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1,3-β-d-葡聚糖检验简介
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细菌脂多糖，真菌葡聚糖快速定量检测
作者: 作者：梁金&&&发布时间:
&&& 我院投入30多万元购进的微生物快速动态检测系统经调试，现正式应用于临床细菌脂多糖、真菌葡聚糖的快速定量检测。首日运作就有数十例发热、肺炎等病例送检，其结果准确可靠，为临床诊断、治疗提供重要依据。
&&& 脂多糖是许多革兰氏阴性菌的细胞壁结构成分，也既细菌的内毒素，其性质稳定，耐热，经100℃作用1小时不被破坏，所以内毒素是常常引起食物中毒的主要因毒。
&&& 内毒素的毒性作用较弱，对组织细胞无严格的选择性毒害作用，引起的病理变化和临床症状大致相同，其主要生物学活性如下：1、致热作用；2、白细腻增多；3、感染性休克；4、弥漫性血管内凝血（DIC）。
&&& 微量内毒素进入机体后，将会产生发烧、休克及内毒素血症等临床症状，某些抗生素药物杀死细菌的同时也会促进内毒素的释放，从而增加血液中的内毒素含量水平。
&&& 葡聚糖为真菌细胞壁的主要组成成分，占干重80-90%，其生物活性与内毒素相似。葡聚糖对热极为稳定，高压121℃并不能使其灭活。当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的处理，葡聚糖可释放出来。葡聚糖可作为侵袭性曲霉菌感染的早期诊断指标，也可用来诊断白色念珠菌等真菌的感染。
&&& &对于发热、肺炎、败血症、细菌培养阴性、细菌培养取样困难的病例，作细菌脂多糖、真菌葡聚糖的快速定量检测非常有必要。细菌脂多糖，真菌葡聚糖快速定量检测
脂多糖是许多革兰氏阴性菌的细胞壁结构成分，也既细菌的内毒素，其性质稳定，耐热，经100℃作用1小时不被破坏，所以内毒素是常常引起食物中毒的主要因毒。
内毒素的毒性作用较弱，对组织细胞无严格的选择性毒害作用，引起的病理变化和临床症状大致相同，其主要生物学活性如下：1、致热作用；2、白细腻增多；3、感染性休克；4、弥漫性血管内凝血（DIC）。
微量内毒素进入机体后，将会产生发烧、休克及内毒素血症等临床症状，某些抗生素药物杀死细菌的同时也会促进内毒素的释放，从而增加血液中的内毒素含量水平。
葡聚糖为真菌细胞壁的主要组成成分，占干重80-90%，其生物活性与内毒素相似。葡聚糖对热极为稳定，高压121℃并不能使其灭活。当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的处理，葡聚糖可释放出来。葡聚糖可作为侵袭性曲霉菌感染的早期诊断指标，也可用来诊断白色念珠菌等真菌的感染。
&对于发热、肺炎、败血症、细菌培养阴性、细菌培养取样困难的病例，作细菌脂多糖、真菌葡聚糖的快速定量检测非常有必要。
标本采集：到检验科领取细菌毒素脂多糖定量检测和真菌葡聚糖检测专用采血管，采集2-3mL血液，颠倒混匀，立即送检。样过程要求无菌操作，常规病人早上用药治疗前空腹采血取样（血透患者透析前采血），标本类型：抗凝静脉血，使用无热原真空采血管（细菌室取采血管），采集血液2-3ml并立即混匀。半小时内送检。
细菌毒素脂多糖定量检测：0-10pg/mL
真菌葡聚糖检测：0-10pg/mL
临床意义：
1.真菌和大多数革兰氏阴性菌感染疾病的早期诊断；
2.检测透析用水，对医院感染的控制具有重要意义；
3.鉴别诊断感染性疾病；
4.对治疗效果以及预后判断具有重要价值；
5.对临床给药方案提供理论依据，指导抗菌药物合理应用。
内毒素的定义
英文称作Endotoxin
，是革兰氏阴性杆菌细胞壁上的特有结构，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖（LPS）中的类脂A。
内毒素血症
1、内源性内毒素血症发生的原因。
（1）肠道内毒素的吸收，正常机体内菌落失调后，肠道内内毒素可被大量吸收入血。
（2）败血症时血中细菌的释放，革兰氏阴性杆菌败血症时，细菌在机体血液内大量繁殖，死亡解体的细菌可释放出大量内毒素
（3）有效的抗菌治疗后，由于血中细菌大量死亡崩解，可加重内毒素血症。因此，在临床上可能出现感染控制而以器官损害为特点的病情继续恶化的情况，此时需要抗内毒素治疗。
2、外源性内毒素：
由于治疗的需要输入了含有细菌内毒素的液体、药物或血液等。
内毒素检测的临床意义
革兰氏阴性菌败血症是住院病人死亡的重要原因。革兰氏阴性菌释放的内毒素是造成革兰氏阴性菌败血症的真正原因。检测血浆和体液中的内毒素含量对诊断革兰阴性细菌感染、支原体感染有重要的临床参考意义，特别当缺乏直接细菌学证据时，为临床医生制定抗菌素治疗方案提供参考。
1、细菌性感染的辅助诊断、治疗和预后判断
（1）全身性细菌感染：革兰氏阴性细菌性败血症尤常并发内毒素血症。
（2）局部性细菌感染
2、原因不明的发热
内毒素血症可能是免疫低下患者原因不明发烧的因素之一
3、肝脏疾病
肝脏是阻止肠道内毒素进入大循环的有效屏障，一旦肝脏功能障碍、肝脏受损后，对内毒素解毒能力大为减弱，内毒素进入血循环并经直接及间接作用引起肝外组织的损伤。
4、胆道疾病
