关注今日：0 | 主题：287323
微信扫一扫
【分享】干粉引物怎么稀释到工作液
页码直达：
这个帖子发布于3年零96天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
干粉状引物怎么稀释备用 ( 20:11:17)先掌上离心机，离心，然后一般是这样的，上写着：例如：25.3nmol
253uL. 最终浓度是：10umol/L.分类： 学习资料干粉状引物怎么稀释备用？
先离心！然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液（约100μM），保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。引物浓度不宜偏高，浓度过高有两个弊端：一是容易形成引物二聚体（primer-dimer），二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时，容易产生非特异性产物。一般说来，用低浓度引物不仅经济，而且反应特异性也较好。一般终浓度用0.25-0.5pM/μl较好。1 引物的分子量如何计算？ 比如：AAGCTTTTACCGC的分子量是多少？2 OD值，1个OD值是不是等于40UG。3 质量数，质量数的含义是什么，怎么计算？4摩尔数（μmol）和终浓度(pM)和稀释水量（μl） 是不是计算稀释引物都要用到以上四点的各个参数？具体的公式是什么呢？合成引物的单子上应该有算法：1OD=33ug1个碱基的分子量=324.5（以上为近似值，通常都这样用）1条引物的分子量=碱基数*324.5质量数=OD*33ug摩尔数=质量数/分子量先离心的原因是什么？因为引物合成后是干粉状的，在运输过程中可能会沾到管壁或管盖上，直接打开有些粉末可能会飘出去，引物的量就减少了。先离心使粉末都到管底，可以避免这种现象的发生。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量33nmol/OD×管上所标OD值×100是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。可于－20度保存。订引物回来的说明书背面一般都有引物稀释计算的说明的.注意分装！
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
1uM = 1pmol/ul , 我们引物工作液的浓度一般是 10uM , 储存液浓度一般是 100uM 。比如你上游引物是14.1nmol，如果你加141ulddH2O，浓度就是 0.1nmol/ul，也就是 100pmol/ul，也就是100uM 。 如果要工作，需要继续稀释10倍，成为10vM。1 od为6.2mmol 加入62vl TEbuffer，成为储存液100vM。如直接加入620，则刚好为工作液。实际上，OD为5，就是质量上多了5倍，稀释的时候多5倍即可。储存的时候用TE,工作的时候检测下双蒸灭菌水，PH是否中性，如果偏酸性不能再用，对DNA降解。使用pH7.5-8.0的TE 缓冲液溶解引物。不建议使用蒸馏水溶解引物，因为有些蒸馏水的 pH 值比较低（ pH4-5 ） , 引物在这种条件下不稳定。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
做了半年分子实验了，刚知道按照引物合成单加水稀释，做pcr需要再稀释十倍，唉，，，我说，怎么老是有引物二聚体！这下明白了，赞赞赞
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
马上要做基因片段合成了，过来学习学习
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
上写着：例如：25.3nmol ，加ddH2O 253uL. 最终浓度是：10umol/L.楼主可能计算错了，这是100umol/L.不过后面的方法没错。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园关注今日：0 | 主题：287323
微信扫一扫
在线急盼啊————两个OD的干粉状引物要怎么稀释备用啊
页码直达：
这个帖子发布于13年零294天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
刚买回来的两个OD的干粉状引物要怎么稀释备用啊？一般浓度稀释到多呢？哪位战友能给个具体的实际操作步骤或细节啊？在线急盼啊
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
收起全部有料回复
合成引物的单子上应该有算法：1OD=33ug1个碱基的分子量=324.5（以上为近似值，通常都这样用）1条引物的分子量=碱基数*324.5质量数=OD*33ug摩尔数=质量数/分子量
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
先离心！然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液（约100μM），保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。引物浓度不宜偏高，浓度过高有两个弊端：一是容易形成引物二聚体（primer-dimer），二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时，容易产生非特异性产物。一般说来，用低浓度引物不仅经济，而且反应特异性也较好。一般终浓度用0.25-0.5pM/μl较好。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
先离心！然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液（约100μM），保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。引物浓度不宜偏高，浓度过高有两个弊端：一是容易形成引物二聚体（primer-dimer），二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时，容易产生非特异性产物。一般说来，用低浓度引物不仅经济，而且反应特异性也较好。一般终浓度用0.25-0.5pM/μl较好。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
首先，强烈感谢主任的热情帮助，您总是最快的回复，最好的答案。另外，由于我是新手，想再请教主任几个比较菜的问题，还望您指导：1 引物的分子量如何计算？
比如：AAGCTTTTACCGC的分子量是多少？2
OD值&&，1个OD值是不是等于40UG。3 质量数，质量数的含义是什么，怎么计算？4摩尔数（μmol）和终浓度(pM)和稀释水量（μl）&&是不是计算稀释引物都要用到以上四点的各个参数？具体的公式是什么呢？向您再次致谢！谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
pigeon2003909 编辑于
合成引物的单子上应该有算法：1OD=33ug1个碱基的分子量=324.5（以上为近似值，通常都这样用）1条引物的分子量=碱基数*324.5质量数=OD*33ug摩尔数=质量数/分子量
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
嘻嘻，主任真是快，小女子佩服您啊，您这是厉害啊
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我补充问一点，先离心的原因是什么？直接把算好的ddH2O加进去颠倒混匀后不是效果一样么？另外，我们实验室的好象都习惯在静置4度过夜，这样引物分子能更好的扩散，均匀分布于液体中，个人认为这样也是很有道理的
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
因为引物合成后是干粉状的，在运输过程中可能会沾到管壁或管盖上，直接打开有些粉末可能会飘出去，引物的量就减少了。先离心使粉末都到管底，可以避免这种现象的发生。4度过夜也可以，不过一般室温10分钟，吹打混匀即可。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
先离心,以防打开后粉末飘散出去。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量
33nmol/OD×管上所标OD值×100
是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。
可于－20度保存。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园VIP站友
订引物回来的说明书背面一般都有引物稀释计算的说明的.
