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评论/Comments胸膜间皮瘤，5年多，断断续续化
胸膜间皮瘤，5年多，断断续续化
胸膜间皮瘤，5年多，断断续续化疗20多次，现在各项指标正常，就是右肋长个大包，疼痛，吃止痛药效果不佳，年龄72岁，问能不能氩氦刀让大包变小，不压迫肋间神经，减少疼痛，再辅以中药，以期延长生命提高生存质量。期待您的高见，尤其是氩氦刀能用否？谢！
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因不能面诊，医生的建议及药品推荐仅供参考
专长：肿瘤、癌症、肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、淋巴瘤...
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问题分析：你好，你说的情况可以手术治疗，也可以采用传统中药保守治疗，或者手术后采用有效的传统中药巩固治疗。中医中药长期临床实践积累了许多非常有效的治疗方法。意见建议：建议你用传统中药虫草、猪苓、明党参、桑寄生、青阳参、香菇、红豆蔻、桑白皮、杜仲、降香、茯苓、白术、八月札、知母、片姜黄、制南星、山萸肉、木瓜、仙茅、制半夏、补骨脂、独活、石菖蒲、仙鹤草、大蓟、山奈、枸杞子、薏苡仁、地榆、白前、丹皮、射干、当归、土鳖虫、青黛、肉桂、苦参、金精粉、葫芦巴、白癣皮、赤芍、山豆根、远志、泽泻、金银花、乌术粉、制鳖甲、连翘、紫草、桃仁、三七等配合治疗，其功效能在短期内缩小肿块、减轻痛苦、稳定病情、疗效显著，同时增强机体免疫力，希望你正确治疗，早日康复！
职称：医师
专长：霉菌性阴道炎,宫颈糜烂,痛经
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指导意见：你好.你的情况建议手术治疗的.注意饮食比较好的. 可局部创处消毒处理.服用抗生素预防感染即可.
据所述病情建议忌辛辣刺激 饮食.多吃蔬菜水果粗粮.局部创处消毒.服用头孢拉定分散片预防感染.
职称：主治医师
专长：消化病，风湿病，皮肤病
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问题分析：氩氦刀低温手术系统是一种微创超低温冷冻消融肿瘤的医疗设备。氩氦靶向治疗技术可以有效地治疗肺癌、肝癌、脑肿癌、乳腺等实体肿瘤。与化疗、放疗、生物治疗及中医药结合治疗可取得满意的临床效果。意见建议：你所说的情况看，可以用氩氦刀切除肿瘤，改善症状。
职称：副主任医师
专长：感冒,肺气肿,肺炎,大叶性肺炎,哮喘,衣原体肺炎,...
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指导意见：你好！胸膜间皮瘤临床上分良性及恶性，一般恶性多见，恶性为弥漫性，良性为局限性包块，病人可能是良性肿瘤偏恶性，但生长相当快，这种情况可以手术、化疗及放疗、生物治疗及中医中药辨证治疗，但对此瘤，效果均没有得到肯定，化疗效果相当好点，建议手术处理一般采用直接传统手术，不能使用氩氦刀,看胸外科，此肿瘤是起源于胸膜各层的肿瘤，恶性程度次于肺癌，祝早日康复！
问你好医生我想问一下胸膜间皮瘤是肺癌吗
职称：医师
专长：晕厥,面神经炎,脑血管病
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问题分析：65岁老年男性，想咨询胸膜间皮瘤是肺癌吗。意见建议：不是，胸膜间皮瘤是胸膜的原发性肿瘤。胸膜是肺组织外变包绕的两层膜，构成胸腔。
问患者为男性60岁。因胸腔积液住院（2010年2月...
