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大肠杆菌不同菌株的基因型解读
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你可能喜欢大肠杆菌表达菌株JM109,Top10,Rosetta各自有什么特点啊,如何选择?
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1：DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株.E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补.可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株.
基因型：F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12：BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因.T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上.该菌适合表达非毒性蛋白.
基因型：F-,ompT, hsdS（rBB-mB－）,gal, dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性.PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达.该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白.
基因型：F-,ompT hsdS（rBB-mB－）,gal, dcm（DE3,pLysS ,Camr4：JM109菌株
该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补,从而显示β－半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型：recA1,endA1,gyrA96,thi－1,hsdR17,supE44,relA1,Δ（lac－proAB）/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5：TOP10菌株
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传.
基因型：F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC), φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74, recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697, galU ,galK ,rps, (Strr) endA1, nupG6：HB101菌株
该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验
基因型：supE44,hsdS20（rB-mB－）,recA13,ara－14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-17：M110或 SCS110
大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基. 常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.
部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明.
大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI, BclI等.而且甲基化只发生在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化.
而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法：
（1）选用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化影响；
（2）利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coli JM110和链霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割.8：E.coli JM110
要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110
如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化. 各种感受态细胞的区别 用途 特征 Xl1-Blue菌株基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+).特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性.用途：分子克隆和质粒提取.BL21(DE3)菌株基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5]).特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主.T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上.该菌适合于非毒性蛋白的表达.用途：蛋白质表达.BL21(DE3)ply菌株基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR).特点：该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性.此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达. 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达.用途：蛋白质表达DH5α菌株基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ–特点：一种常用于质粒克隆的菌株. 其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选.recA1和 endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取.用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达.JM109菌株基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F‘ traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+).特点：部分抗性缺陷,适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选.用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达.DH10B菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 endA1 recA1 deoR Δ(ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG rpsL λ-The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B .host for pUC and other α-com pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues,useful for plasmid rescue procedures. ELECTROMAX DH10B T1 CELLS说明：DH10B细胞是高转化效率的E. coli,可以完美应用于大多数实验应用.DH10B基因型具有以下特点：? lacZΔM15 用于重组克隆的蓝/白斑筛选? 消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统,允许构建更多具有代表性的基因组文库(1,2)? endA1突变,可以增加质粒产量和数量? 高效率转化大小为150 kb的质粒,用于产生cDNA或基因组文库DH10B?可以表达tonA的基因型,tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染的抗性(DH10B? T1R).DH10B?的基因型：F · mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ · rpsL (StrR) nupGDH10B? T1R的基因型：F · mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ · rpsL (StrR) nupG tonA另：我一直用top10 做普通的转化用 很稳定
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常用大肠杆菌感受态的区别
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