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
先离心,以防打开后粉末飘散出去。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量33nmol/OD×管上所标OD值×100是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。可于－20度保存。 计算结果单位不对呀。是估算值吗？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
cresion 先离心,以防打开后粉末飘散出去。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量33nmol/OD×管上所标OD值×100是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。可于－20度保存。 计算结果单位不对呀。是估算值吗？给你提供一下我们的计算方法，引物浓度50uM，需加ddH2O的计算公式：OD值×33ug×1000000/（50uM×引物分子量），算出的ddH2O体积单位为ul
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
33乘以OD数再除以分子量再乘以1000即是所需ddH2O的微升数
浓度：10nM。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
100pmol比较好吧？注意保存多份 防止污染 啊
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
最好用DEPC水,用ddH2O有可能被污染,尤其是做RT-PCR!
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我提供一个引物稀释专用Excel计算表（也可用于建立自己的引物数据库），应用方式为纯“傻瓜式”，填好数据后，一拉填充柄即可；一点不懂Excel的就不要下载了:)
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
根据你需要的浓度，假如你需要终浓度为64PM，那么你用的DEPC水(RNA),或双蒸水（DNA)的量为33xOD值/64x分子量 ，然后乘以10的六次访，就是你要加入的水的微升数！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
所用的引物最好用灭菌的超纯水稀释，-20度保存，你可以买那些通过减压干燥的引物，最大的优点在于引物以薄膜状紧贴在管底，无需用前离心，很方便。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
引物从公司回来后我们实验室的一般步骤是：可先暂放4度冰箱,后稀释成贮存液、工作液。贮存液——100pmol/ul；工作液10pmol/ul。具体做法如下：1、取出引物，5000rmp/min，离心3min。2、小心开启离心管，加入Zul灭菌超纯水，涡旋使其溶解，浓度为100pmol/ul
Z=10000*OD数*33/引物分子量
-20度冰箱贮存。3、取20ul的100pmol/ul贮存液，加180ul灭菌超纯水，稀释成10pmol/ul，4度冰箱备用。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请问引物的工作液（10uM）可以在四度放多长时间？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
最多几个月！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园关注今日：0 | 主题：287323
微信扫一扫
[求助]请问做RT-pcr的随机引物怎么稀释？
页码直达：
这个帖子发布于11年零245天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我第一次做PCR，今天订了大连宝生物的随机引物（6mer）但不知道改怎么稀释。看以前师姐的记录写的是做RT时20ul体系加随机引物2ul，但没写终浓度。请问各位一般做RT时，随机引物的终浓度时多少？我订的这个是：80nmol(15oug,5OD)，该怎么稀释呢？另外再问一下，6mer和9mer做处的结果会有什么区别？谢谢大家！
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园版主
随机引物在整个转录本的多个位点退火，产生短的，部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5'末端序列及从带有二级结构区域或带有逆转录酶不能复制的终止位点的RNA模板获得cDNA。为了获得最长的cDNA，需要按经验确定每个RNA样品中引物与RNA的比例。随机引物的起始浓度范围为50到250ng每20μl反应体系。至于如何稀释，请根据此终浓度计算。一般来说，9mer比6mer含有更多的可能序列（分别49和46），但并不会改变结果的有无，只是效果不同。在我们实验中，6mer和9mer混用效果更好。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
十分感谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园关注今日：0 | 主题：287323
微信扫一扫
在线急盼啊————两个OD的干粉状引物要怎么稀释备用啊
页码直达：
这个帖子发布于13年零294天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
刚买回来的两个OD的干粉状引物要怎么稀释备用啊？一般浓度稀释到多呢？哪位战友能给个具体的实际操作步骤或细节啊？在线急盼啊
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
收起全部有料回复
合成引物的单子上应该有算法：1OD=33ug1个碱基的分子量=324.5（以上为近似值，通常都这样用）1条引物的分子量=碱基数*324.5质量数=OD*33ug摩尔数=质量数/分子量
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
先离心！然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液（约100μM），保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。引物浓度不宜偏高，浓度过高有两个弊端：一是容易形成引物二聚体（primer-dimer），二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时，容易产生非特异性产物。一般说来，用低浓度引物不仅经济，而且反应特异性也较好。一般终浓度用0.25-0.5pM/μl较好。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