职称：医师
专长：外科、骨折
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病情分析：这个临床表现应该是肿瘤的骨转移。指导意见：这种病情应该是已经比较严重了估计生存期在3-6各月了可以吃西洋参灵芝红景天。
问你好医生我想问一下胸膜间皮瘤是肺癌吗
职称：医师
专长：晕厥,面神经炎,脑血管病
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问题分析：65岁老年男性，想咨询胸膜间皮瘤是肺癌吗。意见建议：不是，胸膜间皮瘤是胸膜的原发性肿瘤。胸膜是肺组织外变包绕的两层膜，构成胸腔。
问大网膜恶性间皮瘤（上皮样型）
职称：医师
专长：胃肠病，心脑血管疾病
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病情分析： 你好，根据你的详细叙述，大网膜恶性间皮瘤（上皮样型），患者现在整个腹部疼痛，小肚子处疼痛更为明显，目前没有出现便秘，能进食，食量也不错，恶性间皮瘤 源于腹膜 广泛扩散到大网膜 ，建议先尝试做一下化疗或者放疗，如果放疗和化疗后出现症状加重或者不佳，就立即停止化疗和放疗，请选择中医药治疗能够阻止病情的发展，可以改善症状，增强免疫力和提高生活质量。意见建议：按照病情状况描述，建议你可以在中医院的中医内科服用中药汤剂治疗,需要在中医师的指导下，中医师根据病情辨证论治，全面的对症服用治疗，才能够达到应有的治疗效果，不要随意服用药物，多食用新鲜蔬菜，水果，粥，保持心情愉快等。
问胸膜间皮瘤晚期持续疼痛加剧，如何治疗？
职称：主治医师
专长：食管癌,胃癌,直肠癌,淋巴瘤,肺癌,结肠癌,畸胎瘤,类癌综合征,癌性疼痛,恶性肿瘤
&&已帮助用户：861
问题分析：癌症引起疼痛，需要根据WHO止痛原则，给予止痛药物治疗，避免造成药物滥用。WHO止痛原则：口服、按时给药，三阶梯给药。意见建议：阿片类已经是第三阶梯止痛药物了，如果仍然疼痛，建议加大给药剂量（建议到大医院，肿瘤科医生行吗啡即释片滴定后调整剂量）。注意疼痛需要按时给药，这个很重要，病人疼痛时才给药，不痛就不给药，这种观点是错误的。建议选用吗啡缓释片或羟考酮缓释片止痛治疗。
问恶性胸膜间皮瘤1年，怎样治疗？
职称：副主任医师
专长：应用完全胸腔镜技术诊治胸部外科及结核外科疾病。
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问题分析：现在有些药物能控制症状，如培美曲塞等，不知道你用了没有。这种病的治疗效果很差。
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评价成功！上皮细胞间质化与间质细胞上皮化相互转化机制,细胞生物学论文_学术堂
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上皮细胞间质化与间质细胞上皮化相互转化机制时间： 来源：学术堂 所属分类：
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　　上皮细胞间质化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是上皮细胞通过特定程序从黏附细胞形态向具有间质表型游离细胞形态转化，并获得侵入细胞外基质能力的一系列转化过程。这种后天获得运动能力的细胞在移行过程中可再次向上皮细胞或其他细胞类型转变，即间质细胞上皮化（mes-enchymal-epithelial transition,MET）。EMT与MET的相互转化与肿瘤的发生、发展、转移关系密切[1-2].目前，EMT与肿瘤关系及其临床应用已成为研究热点。
　　1 EMT在生理过程中的作用
　　1.1上皮细胞和间质细胞的特点
　　根据上皮细胞和间质细胞在形态和功能上的不同，参与EMT过程的这两种类型细胞有以下特点：（1）上皮细胞由单层/多层立方细胞或柱状细胞有规律的排列，它们由细胞间黏附复合体紧密黏附在一起，其基底膜具有使上皮细胞与其他组织分离的特性，显示出顶端-基底极性。（2）间质细胞由于缺乏细胞间连接和极化作用，以个体细胞的形式存在于基质中[3].
　　1.2 EMT的功能分型EMT过程根据不同的功能影响分为3种类型
　　Ⅰ型EMT与胚胎形成、器官发育相关，包括在胚胎发育时期原始的上皮细胞向移行的间充质细胞转变的过程。
　　着床后第1次EMT发生在胚层分化清楚后的原肠胚，初级EMT分化产生不同的细胞类型，中胚层细胞沿着胚胎中轴线压缩形成不同的细胞。除脊索以外，所有来源于早期中胚层的胚胎结构都将通过连续的EMT和MET改变最后形成不同的器官和组织[1,4].Ⅱ型EMT与创伤修复，组织再生和器官纤维化有关[5-6].
