肌动蛋白细胞骨架架随着细胞的长大也同时变大吗?

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2014年07月份
近日,上海交通大学生命科学技术学院张大兵教授研究团队发现微丝结合蛋白RMD是生长素—微丝从细胞核到细胞质反馈调控环通路的重要因子,在生长素信号和微丝成束及排布过程中发挥重要的连接作用。本研究为生长素经细胞核信号途径调控植物细胞生长提供了一个研究范式,并在细胞和分子水平解析了新的植物细胞生长和形态建成调控模式,对以理想株型为目标的作物性状改良具有重要的意义。相关文章发表于近期的《PNAS》杂志上。
2014年04月份
日Science Signaling期刊封面文章揭示核骨架尤其核纤层蛋白A与细胞质骨架肌动蛋白在T细胞活化中的合作。
2014年04月份
从远处看,叶片的顶部看上去像一个无缝整合的表面;然而,近距离看,光滑的外表事实上是由许多种形状和大小不同的细胞混杂组成的。感兴趣的是这些细胞如何分别呈现它们自身独特的形状,加州理工学院生物学家Elliot Meyerowitz,博士后学者 Arun Sampathkumar及其同事寻找扁平细胞中准确地形状控制因子,这是在有花植物叶片上发现的迷惑的上皮细胞。
2014年04月份
日Structure期刊封面文章介绍大假单胞菌噬菌体编码一种微管蛋白样细胞支架蛋白,称为PhuZ,它能在受感染细胞中形成一种纺锤体样细胞骨架专为病毒裂解增长。
2013年08月份
细胞骨架(cytoskeleton)是真核细胞中由蛋白质聚合而成的三维的纤维状网架体系。细胞骨架包括微丝、微管和中间纤维。细胞骨架在细胞分裂、细胞生长、细胞物质运输、细胞壁合成等等许多生命活动中都具有非常重要的作用。
2013年04月份
太空零重力条件下,地球人体免疫细胞细胞的移动性会降低。这或许关系到宇航员在太空中免疫能力的下降。
2013年01月份
科学家们知道,高等生物的细胞组织的发展与其外形,维护和功能密不可分。但是,细胞究竟是如何实现理这一壮举的呢?现在来自斯克里普斯研究所(TSRI)的科学家揭示了一种称为α-catenin的蛋白质结构。相关论文发表在1月6日的 Nature Structural & Molecular Biology杂志上。
2012年12月份
近日,来自中国科技大学生命科学学院的研究人员发表了题为“EB1 acetylation by P300/CBP-associated factor (PCAF) ensures accurate kinetochore–microtubule interactions in mitosis”的研究论文,证实借助EB1的乙酰化作用,p300/CBP相关因子(p300/CBP-associated factor,PCAF)确保了有丝分裂中着丝粒-微管相互作用。
2012年11月份
人们一直不清楚肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)的遗传基础,来自马萨诸塞大学的科研人员利用外显子测序,揭示了细胞骨架通路的改变可能会刺激ALS,并为细胞骨架通路成为ALS的治疗靶点提供基础。
2012年06月份
蛋白微管的等效弯曲刚度可以用持续长度衡量,利用不同的实验方法会测量得出持续长度会相差几个数量级,这是困扰生物学家的一个“硬骨头”,近期,兰州大学王记增课题组就这一难题给出了完美的解答,相关研究成果发表在《生物物理学杂志》上。
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重组人生长激素作用下成骨细胞细胞周期及细胞骨架改变的体外研究
作者:郭三萍,石勇,李晓红,宋玮 【关键词】& 成骨细胞;重组人生长激素;细胞周期;细胞骨架 &&& 【Abstract】& AIM:& To observe the changes of& the cell cycle and cytoskeleton of rat calvarial osteoblasts after stimulated by recombinant human growth hormone (rhgh ). METHODS: Osteoblastic cells from rats were incubated in the medium supplemented wiht& rhgh at different doses (10, 200 μg/L), and then the changes of cytoskeleton and cell cycle were detected.