内毒素是肠道内大量存在的革兰氏阴性菌细胞壁内的一种脂多糖，正常情况下来自胆汁的胆酸、胆盐及分泌型IgA等能抑制肠内菌群的过度繁殖和内毒素的产生。维持粘膜屏障的完整，阻止内毒素的吸收。梗塞性黄疸时，单核巨噬细胞系统尤其是肝脏Kupffer细胞功能受抑，肠道中胆汁缺失使内毒素池增大，致内毒素血症发生率增高。
5、急性胰腺炎
急性胰腺炎并发内毒素血症较为常见，约占66%。值得注意的是死亡病例生前均并发内毒素血症且持续存在直至死亡。因此急性胰腺炎早期测定血浆内毒素有助于判断疾病的严重程度，指导治疗。
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真菌（1-3）-β-D-葡聚糖与革兰氏阴性菌脂多糖检测 鲎
20世纪六十年代，人们发现一种古老的海洋生物，被称为“海洋活化石”的鲎，它的血液与内毒素接触后会发生特异性的凝集反应，人们经过大量研究和实验从它的血液中提取出了用来检测内毒素的“鲎试剂”。 鲎试剂的发明
1981年1月Jack Levin和 Frederik B.Bang教授在美国马塞诸塞州Wools Hole海洋生物实验室成功分离提取鲎血细胞并研制成能够检测细菌内毒素的鲎试剂，开辟了人类认识和检测内毒素的新纪元！ 真菌感染的危险因素： 中心静脉插管
尿道插管 广谱抗生素 气管插管 腹部外科 肠胃外营养 营养不良 住院时间 侵袭性真菌感染 条件致病性真菌 念珠菌病 曲霉病 隐球菌病 其他 诊断方法 影像学 组织病理学/细胞学 培养 血清学 分子生物学方法：Platelia Aspergillus
ELISAFungitell assayPCR（unavailable） 真菌病实验室诊断主要内容 准确、快速检出真菌病原体 真菌镜检 真菌培养 组织病理 生理生化 血清学方法 分子生物学 镜检和培养方法 非培养方法优点 快速报告结果 敏感性提高 取材简便 多以真菌在致病状态产生的物质为检测标志物，结果阳性提示有致病性 定量检测可判断感染严重程度及疗效评估
非培养诊断的方法简介 真菌细胞壁成分 （1-3） - β- D-葡聚糖检测（G试验）
真菌抗原检查 半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原（GM)
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诊断IPFI的三个级别
（1,3） - β- D-葡聚糖检测 1,3-β-D-葡聚糖结构 葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中 1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌细胞壁上的特有成分 以1,3-β-糖苷键连接的葡萄糖残基骨架作为主链 以分支状1-6-β-D葡萄糖残基作为侧链
1,3-β-D-葡聚糖特性 对热极为稳定，高压121℃并不能使其灭活。在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G实验灵敏。 当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。 在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。 可用于检测念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、镰刀菌、卡氏肺孢子菌 不可检测隐球菌、接合菌（根霉/毛霉等）
“G”试验缘何而来？ 检测原理（比色法） 分析前注意事项 采用无热原采血管 抽血后2h内送检 血标本4-8℃最多存放48h 检测环境应保持清洁 1,3-β-D-葡聚糖相关影响因素 以下情况可出现假阳性： 使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料； 静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品； 链球菌血症； 操作者处理标本时存在污染； 使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也可能造成假阳性。
1,3-β-D-葡聚糖检测临床价值 早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断。 指导用药：快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗效高，价格适宜的药物提供准确的依据。 评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚糖浓度变化，评价选用药物的有效性。 监护病程：监护深部真菌感染易感人群的病发状态。 动态观察：易感人群，监测临床疗效。
曲霉菌半乳甘露聚糖（GM） 中性粒细胞减少症患者40例 （发展为曲霉菌病的高危人群） 该研究选择1,3-β-D-葡聚糖（BG）和半乳甘露聚糖（GM）两个指标用于监测中性粒细胞减少性成人曲霉菌病患者 BG和GM两项指标均可用于指导临床诊断和治疗真菌性疾病, 但BG可早于GM升高. BG和GM联合检测用于曲霉菌病
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