　　在创伤和炎症损伤刺激下，组织中成熟上皮或内皮细胞转化形成成纤维细胞及其他相关细胞，导致组织重构，这种EMT过程在刺激消失后终止[2,7].Ⅲ型EMT与肿瘤形成及转移相关，发生转化的上皮癌细胞在基因（特别是与克隆产物相关的基因）和表观遗传学方面与正常上皮细胞不同，在局部肿瘤的发展过程中起重要作用：癌细胞向间质细胞表现转化而具有侵袭性并向肿瘤发展[5].成人生理的EMT是一个形态学过程，特征是从上皮表型到间质特性的转变，细胞凋亡和替换比率与组织功能保持着平衡，从而维持内环境的稳态。上皮细胞保持着动态结构，在组织生长和分化过程中，有大量的分子机制保证其最后的完整性，伴随着E-钙黏蛋白（E-cadherin）等上皮标志物及波形蛋白（vimentin）等间质性标志物的不同表达[8].
　　2 EMT发生的主要信号调控途径
　　在细胞水平，参与EMT生理和病理调节的效应分子及信号转导通路相类似，在上皮细胞向间质细胞重建的复杂过程中，有许多诱导信号和转录因子及多个正反馈环路发生，刺激因素包括生长因子信号，肿瘤间质细胞相互作用和缺氧等，主要信号途径有转化生长因子-&（TGF-&）信号通路、Wnt信号通路和PI3K/AKT信号通路等[9].
　　EMT一般通过不同的信号诱导上皮细胞转化，这些信号通常由正常组织和肿瘤组织的间质细胞释放。
　　EMT可以被细胞外基质成分和生长因子诱导，TGF-&是比较重要的因子，调控着下游多个信号通路，通过&-整合素信号传导途径促进smad依赖的转录过程而发挥作用。TGF-&可通过自分泌而作用于肿瘤细胞本身，也可通过旁分泌而调节细胞外基质，导致肿瘤细胞通过EMT而发生形态学改变，使侵袭和转移能力增强。
　　Wnt信号途径由Wnt蛋白、卷曲蛋白（frizzled,Fz）、APC蛋白、糖原合成酶激酶GSK3、Axin蛋白、&-连接素（catenin）、T细胞转录因子/淋巴增强因子 （T cell transcription fac-tor/lymphoid enhancer factor,TCF/LEF）家族组成，可激活下游靶基因，诱导EMT发生。
　　PI3K/AKT通路可下调E-cadherin和&-catenin,上调波形蛋白，发生EMT.
　　Hedgehog,Notch等信号转导途径及整合素信号途径也可协调EMT程序[10].分散因子/肝细胞生长因子 （SF/HGF），成纤维细胞生长因子（FGF），表皮生长因子家族（EGFs）和胰岛素样生长因子1和2（IGF-1、2）等均可通过相应信号途径促进EMT的发生[11].
　　3 EMT发生的机制及其相关标记物
　　癌细胞侵袭性是通过入侵和破坏基底膜而获得，并最终导致癌细胞转移传播。
　　EMT过程的活化是上皮癌细胞获得恶化表型的关键机制。发生在上皮癌细胞的EMT属Ⅲ型EMT,它们从遗传学和表观遗传学上与正常上皮细胞不同。在肿瘤微环境中癌细胞间能够相互作用，通过自分泌和/或旁分泌生长因子、细胞因子和细胞外基质蛋白等而诱导EMT.在EMT表达下调的有E-cadherin、紧密连接蛋白-1（zonula occludens-1,ZO-1）细胞角蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、层板蛋白1（laminin 1）等，上调的有N-钙黏蛋白、成纤维细胞特异性蛋白1（fibroblastspecific protein1,FSP-1）、&-平滑肌肌动蛋白（&-smooth muscleactin,&-SMA）、细胞间丝波形蛋白、&-catenin等。这些癌细胞具有特定的基因突变以启动和维持EMT程序[12].
