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黑米饮料及其抗化活性的研究.pdf 49页
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黑米饮料及其抗化活性的研究
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--------------------------Page1------------------------------摘要摘要黑米不但具有丰富的营养成分，而且还富含黄酮、花色苷等保健功效成分，具有延缓衰老预防疾病的功效。我国是黑米资源最丰富的国家，云南、贵州、广东、广西、陕西、福建、湖南、江苏等省均有分布。为了充分利用我国这一丰富的种质资源，进一步提高黑米资源的附加值以及利用率，本论文以黑米为原料研制成一种全新的健康的功能饮料。建立了浸提和糖化酶解结合的黑米饮料生产工艺，首先对烘烤黑米进行了浸提，目的在于将其中的功效成分最大程度的提取到饮料中。通过单因素及正交实验确定了最佳浸提工艺为：料液比1：10，浸提温度75℃，浸提时间75min。在此条件下可将黑米中61．08％的花色苷提取到饮料中。糖化酶解工艺中，以酶解液的DE值为指标，通过对影响酶解反应各因素的单因素考察和正交试验优化，确定了最优糖化工艺条件：反应温度60℃，加酶量100u／g原料，反应pH值为4．5，在此条件下DE值达到96．71。采用气相色谱质谱技术对黑米饮料进行了分析，分析表明黑米饮料中醛类和醇类组分是主要的香气成分，而经过烘烤后的黑米饮料较未烘烤黑米饮料增加了10种香气成份，最为明显的是吡嗪类物质，它们赋予产品特殊浓郁的香味。同时还考察了光照对产品稳定性的影响，实验结果发现，冷藏和避光储藏有利于饮料中花色苷含量的保留。研究了黑米饮料制作过程中黑米浸提液、酶解液以及黑米饮料的抗氧化作用，具体包括在亚油酸体系中的抗氧化能力、还原能力、清除DPPH·自由基、清除超氧阴离子自由基、螯合金属离子能力、以及抑制H202诱导小鼠红细胞溶血和肝细胞产生MDA等抗氧化活性。研究结果表明，黑米浸提液抗氧化活性最强，成品抗氧化活性次之，而黑米酶解液的抗氧化活性最差。关键词：黑米饮料制作工艺风味物质体外抗氧化活性--------------------------Page2------------------------------AbstractAbstractBlackhashasrice，whichandfunction，notabundantanti—agingprophylacticoIllynutrionalbutalsorichesinbioactivesuchasflavonoidsandcomponentscomponentsordertomakefulluseofthisresourceinmakefurtheranthocyanins．Inand0111&countryonofblacktheutilizationratioandadded-valuenovelcereal-basedprogressrice，abeverage，blackricewasdeveloped．beverageThesoakedtoextractmoreroastedblackriceWasfunctionalthecomponents．AndandconditionWasfactorial75extractingoptimizedbyorthogonalofmaterialto10：1．Thenthe℃，timematerialswereand75min，ratioliquidliquefiedsaccharifiedthermostableandbya-amylaseglucoamylase．Theenzymatichydrolysisconditionofwasfromfactorialandglucoamylaseoptimizedorthogonalexperiments：raW4．