& RESULTS: Quantitative analysis showed that osteoblasts were arrested in S phase and G2/M phase, however, green fluorescent density and red fluorescent density (nucl) were not significantly changed. The filamentous Factin distributed in bunches and was stained strongly and evenly. The outline of nucleus was clear. CONCLUSION: Rhgh exerts a direct anabolic effect on osteoblasts, but no obvious& effect on cytoskeleton of rat osteoblasts.&&& 【Keywords】 recombinant
cytoskeleton&&& 【摘要】目的: 观察重组人生长激素(rhgh )对体外成骨细胞(OB)细胞周期及细胞骨架Factin的影响. 方法:用浓度为10和200 μg/L的重组人生长激素加入大鼠OB培养体系,观察对大鼠OB的细胞周期及细胞骨架的影响. 结果: 定量分析表明,在rhgh 作用下,成骨细胞S期、G2/M期细胞百分比增加,OB的绿色荧光强度、红色荧光强度无显著变化. Factin纤维呈束状平行排列,荧光染色强,分布均匀. 结论:重组人生长激素对OB的合成代谢有直接影响,但对细胞骨架无显著影响. &&& 【关键词】 成骨细胞;重组人生长激素;细胞周期;细胞骨架&&&&& 口腔颌骨、牙槽骨骨量丢失是影响牙齿留存、义齿及种植体修复效果的重要因素. 骨质疏松症(osteoporosis,& OP)患者的颌骨具有不同程度的骨量丧失,OP与牙齿脱落之间也有密切的相关性[1]. 生长激素在人体生长发育中起着重要的作用,能促进蛋白质合成,影响脂肪和矿物质代谢,促进内脏、骨骼和全身生长. 基因重组人生长激素(recombinant human growth hormone, rhgh )与人体生长激素具有同等的作用. rhgh 影响骨代谢的作用机制一般有直接和间接两种方式. 直接方式是指rhgh通过成骨细胞(osteoblast, OB)的相关受体发挥作用[2];间接方式是可以通过促进胰岛素样生长因子(IGFI)的合成促进骨形成[3]. 我们观察不同浓度的rhgh 对体外培养OB细胞周期及细胞骨架的影响,以期对颌骨骨质疏松的防治提供实验依据.&&& 1材料和方法&&& 1.1材料rhgh(长春金赛药业有限责任公司);出生2 d的SD大鼠(第四军医大学实验动物研究中心);FITC标记的鬼笔环肽(Phalloidin)(Sigma) ;碘化丙啶(PI)(Sigma);& Triton X100(华美生物工程公司);流式细胞仪(美国);激光共聚焦显微镜 BioRad MRC1024 (美国).&&& 1.2方法&&& 1.2.1大鼠颅骨OB的体外培养取出生2 d的SD大鼠,弯剪断头,将头部浸入PBS培养液中分离颅盖骨. 将分离好的颅盖骨在含血清的DMEM的培养液中剪碎,大小约为1 mm3. 用眼科镊将块接种于25 mL培养瓶的底部并用探针均匀拨开,每瓶接种约20~30块. 将培养瓶底部向上加入含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养液,盖好瓶盖后再松半圈,放入CO2孵箱中,37℃ 500 mL/L CO2孵育2 h,然后翻转使瓶底朝下,以后每3 d换液1 次,待细胞铺满培养瓶时,以2.5 g/L胰蛋白酶消化,并传代培养,所用实验细胞均为第6代细胞.&&& 1.2.2OB的鉴定免疫组化检测细胞I型胶原的表达阳性,重氮盐法检测细胞具有碱性磷酸酶活性,四环素荧光染色法检测细胞具有矿化能力,提示实验原代培养细胞为OB. &&& 1.2.3实验分组① 空白对照组用基础培养基;② 实验组培养基中含有重组人生长激素,浓度为10和200 μg/L. &&转贴于论文联盟
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植物细胞骨架的光学显微镜观察
黄斌 谢卓文 徐安乐 钟建良 邹天生