　　癌细胞中激活的EMT程序中有许多功能步骤，与发育和生理过程中的EMT过程相同。在上皮癌中EMT导致细胞膜钙黏蛋白从E-cadherin到N-钙黏蛋白转换，E-cadherin表达的下调或者缺失是EMT典型特征，导致上皮肿瘤细胞侵袭和转移[5].EMT与其转录 因 子特别是Snail,Slug,zinc finger E-box binding homeobox 1and 2（ZEB1and 2），Twist,Goosec-oind and FOX2等表达水平和功能相关，Smad与DNA结合后可诱导对TGF-&信号的转录应答，与&-catenin/LEF-1信号通路共同维持上皮间质转化后间叶表型。
　　Wnt信号异常激活后使游离的&-catenin累积，并形成&-catenin/LEF-1复合物，该复合物进入细胞核后调控靶基因转录，诱导EMT发生。Snail,Slug和Twist与E-cadherin的启动子E-box结合，抑制E-cad-herin表达，引起EMT发生[5-6].这些标记物在细胞发生EMT转变时出现，但其水平并不与参与EMT过程的上皮细胞的阶段相一致。
　　用生长因子如TGF-&，HGF,表皮生长因子受体（EGFR）和IGF等可诱 导体 外乳腺癌细胞株发生EMT.这些细胞Twist和Snail的异位表达使间质细胞表型和干细胞标记物增加而诱导EMT,使乳腺癌干细胞获得侵袭和转移能力。
　　Weng等[13]证明在乳腺癌小鼠癌症转移与EMT相关，发生EMT的乳腺细胞经FSP1/S100A4启动子激活获得转移能力，并在体内可被检测出。在基质特异和上皮特异的转基因小鼠体内肿瘤发展过程中可直接显示EMT.用3只不同癌基因控制的小鼠乳腺癌模型和细胞原基分布图方法，可证明体内乳腺癌中EMT存在及myc在这一过程中的作用。在视网膜母细胞瘤、骨肉瘤、小细胞肺癌、结肠癌、前列腺癌、膀胱癌和乳房癌中成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白（Rb）缺失或低水平表达，这在乳腺癌中更常见，诱导EMT部分依赖E-cadherin的减少，使乳腺癌转移增强。相应的，增加Rb可抑制EMT[14].在肿瘤-基质分界面和侵袭性乳腺癌中也有Snail1的表达。而Snail2的表达与肿瘤渗出、转移和复发有关。对乳腺癌模型的研究表明EMT不 是 单 一 的肿瘤类型，而是源于多种机制的多种表型[15].
　　研究表明EMT途径的活化与组织学分级有关，相对于低级别肿瘤，参与EMT的基因上调与低分化癌相关，Twist的高表达与高级别侵袭性肿瘤相关。相对于其他类型的侵袭性乳腺癌，基底样肿瘤其间质细胞标记物（波形蛋白，N-钙黏蛋白，钙黏蛋白-11）高表达，E-cadherin低表达的更易远端转移，预后差[16].临床上可通过找到EMT特定的基因特征鉴定EMT,帮助诊断并预测肿瘤患者的预后。
　　4 miRNA对EMT的调控及临床意义
　　miRNA参与肿瘤细胞表型转化的发生与调节，其异常表达与EMT相关：微阵列分析表明EMT过程中的细胞miR-200家族和miR-205表达下调，调节特定抑制蛋白ZEB1和ZEB2,从而抑制E-cadherin表达，引起EMT发生[17].ZEB和miR-200家族成员不仅有相反的功能，而且相互调节对方的表达，形成了一组因素的激活强烈影响另一组的表达的双负反馈环路，促进miR-200家族和ZEB分别维持EMT和MET转化[18].在EMT与MET转化过程中，CDH1是至关重要的基因，miRNA可直接靶向CDH1,也可直接调控相关转录因子而间接作用于CDH1,从而决定EMT/MET转换。
　　miR-9、miR-23a和miR-25均可直接靶向CDH1而引起EMT的发生，分别促进乳腺癌、肺癌和食管鳞状细胞癌的转移[19].
　　miR-138可靶向波形蛋白和ZEB2等基因，降低Snail和HDAC1/2的表达，进而间接抑制CDH1的表达，诱发鼻咽癌EMT[20].
　　TGF-&、Twistl、E47、Snail1和Snail2等可与CDH1的启动子E-box结合而抑制其表达，促进肿瘤的转移[21].