5．TheDEvaluecalltemperature60&C，enzyme100u／gmaterial，andquantitypHachieyed96．71underthiscondition．Thevolatilefavorofblackriceweresolidcomponentsbeveragebyanalyzedphasemicroextraction-gaschromatography-massandalcoholsarethemainflavor．10kindsofnewofwhichwereaddedflavors，mostpyrazinesfull-bodiedtheaftertheflavortoproducedmaterialWasroasted．Thebeverage，werestabilityofblackriceWasstudiedthefactorofstoretheandtemperature，andbeveragebYlight．Cold
正在加载中，请稍后...4.2将电热板置于通风橱中，温度调至180℃（刚开始调高点也无所谓，让电热板快点升温）。待消化罐冷却后，将其置于电热板上加热去硅及残留的氢氟酸，将有大量白烟冒出。加热至罐内液体呈半个指甲盖大小时取下，放在通风橱内，白烟冒尽取出。做这项工作的时候一定要全副武装，气味很呛，强酸很危险，电热板上还很烫~
4.3用蒸馏水将消化罐内的消解液洗入50mL的比色管内，用蒸馏水定容至标线，摇匀，静置。（至此可以按照速效K方法利用火焰光度计测定土壤全K含量。不用醋酸铵浸提，在比色管中吸取1mL，然后加入10mL氯化锂，记录检流计读数。当然，别忘了作标线。呃，速效K测定放后边了，自己找吧~）到这一步也可以选择拿着比色管到分析测试中心去测，￥5一个样，很省心省力，也不贵。如果想要亲力亲为，就吸取10mL稀释的消解液至50mL比色管中，用蒸馏水稀释至25mL，加二硝基酚指示剂2滴，先滴入几滴氢氧化钠溶液使其呈黄色，再用稀硫酸调至无色，此时溶液pH值约为3。加入5mL钼锑混合显色剂，定容至标线，摇匀。吸液时个人习惯都不同，我的习惯是用大肚的10mL移液管，据说这个比直筒身材的准，吸取待测液前先用其润洗一遍（就是第一遍吸的不要），移液之后先用蒸馏水润洗，然后用滤纸稍微吸干外围的水分，然后进行下一个样品的吸取。同时，也要配置标准曲线溶液，用移液枪分别取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL磷标准溶液于50mL的比色管中，用蒸馏水稀释至25mL，利用二硝基酚、氢氧化钠和稀硫酸调节pH值，然后加入5mL钼锑混合显色剂，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
4.4定容完成之后，让其静置显色，国标上的说法是在20℃室温下显色15min，考虑到温度可能存在差异，也为了让其充分显色，一般30min~1hour都没有问题。此时，可以打开分光光度计了，反正也要预热30min。预热时可以洗洗瓶子、比色管之类的，注意哦，由于转了两次比色管，还要配置标线，需要的比色管大概是（待测样品个数+4）*2+7，请预先准备好。预热差不多了，就可以进行分光光度计的配准了（我也不知道能不能叫“配准”，管他呢~）
4.5将分光光度计的坡长调至700nm处，选择OA/100%处，貌似是这样，然后调归100。用蒸馏水清洗2个及以上比色皿，倒入超过其体积2/3的蒸馏水，放入仪器中比色。我一般用2个，多了也顾不过来。如果这两个比色皿的读数一致，说明其干净程度相同，即提供了一个可以比较待测液的标准。如果不同或是距100过低，则需用擦镜纸仔细擦拭，用稀酸或洗液（重铬酸钾+硫酸）浸泡，或用超声波清洗器清洗干净。符合要求后，将对应值调至100。然后选择AT/CF键，此时两个比色皿都为0.000。一个比色皿留在分光光度计内，做基准之用，另一个取出，倒去蒸馏水，倒入待测液。一般先对标准溶液按其浓度从低到高进行测定，防止高浓度影响低浓度的吸光值。但每次测定最好都先用待测液润洗，然后用滤纸小心吸取比色皿外边的液体。
