sf9昆虫sf9细胞冻存加入FBS后,很快死亡,是怎么了

上海素尔生物科技有限公司
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价格(元)
SUER0804(XR)
Sf9细胞,昆虫卵巢细胞
1~3*106细胞/25cm2培养瓶
Sf9细胞,昆虫卵巢细胞
货&&& 号:SUER0804(XR)&
产品名称:Sf9
细胞形态: 圆形,多形
组织来源:昆虫卵巢
传代情况:P3-P5&
细胞数量:1~3*106细胞/25cm2培养瓶。
Sf9细胞,昆虫卵巢细胞
培养条件:90%Grace's Insect Medium+10%FBS
生长特性&& 半悬浮半贴壁生长
传代方法:1:2~1:8传代;2-3天传代一次。
生长条件:95%空气+5%二氧化碳 37摄氏度
生长状态:贴壁生长
存储条件:90%FBS+10%DMSO
Sf9细胞,昆虫卵巢细胞
对于贴壁细胞,若细胞漂浮:培养瓶不开封,用75%酒精擦拭后平躺置于培养箱内。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,换成新鲜的培养基;如细胞还不贴壁,将细胞离心收集移到新的培养瓶中,原培养瓶加部分新鲜培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。对于悬浮细胞:收到细胞后,将细胞全部离心,去掉旧的培养基,换成新鲜的培养基继续培养。
特别注意:(如使用公共实验室或者初次接触,建议添加双抗培养)
(1)贴壁细胞收到当天有少量或没有飘忽的细胞可以当天换液,因为路途颠簸造成大量飘忽的情况时,请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代,请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养
(2)收到细胞后请尽快更换为含10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清,(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时)
(3)如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系SUER技术人员
细胞接收后的操作流程与注意事项:
1)贴壁细胞生长缓慢;适当提高血清浓度(最高不能超过20%),或可根据该细胞生长特性生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养
2)如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡,请及时联系实验室技术人员会跟进解决
3)生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
(1)吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间,通常控制在1-2min)
(2)注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
(3)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
(4)镜下观察消化情况,在细胞生长特性边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散。请各位老师以随货说明为主
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& 昆虫SF9细胞专用血清
别名 : 昆虫SF9细胞血清
英文名称 : FBS
储存条件 : -20℃
商品货号:
商品品牌:
基本售价:您所在位置: &
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基于sf9昆虫细胞的蓝光诱导表达系统的构建论文.doc 27页
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本科毕业论文设计题目 基于sf9昆虫细胞的蓝光诱导表达系统的构建
ConstructionofBlu-rayInducedExpressionSysteminsf9insectCells
学院 生命科学技术学院 专业班级 生科1101
职称 研究员
中国·武汉二〇一五年六月华中农业大学士学位论文ConstructionofBlu-rayInducedExpressionSysteminsf9insectCells学生姓名: 蔡泽蕲
学生学号: 座机电话号码00107
学生专业: 生物学基地班
指导教师: 徐富强教授
指导小组: 吴阳博后
华中农业大学生命科学技术学院二一年六’sapplicationinproteinexpressionandthepreparationandpurificationhasmanyadvantagesoverothers.Sf9insectcellsisaplatformbaculovirusexpressionsystem.Baculovirusexpressionsystemismoreandmorewidelyappliedineukaryoticexpressionsysteminrecentyears,whichcancarryavarietyofforeigngenesneedtoexpressininsectcells,includingfungi,plants,bacteria,virusgenes.Baculovirusisdouble-strandedDNAvirus,thenaturalreservoirofwhichisinsectcell.Sincehasahighdegreeofspeciesspecificity,itnotinfectedvertebrates,positivelyharmlesstohumanandanimal.ThepresentstudyismorealfalfacrazingarmywormnuclearpolygonalbodyvirusAcMNPV.OpIE1andOpIE2,twopromotersofthevectorpMIB/v5-Hiswhichweusedtoconstructtheoptogeneticgeneexpressionsystemareearlypromoterofabaculovirus,andformerpromoterismorestronger.ThebaculovirusisOrgyiapseudotsugatamulticapsidnuckearpolyhedrosisvirusOpMNPV,thenaturalhostofwhichistheDouglasfirtussockmoth.Inspiteofthis,thetwopromoterswillstillfunctioninthesf9cells,sf21,LD652Yandotherinsectstothedrivegeneexpression.Baculovirusearlypromotercandrivegeneexpressionofcellsintheabsenceofviralfactors.Sotosomeextent,thepMIBvectorweusedalsohastheadvantagesthatbaculovirusexpressionvectorhas.Suchas:1Foldingcorrectlyofrecombinantprotein,andtheform2Abletobemodifiedaftertranslationprocessing,including:glycosylation,phosphorylation,amidationandsignalpeptidecuttingetc.,tomaketherecombinantproteinmoreclosetonaturalproteinonthe3Expressingtheforeignproteinefficiently,50%oftotal amounto4Abletoaccommodatelargefragmentexogenousgene.Currentlyexistingexperimentprovesthatthissystemplayarolein293cells,andtheresultisverygood.Soweplantointroduceittothesf9
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我需要知道昆虫细胞培养的相关实用技术和操作谁可以帮我多谢啦1
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我们实验室养的sf9和BmN细胞.所用培养基为TC-100(粉末,按配方调成澄清溶液,灭菌,分装备用),分装时按10%比例加入灭活小牛血清,4度保存备用.细胞26度培养,每4天换一次培养基.具体还想知道什么,可以联系我!
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用胰蛋白酶处里昆虫的组织,然后在灭菌条件下进行培养,过一段时间转移一半。
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请问,各位培养sf9细胞都使用的什么培养基呢?
有使用TNM-FH培养基培养sf9细胞的吗?
我用这个培养基培养sf9细胞,生长一直不好,细胞增长很少。不知道为什么呢?
请教各位高手!
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没有人培养这个细胞吗?
签到天数: 1 天[LV.1]初来乍到
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我们这边养sf9都用的是grace培养基
该用户从未签到
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用GRACE培养基,养的挺好的
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用Grace's培养基加10%的FBS,养的挺好的
签到天数: 26 天[LV.4]偶尔看看III
用Grace的培养基PH值是多少啊?
该用户从未签到
我们也用GRACE,不过细胞状态还是一般,还经常污染,你们有没有这种状况
该用户从未签到
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