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你可能喜欢PI染色法（活细胞染色）检测细胞凋亡【染料及试剂】（1）&含0.1%TritonX-100的缓冲液（pH7.4）（2）&PI染液:将PI（碘化丙啶）溶于含0.1%TritionX-100的中，终浓度为50μg/ml，含RNase&100μ...
PI染色法（活细胞染色）检测细胞凋亡
【染料及试剂】
（1） 含0.1%TritonX-100的缓冲液（pH7.4）
（2） PI染液:将PI（碘化丙啶）溶于含0.1%TritionX-100的中，终浓度为50μg/ml，含RNase 100μg/ml，避光保存。
【操作方法】
制备凋亡细胞悬液，浓度为106/ml；
取1ml的细胞悬液，加10μl的PI染液混合，作用10min；
加入5ml ，1500r/min离心5min，弃上清，重复洗涤2次；
重悬细胞，滴片并用盖玻片封片；
【结果判断】
在下选用大于536nm的激发光观察：正常活细胞胞核被PI着染呈红色；早期凋亡细胞胞核浓缩，染色加深，或核染色质聚集于核膜一边，呈新月状；晚期凋亡细胞胞核碎裂成大小不等的原形小体，并被细胞膜所包绕，即凋亡小体。
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易生物VIP企业推荐细胞染色方法_百度文库
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细胞染色方法
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【求助】PI染细胞核，整个细胞全是红色的
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这个帖子发布于2年零31天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
刚做了细胞染色，是用鬼笔环肽和PI双染细胞。共聚焦显微镜下，整个细胞全被PI染成了红色这样子的，怎么会这样？？求解答啊
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对于活细胞染色来说。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。Hoechst 33342可以穿透细胞膜，染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。PI介绍3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于检测，英文全称是Propidium Iodide。它是一种的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。分 子 式: C27H34I2N4分 子 量: 668.39外
观: 红棕色粉末别
名: PI储存条件: -20℃
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摘自碧云天：DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是经过精心优化几乎适用于所有常见细胞和组织细胞核染色的染色液。
DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也称DAPI dihydrochloride，分子式为C16H15N5·2HCl ，分子量为350.25 ，CAS Number 。
DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。
本DAPI染色液可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。
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老师说出了问题的关键 细胞膜受到破坏 原因在于买的PI是做流式细胞仪用的 里面含有破膜剂
以为可以进行染色 没有关系 后来才知道这个原因的PI即使做流式也是不需要破膜剂的吧？因为破膜剂破坏细胞膜，PI都能进去，就无法区分开细胞膜完整的细胞和破损的细胞了，那么PI染色也就没有意义了。个人这样觉得，不知道你们说的买的做流式的PI里面有破膜剂是什么意思
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PI浓度太高。还有一个可能，就是细胞膜已经破坏，PI可以进入细胞内。
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cheff0412 edited on
wj_21cn PI浓度太高。还有一个可能，就是细胞膜已经破坏，PI可以进入细胞内。 PI的浓度是10ug/mL，不算很大吧想不通细胞膜是怎么破坏的。我的实验方法是这样的：1，4%多聚甲醛固定半个小时，再用鬼笔环肽染色1个小时
2：PBS冲洗3次，10ug/mL的PI染色10分钟，PBS冲洗2次
3：甘油封片求大神指点
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你的鬼笔环肽带的是什么颜色的荧光? 能看到吗？
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意境 你的鬼笔环肽带的是什么颜色的荧光? 能看到吗？ 绿色的，肉眼肯定是看不到了。在显微镜下可以看到，很漂亮
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我理解你是为了染细胞核的，你应该是用DAPI。PI是标记死细胞和凋亡晚期的细胞。如果你细胞固定了，都染出来不奇怪的！
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nogojin 我理解你是为了染细胞核的，你应该是用DAPI。PI是标记死细胞和凋亡晚期的细胞。如果你细胞固定了，都染出来不奇怪的！ 固定细胞之后，PI把整个细胞都能染红么？好奇怪呀好吧，初次接触生物，还请大神帮忙解答
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路人甲-看帖不回
绿色的，肉眼肯定是看不到了。在显微镜下可以看到，很漂亮 建议不要用pi做共聚焦，用DAPI或者hochest比较好。
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建议不要用pi做共聚焦，用DAPI或者hochest比较好。 我能不能问为什么？
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google一下就知道了
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nogojin google一下就知道了 谷歌打不开……
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还没看到过pi核染色，知道pi用于流式测细胞周期和凋亡。前两天看到dapi核染色，做的共聚焦，不错。