4.6根据标准溶液的浓度和吸光值，绘制标准曲线。然后根据标准曲线和待测液的吸光值，计算其P浓度，再根据分取倍数这算土壤全P含量。由于全P进行了多次稀释，这里不详细介绍其计算方法。在后文会提到如何用标准曲线计算对应养分浓度，并折算其土壤含量。
方法类似，注意分取倍数就是了。
1.7有效P――碳酸氢钠法
中性、石灰性土壤中的速效磷，多以磷酸一钙和磷酸二钙状态存在，可用碳酸氢钠提取到溶液中，同时使浸提液中钙离子形成碳酸钙沉淀，然后将待测液用钼锑抗混合显色剂在常温下进行还原，使黄色的锑磷钼杂多酸还原成为磷酸钼蓝，可通过比色测定。 2.主要仪器
三角瓶（250mL和150mL）、量筒、振荡机、漏斗、移液管、比色管、分光光度计、定量滤纸（12.5cm+18cm） 3.试剂
3.1碳酸氢钠浸提液（0.5mol/L）：称取42.0g碳酸氢钠（NaHCO3）于水中，用蒸馏水定容至1L。在有效磷的测定中，碳酸氢钠的用量很大，泡滤纸和活性炭，做浸提液，建议先准备一个5L左右的试剂瓶或容量瓶若干。
3.2无磷活性炭：将活性炭用0.5mol/L的碳酸氢钠溶液浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤。方法是将抽气漏斗洗干净，并用蒸馏水冲洗数次。将两张定量滤纸（18cm）交叠铺于抽气漏斗底部，喷上少许蒸馏水，使滤纸紧贴漏斗底部和旁边。将浸泡后的活性炭倒入，同时，将连通抽气漏斗的水龙头开到最大。用蒸馏水多淋洗几次，以防烘干后的无磷活性炭含有碳酸氢钠白色结晶。
3.3钼酸盐溶液：将208.8mL浓硫酸加入400mL水中，不断搅拌，冷却至室温。另溶解20g钼酸铵〔（NH4）4H2O〕于200mL水中。溶解0.5g酒石酸锑钾〔KSbC4H4O7?1/2H2O〕6Mo7O24?于100mL水中。在不断搅拌下将硫酸溶液徐徐加入钼酸铵溶液中，再加入酒石酸锑钾溶液，用蒸馏水稀释至1L，贮于棕色瓶中。注意事项参照全P测定。
3.4钼锑抗混合显色剂：在100mL钼酸盐溶液中，加入1.5g抗坏血酸，使用前配制。 3.5无磷滤纸：把定量滤纸置于碳酸氢钠溶液中浸泡过夜，使用时取出使用即可。取出的时候把手洗净，轻轻挤出水分。
3.6磷贮备液：称取0.2197g烘干的KH2PO4溶于水，并加入2.5mL浓硫酸，定容于1L，则P浓度为50mg/L。
3.7磷标准液：测定当天将磷贮备液稀释10倍，即为磷标准液（5mg/L）。 4.步骤
4.1称取通过1mm孔径筛的风干土样2.5000g于250mL三角瓶中，用漏斗加入50mL碳酸氢钠溶液，再加入1.5g无磷活性炭，在振荡机上振荡30min，立即用无磷滤纸过滤至150mL三角瓶中。
4.2吸取滤液10mL于50mL比色管中，用蒸馏水稀释至25mL，加入5mL钼锑混合显色剂，
定容至标线，摇匀。注意，由于NaHCO3与混合显色剂中的酸反应会产生大量CO2，必须轻轻摇晃比色管，直至CO2全部放出才可进行定容和充分摇匀。如果CO2未放完，就盖上比色管的盖子，很容易喷出，造成损失。
4.3在室温下放置30min~1hour后，于700nm波长处，使用1cm玻璃比色皿测定吸光度，从标准曲线上对照得到有效磷含量。
4.4标准曲线：分别取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL磷标准溶液于50mL的比色管中，分别加入碳酸氢钠溶液10mL（与所取滤液体积一致），然后用蒸馏水稀释至25mL，分别加入5mL钼锑混合显色剂，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。于700nm波长处，用1cm玻璃比色皿测定吸光度，绘制标准曲线。
附：土壤全P记录表格及计算（淋溶褐土-）
