNA的表达，且在紫外线B或C作用下，皮肤LTR Tat RNA表达水平可达10倍以上。HIV-1感染后可引起神经系统病变，如痴呆综合征等(AIDS dementia complex)，且HIV-1病毒能否在神经元细胞中复制也不清楚，HIV-1 LTR- LacZ转基因小鼠体内多个脏器均可表达LacZ RNA或蛋白，尤其是脑、视网膜及中枢神经元细胞检测到LacZ RNA表达，这些结果表明HIV-1可在神经元细胞复制。
3．HIV调控蛋白转基因小鼠
(1)Tat：Tat是HIV复制过程中重要的调控蛋白，具有转录活性，有研究者认为Tat活性有一定的种属特异性，其转录活性只能在人源性细胞中具有，而在鼠源性细胞中不具备此功能。但表达 HIV-1 LTR Tat的转基因小鼠表明Tat活性物种属特异性，小鼠可产生皮肤损伤的临床表现，这点与 AIDS患者卡波西肉瘤极为相似，皮肤病变及增生在雄性小鼠中可维持一年以上，超过18个月的雄性Tat转基因鼠肝癌发生率大于其他动物。
(2)Nef：Nef蛋白是一种负调控因子，能够增强病毒的复制能力和感染性。Nef基因以人CD2 T细胞特异性调控元件及其LCR调控后制备的转基因小鼠可明显降低外周血CD4+T细胞数量。此外， Nef基因在鼠T细胞受体V&8.3的&链增强子/启动子控制下制备的转基因鼠CD4+T细胞数量下降明显、胸腺萎缩、脾及淋巴结肿大，多数动物在4～6个月内死亡。
4．表达CD4及CCR5和CXCR4转基因小鼠 &CD4及CCR5和CXCR4是HIV病毒受体和辅助受体，前已论述由于人CD4、CCR5和CXCR4与小鼠的这些分子序列差异可能导致小鼠对HIV-1不敏感。表达人CD4及其辅助受体CCR5的转基因小鼠外周血单核细胞及脾细胞中可检测到巨噬细胞嗜性HIV毒株，脾及淋巴结均可检测到HIV
DNA，但病毒不能在这些组织中增殖。表达人CD4及CXCR4转基因小鼠对T细胞嗜性HIV较为敏感，外周血中CD4+T细胞数量下降明显。
【模型评估及应用】 &目的基因通过显微注射或其他转基因方法导入到受精卵细胞后，可通过 PCR或Southern blot方法检测目的基因在动物体内表达。转基因小鼠常用于HIV发病机制研究、抗 HIV-1药物筛选及疫苗学研究等。
上一篇：[ 04-20 ]
下一篇：[ 04-22 ]
欢迎您推荐或发布相关实验技术、实验攻略、实验经验分享等。}