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摘自碧云天：DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是经过精心优化几乎适用于所有常见细胞和组织细胞核染色的染色液。
DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也称DAPI dihydrochloride，分子式为C16H15N5·2HCl ，分子量为350.25 ，CAS Number 。
DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。
本DAPI染色液可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。
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对于活细胞染色来说。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。Hoechst 33342可以穿透细胞膜，染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。PI介绍3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于检测，英文全称是Propidium Iodide。它是一种的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。分 子 式: C27H34I2N4分 子 量: 668.39外
观: 红棕色粉末别
名: PI储存条件: -20℃
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我能不能问为什么？因为pi的发射波谱太宽容易与其他信号干扰，尤其是与绿色荧光干扰。上面有老师给出各种染料的信息，你可以好好看看~
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意境 因为pi的发射波谱太宽容易与其他信号干扰，尤其是与绿色荧光干扰。上面有老师给出各种染料的信息，你可以好好看看~ 谢谢大神，跪谢
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nogojin 摘自碧云天：DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是经过精心优化几乎适用于所有常见细胞和组织细胞核染色的染色液。
DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也称DAPI dihydrochloride，分子式为C16H15N5·2HCl ，分子量为350.25 ，CAS Number 。
DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。
DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。
本DAPI染色液可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。 nogojin老师，你好，我用DAPI+PI涂片 荧光染色测凋亡，但是merge后问题就出现了。为什么细胞全然上了？哪儿出问题了？（药物处理后的瘤细胞，但绝对没有都死亡）**作步骤：细胞消化，离心，转移至小EP管离心后加入荧光染料混合液100ul（终浓度PI为10ug/ml，DAPI为2ug/ml，PBS混匀），避光孵育15min，1ml PBS混匀后离心2次（1000rpm，5min），滴至载玻片，涂片，镜下观察。急盼老师解答问题。
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您好，请问你这样的问题后来是怎么解决的呢？我现在也遇到这个问题了，急求解决方案，请问您能告知吗？十分感谢inter158
nogojin老师，你好，我用DAPI+PI涂片 荧光染色测凋亡，但是merge后问题就出现了。为什么细胞全然上了？哪儿出问题了？（药物处理后的瘤细胞，但绝对没有都死亡）**作步骤：细胞消化，离心，转移至小EP管离心后加入荧光染料混合液100ul（终浓度PI为10ug/ml，DAPI为2ug/ml，PBS混匀），避光孵育15min，1ml PBS混匀后离心2次（1000rpm，5min），滴至载玻片，涂片，镜下观察。急盼老师解答问题。
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@ 我没有做过类似的实验，但是从步骤上看，能否先进行染色，染色完成之后，洗掉染色液，然后再进行后续的消化，离心重悬等。从原理上讲，PI只是染色哪些受损的细胞，DAPI是全染色。既然出现PI全部染色的问题，那么就可能是细胞受损了。所以我觉得试试在细胞消化之前就进行染色，可能会好一些。非专业，供参考！祝好运
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wanliheng @ 我没有做过类似的实验，但是从步骤上看，能否先进行染色，染色完成之后，洗掉染色液，然后再进行后续的消化，离心重悬等。从原理上讲，PI只是染色哪些受损的细胞，DAPI是全染色。既然出现PI全部染色的问题，那么就可能是细胞受损了。所以我觉得试试在细胞消化之前就进行染色，可能会好一些。非专业，供参考！祝好运 老师说出了问题的关键 细胞膜受到破坏 原因在于买的PI是做流式细胞仪用的 里面含有破膜剂
以为可以进行染色 没有关系 后来才知道这个原因的
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老师说出了问题的关键 细胞膜受到破坏 原因在于买的PI是做流式细胞仪用的 里面含有破膜剂
以为可以进行染色 没有关系 后来才知道这个原因的PI即使做流式也是不需要破膜剂的吧？因为破膜剂破坏细胞膜，PI都能进去，就无法区分开细胞膜完整的细胞和破损的细胞了，那么PI染色也就没有意义了。个人这样觉得，不知道你们说的买的做流式的PI里面有破膜剂是什么意思
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所以就是说 因为这个PI导致实验失败了。
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sammyue PI即使做流式也是不需要破膜剂的吧？因为破膜剂破坏细胞膜，PI都能进去，就无法区分开细胞膜完整的细胞和破损的细胞了，那么PI染色也就没有意义了。个人这样觉得，不知道你们说的买的做流式的PI里面有破膜剂是什么意思
PI导致实验失败。所以买的时候一定得注意，做流氏的PI不能含有破膜剂。
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PI导致实验失败。所以买的时候一定得注意，做流氏的PI不能含有破膜剂。那请问你们用的什么牌子的流式凋亡试剂盒呢？做流式的时候是正常的吗？
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sammyue 那请问你们用的什么牌子的流式凋亡试剂盒呢？做流式的时候是正常的吗？
时间有点长，国产的，不贵，具体忘了。做流氏没有问题。
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