表2是标准曲线的记录表。例如，在50 mL的比色管中加入1.0 mL磷标准液（5mg/L），则比色管内磷的浓度为：1.0*5/50=0.1mg/L。以吸光值为横坐标，比色管中的磷浓度为纵坐标，得到图1。磷浓度与吸光值呈线性关系，一般决定系数R2在3个9以上。得出的一次线性方程即可用于计算土壤的磷浓度。
表2 土壤有效P测定标准曲线
加入（mL） 吸光值 浓度（mg/L）
0.0 0.006 0 0.5 0.033 0.05 1.0 0.058 0.1 2.0 0.108 0.2 3.0 0.159 0.3 4.0 0.210 0.4 5.0 0.261 0.5
图1 土壤有效P测定标准曲线
将土壤测定所得的吸光值带入拟合方程，可以得到各土壤样品对应比色管的磷浓度。
但是，由于存在系统误差，如蒸馏水或过滤环节中存在P，需要把空白部分减去。可以用样品的吸光值减去空白吸光值，也可以用计算出来的磷浓度减去空白计算出来的磷浓度，本计算中采用后者。由于比色时只吸取了10 mL滤液，将其定容至50 mL，即滤液被稀释了5倍，因此，滤液的浓度等于比色管磷浓度*5。滤液中的磷含量等于滤液磷浓度乘以50 mL，也就是所取的土壤样品中可以浸提出的有效磷。因此，土壤有效磷含量=滤液浓度*50/土样质量。
表3 土壤有效P记录和计算
土样编号 MY MY MY MYC MY MY MY MY MY MY 空白1 空白2 空白平均
采样深度 （cm） 0-20 20-40 40-60 40-60 60-80 80-100 0-5 5-10 10-15 15-20
质量(g) 2.6 2.0 2.4 2.3 2.1
吸光值 0.021 0.040 0.090 0.092 0.088 0.079 0.023 0.019 0.020 0.023 0.013 0.013
比色管浓度 （mg/L） 0.028 0.065 0.164 0.168 0.160 0.142 0.032 0.024 0.026 0.032 0.012 0.012 0.012
比色管-空白 （mg/L） 0.016 0.053 0.152 0.155 0.148 0.130 0.020 0.012 0.014 0.020
滤液浓度（mg/L） 0.079 0.266 0.758 0.777 0.738 0.649 0.098 0.059 0.069 0.098
土壤含量（mg/kg） 1.574 5.312 15.151 15.545 14.757 12.985 1.967 1.180 1.377 1.968
1.8速效K――火焰光度法
速效K是最好测的土壤化学指标之一，除了醋酸铵的醋味，其实还可以忍受啦~其原理是用中性的醋酸铵（CH3COONH4，1mol/L）溶液浸提土壤时，NH4+与土壤胶体表面的K+进行交换，连同水溶性K+一起进入溶液。浸提液中的K可直接用火焰光度法测定。 2.主要仪器
三角瓶（250mL和150mL）、量筒、振荡机、漏斗、移液管或移液枪、比色管（50mL的小容量瓶也可以，用于配制标准曲线）、火焰光度计、10 mL小烧杯（火焰光度计专用）、定性滤纸（12.5cm） 3.试剂
3.1醋酸铵溶液（1mol/L）：称取77.08g醋酸铵（CH3COONH4）溶于水中，用蒸馏水定容至1L。很多化学分析讲义上要求调节pH值，但本身醋酸铵接近中性，目前的测定中基本没有必要。如何将质粒的浓度换算成拷贝数(质粒,拷贝数,荧光定量,标准曲线) - PCR实验 - 生物秀
标题: 如何将质粒的浓度换算成拷贝数(质粒,拷贝数,荧光定量,标准曲线)
摘要: [如何将质粒的浓度换算成拷贝数(质粒,拷贝数,荧光定量,标准曲线)] 各位大虾，想请教一下，我准备做荧光定量PCR检测病毒数量，用质粒做标准品，建立标准曲线，质粒测了浓度，但不知道如何换算成拷贝数，请各位指点一下，谢谢！ 关键词:[质粒 拷贝数 荧光定量 标准曲线 标准品 病毒]……
各位大虾，想请教一下，我准备做荧光检测病毒数量，用质粒做标准品，建立标准曲线，质粒测了浓度，但不知道如何换算成拷贝数，请各位指点一下，谢谢！