　　Ma等[22]发现与人乳腺上皮细胞或自然永生细胞MCF-10A相比，转移乳腺癌细胞株中miR-10b上调，在乳腺癌移植瘤模型中其高表达可诱导侵袭和转移。在恶性乳腺癌和乳腺癌细胞株中miR-21,miR-9和miR-155呈现高表达[23].与乳腺导管癌相比，基底部和化生的乳腺癌中miR-200水平下调，使其具有高侵袭性。原发癌和相应的转移癌相比较，在原发癌中miR-10b,miR-21和miR-155水平较低而miR-200水平较高，提示可通过操纵这 些EMT相关miRNA来控制转移过程[24].
　　miR-200家族可成为肿瘤治疗的潜在靶点。在人乳腺癌中，miR-103/107在体外可增加癌细胞迁移能力，在体内可参与转移传播，高水平的miR-103/107与转移和不良预后有关，miR-103/107还可通过下调miR-200水平诱导EMT[25].因此，临床上可以通过了解癌细胞EMT状态和miRNA的表达情况来预测其侵袭和转移能力，判断患者的预后。针对参与EMT过程中的蛋白和miRNA这些潜在靶点，可开发特异性治疗方案，从而防止肿瘤侵袭、转移、复发和耐药。
　　5结语与展望
　　EMT改变在生理和病理方面扮演了重要角色，尤其在肿瘤迁移和侵袭过程，EMT是肿瘤转化瀑布中重要的一步。EMT和MET转换在肿瘤细胞可塑性调控机制中起到了非常关键的作用，对于肿瘤转移复发和肿瘤细胞的治疗耐受现象也有重要作用。随着研究的深入EMT的调控机制已经取得了一些进展，但其确切的调控机制还有待进一步研究证实。
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您现在查看是摘要页，。乳腺癌BT549细胞表达beclin 1基因对上皮间质转化的影响--《南方医科大学》2014年硕士论文
乳腺癌BT549细胞表达beclin 1基因对上皮间质转化的影响
【摘要】：研究背景和目的：
乳腺癌发病率占全球女性肿瘤的第一位(占女性全部癌症病例数的23%),且乳腺癌导致的患者死亡比例占所有肿瘤引起死亡的14%；在我国,乳腺癌发病率亦呈上升趋势。三阴性乳腺癌(TNBC)是一种特殊的乳腺癌类型,其细胞ER、PR和Her2表达均为阴性,该类型约占女性乳腺癌发病率的12～17%。目前,针对TNBC临床上尚无非常有效的治疗方法,并且肿瘤转移(骨、脑、肺部转移)是导致患者死亡的主要原因,因此,为TNBC患者寻找新的有效治疗方式显得尤为重要。
自噬是个分解代谢的过程,涉及氨基酸、核苷酸和脂质的循环：多余的蛋白质或受损的细胞器等被双层膜囊泡(自噬体)包裹,在溶酶体内降解。通过此途径,自噬能引起错误折叠的蛋白、蛋白质聚集体及破坏的细胞器如能伤害细胞的线粒体和内质网等的去除。近来,已有学者证实自噬功能紊乱与肿瘤的形成和生长有关。目前认为,自噬能力下降可增加正常细胞的癌变风险；而对于已癌变细胞,适度自噬可促进细胞存活,而过度自噬则可引发细胞死亡。Beclin1是诱导细胞自噬的必须基因,是凋亡调控蛋白BH-3亚家族的成员之一,该基因主要位于染色体17q21,其对肿瘤细胞的自噬发挥重要的调控作用。同时,beclin1亦是一种抑癌基因,有研究表明,存在beclin1等位失活的小鼠罹患肿瘤的风险明显增高,而过表达beclin1诱导自噬可抑制肿瘤的形成和发展。关于beclin1基因在乳腺癌方面的研究很少。已有研究表明,45～70%散发性乳腺癌患者癌细胞存在beclinl等位基因缺失。该等位基因缺失可降低正常乳腺上皮细胞的自噬能力,并增加应激环境下基因的不稳定性,从而促使细胞无序增殖,被认为是乳腺癌发生的关键因素；同时,beclin1等位缺失可能会引起乳腺癌细胞自噬能力下降,基因不稳定性增加,从而导致癌细胞的进一步恶性增殖。目前,关于自噬在TNBC方面的研究更少。有学者发现,][NBC细胞株存在beclin1等位基因缺失,由此推测,该等位基因缺失可能与此类癌细胞自噬能力下降、增殖能力旺盛和转移能力增强有关。
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1pLenO-GTP使用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ进行酶切,酶切获得的载体片段做载体去磷；按照beclin1基因的序列(NM_),设计PCR引物扩增beclin1基因CDS区域；将pLenO-GTP载体酶切产物和beclin1基因PCR产物加样到1%的琼脂糖胶进行电泳鉴定,鉴定后将beclin1的PCR产物做胶回收,并与pLenO-GTP载体进行连接反应后准备转化；从新活化的E.coli DH5a菌平板上挑取一单菌落,用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞悬液,并直接用于转化实验；根据Axygen质粒抽提试剂盒方法抽提质粒,重组慢病毒载体pLenO-GTP-Beclin1使用EcoRⅠ和Not Ⅰ进行酶切鉴定,并送公司测序,测序结果比对。