先离心！然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液（约100μM），保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。引物浓度不宜偏高，浓度过高有两个弊端：一是容易形成引物二聚体（primer-dimer），二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时，容易产生非特异性产物。一般说来，用低浓度引物不仅经济，而且反应特异性也较好。一般终浓度用0.25-0.5pM/μl较好。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
首先，强烈感谢主任的热情帮助，您总是最快的回复，最好的答案。另外，由于我是新手，想再请教主任几个比较菜的问题，还望您指导：1 引物的分子量如何计算？
比如：AAGCTTTTACCGC的分子量是多少？2
OD值&&，1个OD值是不是等于40UG。3 质量数，质量数的含义是什么，怎么计算？4摩尔数（μmol）和终浓度(pM)和稀释水量（μl）&&是不是计算稀释引物都要用到以上四点的各个参数？具体的公式是什么呢？向您再次致谢！谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
pigeon2003909 编辑于
合成引物的单子上应该有算法：1OD=33ug1个碱基的分子量=324.5（以上为近似值，通常都这样用）1条引物的分子量=碱基数*324.5质量数=OD*33ug摩尔数=质量数/分子量
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
嘻嘻，主任真是快，小女子佩服您啊，您这是厉害啊
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我补充问一点，先离心的原因是什么？直接把算好的ddH2O加进去颠倒混匀后不是效果一样么？另外，我们实验室的好象都习惯在静置4度过夜，这样引物分子能更好的扩散，均匀分布于液体中，个人认为这样也是很有道理的
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
因为引物合成后是干粉状的，在运输过程中可能会沾到管壁或管盖上，直接打开有些粉末可能会飘出去，引物的量就减少了。先离心使粉末都到管底，可以避免这种现象的发生。4度过夜也可以，不过一般室温10分钟，吹打混匀即可。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
先离心,以防打开后粉末飘散出去。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量
33nmol/OD×管上所标OD值×100
是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。
可于－20度保存。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园VIP站友
订引物回来的说明书背面一般都有引物稀释计算的说明的.
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
先离心,以防打开后粉末飘散出去。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量33nmol/OD×管上所标OD值×100是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。可于－20度保存。 计算结果单位不对呀。是估算值吗？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
cresion 先离心,以防打开后粉末飘散出去。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量33nmol/OD×管上所标OD值×100是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。可于－20度保存。 计算结果单位不对呀。是估算值吗？给你提供一下我们的计算方法，引物浓度50uM，需加ddH2O的计算公式：OD值×33ug×1000000/（50uM×引物分子量），算出的ddH2O体积单位为ul
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
33乘以OD数再除以分子量再乘以1000即是所需ddH2O的微升数
浓度：10nM。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
100pmol比较好吧？注意保存多份 防止污染 啊
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
最好用DEPC水,用ddH2O有可能被污染,尤其是做RT-PCR!
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我提供一个引物稀释专用Excel计算表（也可用于建立自己的引物数据库），应用方式为纯“傻瓜式”，填好数据后，一拉填充柄即可；一点不懂Excel的就不要下载了:)
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
根据你需要的浓度，假如你需要终浓度为64PM，那么你用的DEPC水(RNA),或双蒸水（DNA)的量为33xOD值/64x分子量 ，然后乘以10的六次访，就是你要加入的水的微升数！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
所用的引物最好用灭菌的超纯水稀释，-20度保存，你可以买那些通过减压干燥的引物，最大的优点在于引物以薄膜状紧贴在管底，无需用前离心，很方便。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
引物从公司回来后我们实验室的一般步骤是：可先暂放4度冰箱,后稀释成贮存液、工作液。贮存液——100pmol/ul；工作液10pmol/ul。具体做法如下：1、取出引物，5000rmp/min，离心3min。2、小心开启离心管，加入Zul灭菌超纯水，涡旋使其溶解，浓度为100pmol/ul
Z=10000*OD数*33/引物分子量
-20度冰箱贮存。3、取20ul的100pmol/ul贮存液，加180ul灭菌超纯水，稀释成10pmol/ul，4度冰箱备用。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请问引物的工作液（10uM）可以在四度放多长时间？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
最多几个月！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园}