拷贝数(copies/ml)=质粒浓度(ug/ml) x 阿弗加德罗常数/质粒分子量
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电话：021-用BCA法蛋白定量用酶标仪测出来的数值怎么计算蛋白浓度啊？ - 实验交流 - 生物秀
标题: 用BCA法蛋白定量用酶标仪测出来的数值怎么计算蛋白浓度啊？
摘要: [用BCA法蛋白定量用酶标仪测出来的数值怎么计算蛋白浓度啊？] 我用的是piercenet的蛋白定量试剂盒。有八个样品，用酶标仪测得的标准蛋白得A570值分别是0 370，0 358，0 362，0 459，0 427，0 419，0 469，0 518第一个没加标准蛋白怎么测出来得是0 370而不是0啊？而且整体的趋势不是逐渐增大的，是不是测的不准啊？加了10ul样品，A570分别是1 920，1 902，1 914，1 930，1 904，1 906，1
关键词:[蛋白定量 标准蛋白 吸光度 标准曲线 试剂盒 横坐标]……
我用的是piercenet的蛋白定量试剂盒。有八个样品，用酶标仪测得的标准蛋白得A570值分别是0.370，0.358，0.362，0.459，0.427，0.419，0.469，0.518第一个没加标准蛋白怎么测出来得是0.370而不是0啊？而且整体的趋势不是逐渐增大的，是不是测的不准啊？加了10ul样品，A570分别是1.920，1.902，1.914，1.930，1.904，1.906，1.892，1.939 这八个数很接近是不是说明样品的蛋白浓度差不多啊？ 根据这些吸光度怎么计算出样品的蛋白浓度啊？以标准蛋白的浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制出来的标准曲线不通过原点啊？这是怎么回事啊？我是严格按照说明书的步骤做的怎么会这样那？我是第一次做蛋白定量，问的问题可能很基础，请大家指点一二
附上我用的BCA蛋白浓度测定试剂盒：1.配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。2.稀释标准品：取10微升标准品（5mg/ml BSA）用PBS稀释至100微升（标准品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。3.将稀释的标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板孔中，加PBS补足到20微升。4.加适当体积样品到96孔板中，补加PBS到20微升。5.各孔加入200微升BCA工作液，60℃放置30分钟。6.冷却到室温,在预热的酶标仪上测定A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
要把测出来的标准BSA浓度和配制浓度用origin软件处理数据，并绘制标准曲线然后根据标准曲线计算游离蛋白浓度
你应该是没有设好调零孔，只好重做后者把第一个没加标准蛋白的孔作为调零孔，其他各孔减去其OD值0.37就可以了。你的蛋白浓度太高，超出曲线外，应该进行稀释，至少10倍以上。
求出标准曲线后，你的蛋白样品可以通过曲线求出来，注意乘以稀释倍数。用EXCEL可以很方便地进行计算分析并做曲线图！
我没有做过蛋白质测定，但是现在准备选择一种方法对某一种中药提取物进行蛋白质含量测定，查过很多文献，曾也有用蛋白定量试剂盒，说这种方法比较简便，而且结果准确。不知用蛋白定量试剂盒测定含量，还需要其它设备仪器吗？
标准蛋白数据不准，我想你应该作三个平行才可信。此外用酶标仪进行蛋白微量测定时，操作中的严格是十分重要的，要保证一个枪头只用一次，不能图省事。酶标板加样前最好预读板一次，用于后继测定样品时扣除，因为酶标板各孔还是有一定的差别的，尤其对于吸光度的测量来说，导致的误差有一定影响。标准曲线：x轴－BSA量（ug） y轴－A570值由样品A570值可换算出样品蛋白的量（ug），让后此值除以20ul，即得蛋白浓度（ug/ul）.