将正确的重组慢病毒穿梭载体质粒及其辅助包装原件载体质粒分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,培养72h后,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,感染293T细胞后检测病毒滴度。
浓度梯度为0ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml的嘌呤霉素分别作用于BT549细胞,3天后用倒置显微镜观察细胞死亡情况,BT549细胞全部死亡的嘌呤霉素最低浓度即为其筛选BT549细胞的工作浓度。用不同的感染复数(MOI=5、10、15、20)分别感染三阴性乳腺癌BT549细胞,96h后用倒置荧光显微镜在对应的激发光波长下观察绿色荧光表达的情况,评估感染效率；将三阴性乳腺癌BT549细胞分为空白对照组、实验对照组(pLenO-GTP Vector)及实验组(pLenO-GTP-Beclin1Vector),慢病毒以感染效率为100%的MOI值20感染BT549细胞传3代后,Western blot和激光共聚焦显微镜分别检测各组细胞内beclin1蛋白的表达情况；
2Western blot法检测常氧条件下各组细胞EMT相关标志物(上皮标志物E-cadherin,间皮标志物N-cadherin、Vimentin)蛋白的表达情况及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(p-catenin、Snail、p-GSK-3β)的表达水平；三气培养箱(1%02、94%N2、5%CO2)低氧培养各组细胞12h、24h后采用荧光定量PCR检测EMT相关标志物(上皮标志物E-cadherin,间皮标志物N-cadherin、Vimentin、 Fibronectin)mRNA表达水平,Western blot法及激光共聚焦显微镜检测EMT相关标志物(上皮标志物E-cadherin,间皮标志物N-cadherin、Vimentin)的蛋白表达水平,以评估短程低氧条件下beclin1基因对细胞EMT相关标志物转录和翻译水平的影响；最后,用Western blot法检测各组细胞低氧培养24h后Wnt/β-catenin信号通路的相关蛋白(β-catenn、Snail、p-GSK-3β)表达水平。
应用SPSS18.0软件进行统计学分析,RT-PCR、Western blot及激光共聚焦图片荧光分析结果以均数±标准差(x±s)表示,两样本t检验分析低氧时间对细胞EMT相关标志物的表达情况,余计量资料用方差分析进行统计。P0.05认为差异有统计学意义。结果：
1PCR鉴定和酶切鉴定结果：重组慢病毒载体pLenO-GTP-beclin1的插入序列完全正确,测序结果提示beclin1慢病毒2号克隆为鉴定正确的阳性克隆;慢病毒包装后,使用逐孔稀释滴度测定法得到,对照慢病毒的滴度为1.0x1012TU/ml,beclin1慢病毒的滴度为3×109TU/ml；嘌呤霉素浓度为3ug/ml时,3天后BT549细胞全部死亡,即嘌呤霉素筛选BT549细胞的工作浓度是3ug/ml；随着感染复数MOI值逐渐增大,感染效率逐渐增高,当感染复数MOI值为20时,慢病毒对BT549细胞的感染效率最高,几乎为100%；Western blot结果显示实验组beclin1蛋白印迹条带灰度明显强于空白对照组和实验对照组(F=38.830,P=0.000),而空白对照组和实验对照组beclin1蛋白印迹条带灰度极淡,空白对照组和实验对照组间差异无统计学意义(P0.05)；激光共聚焦显微镜结果显示实验组BT549细胞内beclin1蛋白荧光强度显著高于空白组和实验对照组,而空白组和实验对照组的beclin1蛋白荧光强度很弱,空白对照组和实验对照组间差异无统计学意义(P0.05)。