(中山大学生命科学学院00级生物科学专业,广州510275)
【摘 要】本实验根据细胞骨架的特性,利用适当浓度的TritonX-100处理洋葱鳞茎内表皮细胞,破坏细胞内大多数蛋白质而保存细胞骨架系统,再经考马斯蓝染色,在光学显微镜下观察细胞骨架,对细胞骨架的分布,膜骨架,核骨架,胞间连丝等进行了初步的研究。
【关键词】细胞骨架,光学显微镜,纤维,网络结构
细胞骨架是真核生物细胞中的重要结构,起细胞支架的作用,并参与胞内物质运输、细胞运动、分泌吸收、细胞通讯、有丝分裂等。由于与细胞各项功能的密切关系,细胞骨架的研究已成为当今细胞生物学中较具吸引力的领域之一。对细胞骨架的研究须先对其进行观察。本实验以洋葱鳞茎内表皮细胞为材料对细胞骨架进行观察研究,基本原理是细胞内脂质和大部分蛋白质可与去垢剂Triton-100形成去垢剂-蛋白/脂质复合物,从而溶于水中被提取,而结合成纤维状的细胞骨架蛋白则保持其在生活细胞中存在的状态。之后用考马斯亮蓝对蛋白质染色,使骨架系统在光学显微镜下可见,从而对其进行观察研究。
2 材料与方法
新鲜洋葱鳞茎,撕取内表皮,切成约0.5cm×0.5cm大小。
光学显微镜、精确天平、0.02ml移液枪、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
2.3 试剂:
M-缓冲液:50mmol/L咪唑、50mmol/LKCl、0.5mmol/LMgCl2、0.1mmol/LEDTA、1mmol/LEGTA[乙二醇双(α-氨基乙基)醚四乙酸]、1mmol/L巯基乙醇。
6mmol/LPH6.8磷酸缓冲液:0.2149g Na2HPO4?12H2O、0.0816g KH2PO4 加入100ml 蒸馏水。
1%TritonX-100:0.5ml 100%TritonX-100加入A液49.5ml。
0.2%考马斯亮蓝R250:0.2g考马斯亮蓝R250粉加入甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml。
3%戊二醛:6ml 25%戊二醛加入B液44ml。
将材料置于装有PH6.8磷酸缓冲液的烧杯中,使其下沉。吸去磷酸缓冲液,用1%TritonX-100处理30分钟。吸去TritonX-100,用M-缓冲液洗三次,每次10分钟。0.2%考马斯亮蓝R250染色30分钟。用蒸馏水洗1-2次,展平置于载玻片上,加盖玻片,于普通光学显微镜下观察。选取骨架形态清晰、典型的细胞或细胞群,在适当放大倍数下摄像。
3 结果与分析
3.1 细胞骨架观察结果
光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见(如图1),细胞壁及其分界明显。10×10倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀,细胞核区域的纤维相对密集,蓝色浓重,甚至分辨不出网络结构,另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布;相邻细胞的密集程度基本一致,但有少数细胞有较大不同。10×40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由线性纤维交织成,纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘骨架较稀疏,但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细胞质膜的轮廓,与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相连。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化,表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
3.2 细胞骨架的分布
制片可观察到较清晰的骨架结构,但是不同切片的细胞骨架在密集度、分布上有差异,可能是处于不同生理状态或处理时间不同所致。对于同一切片,边缘部分的细胞骨架较稀疏,说明Triton-100对细胞骨架蛋白有破坏作用,也反映了细胞骨架蛋白间的结合是可逆的。
3.3 核骨架
多数切片上的细胞可见蓝色较浓重的核区(图1a),但在用Triton处理较久的切片上没有核区轮廓,表明核骨架在形态分布上与细胞质骨架并无明显(至少在光镜下)差异,但由于胞核有核纤层支撑的核膜,较难被去垢剂破坏,使去垢剂难以进入核中起作用,故需处理较长时间才能得到与胞质同样的效果。