如果是考马斯亮蓝做标准曲线的话，这个标准曲线做出来的X：是蛋白浓度。Y：是吸光度么 ？还是楼主问的问题我用的标准蛋白的第一空加的是0 可是为什么会有测出吸光度呢 ？我是初学者，请各位高手赐教！
如果是考马斯亮蓝做标准曲线的话，这个标准曲线做出来的X：是蛋白浓度。Y：是吸光度么 ？还是楼主问的问题我用的标准蛋白的第一空加的是0 可是为什么会有测出吸光度呢 ？我是初学者，请各位高手赐教！G250结合到塑料表面也会显色，你看看取Bradford用过的枪头就明白了
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毛轴蕨多糖的提、分离纯化与结构研究.pdf 80页
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毛轴蕨多糖的提、分离纯化与结构研究.pdf
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--------------------------Page1------------------------------浙江工商大学硕士学位论文毛轴蕨多糖的提取、分离纯化与结构研究一一摘要天然多糖由于在抗氧化、抗衰老、抗肿瘤和提高免疫力等方面有着很高的生物活性，渐渐成为研究的热点。毛轴蕨(Pteridiumrevolutum)是蕨类的一种，作为一种食药两用植物，在食品、药品和保健品领域中应用前景广阔，因此毛轴蕨多糖的研究具有理论和实际意义。本文从毛轴蕨粗多糖的提取、分离纯化和结构分析三个方面着手进行研究，得出的主要结果如下：1、建立毛轴蕨粗多糖的提取工艺：料液比为1：20(g／mE)，90。C浸提3h，提取3次，计算出粗多糖的得率为14．9％、总糖含量为39．96％、还原糖含量为5．92％。FastFlow离子交换柱初2、粗多糖经过脱蛋白，DEAE．SepharoseG-200凝胶柱再次纯化得到了三个精制多糖，次纯化，经Sephadex105105Da。Da、8．392xDa和7．370x3、通过红外光谱对均一多糖特征官能团的分析，酸水解对其主链和侧链单糖组成的分析，高碘酸氧化和Smith降解结合甲基化对其单糖残基糖苷键键型的分析，最后结合核磁共振波谱的分析，得出了PNP、PAP一1和PAP-2部分可能的结构：PNP主链可能主要由甘露糖和葡萄糖组成；残基为0【型，可能存万方数据--------------------------Page2------------------------------浙江工商大学硕士学位论文1—2，3，4)残基键型和能被高碘酸氧化的1一、1—2、l一4、1—6、1—2，6、1—4，6残基键型。残基等键型，残基为O【型。主链可能主要由半乳糖(1—3)和甘露糖(1—3，6)组成，侧链可能主要由鼠李糖(1—3)、阿拉伯糖(1—4)侧链边缘，葡萄糖(1一)和甘露糖(1一)可能是末端残基。残基等键型，残基为0t型。其中主链可能主要由半乳糖(1—3)和甘露糖(1—2，4)组成，侧链可能主要由鼠李糖(1—3)、阿拉伯糖(1—4)侧链边缘，检测到的葡萄糖(1一)和半乳糖(1一)可能是末端残基。PAP一1可能的部分结构片段为：。叫岫j3【*叶“印】3J2a-D-Mmpll4【B也．A砷】6l【a-L-Rhap]43tl【n—D-Galp]46[a-D‘xy纠2la-D-(3lcpⅡ万方数据--------------------------Page3------------------------------浙江工商大学硕士学位论文PAP-2可能的部分结构片段为：0toD-Galpll3[a-D-Fucphll2陋。D-M唧12l4【15-L-1．Arapl4l【n山§酬4l【a09a驷bolIa-D-Xylp]34la-D-Glep关键词：毛轴蕨；多糖；提取；分离纯化；结构研究Ⅲ万方数据--------------------------Page4------------------------------浙江工商大学硕士学位论文ONSTUDIESRIDESANDSTI之UCTUREANA工YSISOFPOLYSACCHAREVOLUTIMFROMPTE对DmMABSTRACThavebeenoninMoreandmoreattentioncapturedpolysaccharidesrecentduetotheirinantioxidantyearshighbioactivityaction，anti-aging，amedicineandfoodandenhancement．Asanti．tumoreffectimmunityrevolutumwillbeinfem，Pteridiumbroadlyapplicatedherbageandhealthfields．Mostresearchwasconcentratedfood，medicineproductthreetheextractionofonrevolutumfromaspects，namelypteridiumfromPteridiumandrevolutum，isolationpolysaccharidepurification，ofinthismainresultsareasstructurepaper．Thestudypolysaccharidefollows：crudefromPteridium1、TheextractionofprocesspolysaccharideWasthreewasestablishedasfollows：theextractionrevolutumrepeated3hourstimeattheof90℃withth
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