2Western blot结果显示,相对于空白对照组和实验对照组,常氧条件下实验组细胞的上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平上调(G=36.583,P=0.000),间皮标志物N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平下调(N-cadherin F=31.638、 P=0.001,Vimentin F=50.332、P=0.000),而空白对照组和实验对照组间差异无统计学意义(P0.05)；常氧条件下实验组Wnt/β-catenin信号通路的β-catenin、 Snail蛋白水平下调(β-catenin F=59.025,P=0.000; Snail F=81.838,P=0.000),而p-GSK-3β的蛋白水平上调(F=70.033,P=0.000),而空白对照组和实验对照组间差异无统计学意义(P0.05)。
3短程低氧条件下,相对于空白对照组、实验对照组,实验组细胞的上皮标志物E-cadherin mRNA和蛋白表达水平上调(12h：F1=122.451、P1=0.000,F2=29.651、P2=0.001；24h：F1=108.783、P1=0.000,F2=41.232、P2=0.000；F1、P1和F2、P2分别为mRNA和蛋白表达水平的统计结果),而间皮标志物N-cadherin、Vimentin、Fibronectin表达水平下调(12h:N-cadherin F1=92.918、 P1=0.000、F2=138.034、P2=0.000,Vimentin F1=135.313、P1=0.000、F2=39.765、 P2=0.000,Fibronectin F1=144.275、P1=0.000;24h:N-cadherin F1=76.064、P1=0.000、F2=40.614、P2=0.000,Vimentin F1=206.576、P1=0.000、F2=46.658、P2=0.000,Fibronectin F1=411.405、P1=0.000)；相对于低氧培养12h,各组细胞低氧培养24h后E-cadherin表达水平下调(空白对照组：t1=4.266、P1=0.013,t2=11.235、P2=0.000；实验对照组：t1=10.463、P1=0.000,t2=4.092、P2=0.009；实验组：t1=28.208、P1=0.000,t2=7.262、P2=0.001；t1、P1和t2、P2分别为mRNA和蛋白表达水平的统计结果),而N-cadherin(实验组除外)、Vimentin、Fibronectin表达水平上调(空白对照组：N-cadherint1=3.072、P1=0.037、t2=7.146、P2=0.002, Vimentin t1=6.384、P1=0.003、t2=7.476、P2=0.002,Fibronectin t1=8.389、P1=0.001;实验对照组：N-cadherin t1=2.805、P1=0.049、t2=5.352、P2=0.006, Vimentint1=12.701、P1=0.000、t2=5.923.P2=0.004,Fibronectin t1=7.318、P1=0.002；实验组：N-cadherin t1=7.849、P1=0.001、t2=1.987.P2=0.184,Vimentin t1=11.097、 P1=0.000、t2=13.626、P2=0.000,Fibronectin t1=11.003、P1=0.000)；beclinl基因与低氧条件对BT549细胞E-cadherin、N-cadherin的表达水平有交互效应(E-cadherin F1=19.175、P1=0.000,F2=5.588、P2=0.015；N-cadherin F1=8-238、 P1=0.006,F2=5.934.P2=0.016)；低氧培养24h后,实验组Wnt/β-catenin信号通路的p-catenin、Snail蛋白水平下调(β-catenin F=18.169,P=0.003；Snail F=11.098,P=0.010),而p-GSK-3β的蛋白水平上调(F=36.096,P=0.000)结论：
1成功建立了慢病毒介导的稳定表达beclin1的三阴性乳腺癌BT549细胞；嘌呤霉素筛选BT549细胞的工作浓度是3ug/ml。
2常氧及短程低氧条件下,beclin1基因抑制BT549细胞EMT,而随时间的增加低氧促进EMT。
3Beclin1基因在常氧及短程低氧条件下抑制BT549细胞EMT的机制可能与Vnt/β-catenin信号通路有关。
【学位授予单位】：南方医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2014【分类号】：R737.9
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