图1洋葱鳞茎内表皮细胞骨架显微镜照片
a:10×10倍光镜下洋葱鳞茎内表皮细胞骨架(箭头示细胞核区域重染色区)
b:10×40倍光镜下洋葱鳞茎内表皮细胞骨架(上方箭头示膜骨架,下方箭头示胞间连丝处骨架纤维)
c:10×100倍光镜下病变细胞骨架与正常细胞的对比(注意两箭头处染色对比)
3.4 膜骨架
对于去垢剂的提取作用,细胞质膜首当其冲,膜脂,膜蛋白必然很快溶解,但在显微镜下可见到紧贴细胞壁的包绕细胞质的一层结构(图1b),表明细胞除胞壁维持形态外,还有膜骨架(或膜内侧细胞骨架)起作用。而且膜骨架并非孤立起作用,可观察到它与胞质内部骨架系统通过与壁垂直的纤维相连。
3.5 胞间连丝
植物相邻细胞通过胞间连丝相通,交换物质。切片上可见细胞相邻胞壁有纤维穿过(图1b),由此也验证了胞间连丝并非单纯的细胞壁上的穿孔,而是有细胞骨架参与构成的[1]。另外,切片边缘的细胞蓝色网络较稀释的现象可由胞间连丝解释:由于洋葱内表皮细胞单层排列,与鳞茎内部的茎肉细胞联系较少,少或没有胞间连丝;去垢剂要直接通过胞壁毕竟较难,但可以很快通过胞间连丝进入细胞,故边缘的细胞其胞间连丝直接暴露于外部溶液中,去垢剂进入起作用并流向内侧细胞,造成较快和较强的反应。
3.6 病变细胞的骨架
细胞骨架对细胞的生存有重要作用,故细胞骨架可在一定程度上反映细胞的生理状态。制片中可见个别细胞纤维网络与附近细胞相比非常稀疏(图1c),由于细胞骨架必须形成一定密度的网络系统才能维持细胞的正常功能,可推测这些细胞发生病变或已经死亡。这些细胞有一个特征,即胞质边缘的蓝色较浓重,但不呈纤维状,可以猜测由于病变,骨架纤维断裂,断裂片段转移到其他细胞进行再利用。
细胞骨架在细胞中呈由蛋白纤丝交织成的立体网状结构,并且处于动态变化中。细胞骨架在胞质、细胞核、质膜、胞壁中都有分布,参与细胞形态维持、物质运输、信号转导等作用。处于不同生理状态的细胞其细胞骨架有变化,可根据细胞骨架推测细胞所处生理阶段。
该实验设计简明、结果易得,但是对于细胞骨架的研究有许多不足:只能大概提供细胞骨架形态分布的情况,不同种类细胞、同种类细胞在不同生理状态下、细胞不同部位的形态分布则没有涉及;笼统地把不溶于去垢剂的物质作为细胞骨架,并且没有区分细胞骨架的不同成分;处理中将细胞破坏,观察的是死细胞的细胞骨架,且可能已受到去垢剂的影响;不能观察细胞骨架的重要特点――动态不稳定;不能观察细胞骨架与细胞器的相互关系。综上,该实验只是对细胞骨架
的最初步研究,但也是最基本的研究。对细胞骨架的深入研究要利用细胞培养,电子显微镜和荧光显微镜等技术。
参 考 文 献
〔1〕 杨军 等,洋葱花粉母细胞中胞间连丝和胞质通道内的胞质骨架,西北植物学报,)
〔2〕 徐承水 徐来祥,试论细胞骨架,生物学杂志,1996,2
〔3〕 王新宇 郭风劲 聂秀菀,洋葱鳞茎茎肉细胞原生质体胞质骨架的荧光和电子显微镜观察,西北植物学报,)
Observation on Cytoskeleton
of Onion Inner-epidermis Cell
Huang BinXie ZhuowenXu AnleZhong jianliangZou Tiansheng
(School of Life science, ZhongShan University, Guangzhou
【Abstract】 In this
experiment, we destroyed most of the protein of onion inner-epidermis
cells expect the cytoskeleton system by property concentration of TritonX-100,
then stained and observed the cytoskeletonwith light microscope. By this,
we carried out a primary study on distribution of cytoskeketon, membrane
cytoskeleton ,nuclear cytoskeleton and plasmodesmata.
【Key Words】 cytoskeleton,light
microscope,fiber,network}

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