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铜绿假单胞菌基因诊断及其耐药性的研究
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铜绿假单胞菌基因诊断及其耐药性的研究
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///文章正文
铜绿假单胞菌的危害
养生之道网导读：铜绿假单胞菌的危害有哪些？你知道么，铜绿假单胞菌感染后对人们的身体健康是有很大的威胁的。所以接下来就跟小编去了解下铜绿假单胞菌的危害吧！
铜绿假单胞菌的危害1、危害一铜绿假单胞菌引起的很多感生在衰弱或免疫受损的住院病人,它是重症监护室感染的第二位最常见的病原菌,是换气机相关性的常见原因。除医院内获得感染外,HIV感染者很容易在社区获得该菌的感染,而且一旦被铜绿假单胞菌感染,常可出现晚期HIV感染的体征。可发生于很多解剖部位,包括皮肤,皮下组织,骨,耳,眼,尿路和心脏瓣膜。感染部位与细菌的入口及病人的易感性有关。烧伤时,焦痂下区域可成为大量细菌侵犯的场所,进而成为引起菌血症的病灶,而菌血症常是烧伤的致死性。2、危害二在住院病人中,若口咽部有绿脓杆菌和其他革兰氏阴性杆菌共同繁殖,则气管插管,气管切开或间歇性正压呼吸可引起。囊性纤维病的后期铜绿假单胞菌性常见,分离得到的菌株有粘液状菌落的形态学特征。烧伤伴有恶性的病人常见在其血液中分离出该菌株,临床表现为革兰氏阴性败血症,有时出现坏疽性深部脓疱,其特征为直径约1cm的紫黑色病变,中央区,四周为红斑。这种病变最常见于腋下和肛门部位。该菌还是的常见病原菌,特别常见于有过泌尿科操作的病人,尿路梗阻的病人或接受广谱的病人。3、危害三假单胞菌普遍存在,而在潮湿环境尤甚。铜绿假单胞菌是存在于人类中最常见的一种假单胞菌,它偶尔可在腋下和肛门生殖道周围的正常皮肤,但除非给服抗生素,在粪中甚为罕见。该菌通常伴随毒力较强的细菌存在于病灶中,但偶尔也可单独引起暴露于外部的组织感染。假单胞菌感染通常发生于医院内。洗涤槽,防腐溶液和贮尿容器中常可发现这种细菌。通过医护人员可将病菌传给病人,特别在灼伤和重症监护室。是重要的医院内病原菌。铜绿假单胞菌之鉴别培养阳性,并经生化鉴定为假单胞菌可以确诊。可在选择培养基上并产生绿脓色素的即可鉴定为铜绿假单胞菌,若无色素或在鉴别培养基上不发酵乳糖或葡萄糖的革兰阴性杆菌,可行以下方法进一步鉴别。1、色素鉴定可将细菌接种于King A、B斜面培养基,37℃ 24h或置室温观察5天。1.1、绿脓色素:在King A斜面上呈深绿色,液体培养基接触空气处绿色明显。若色素不明显或混杂其他色素,可加氯仿于斜面,置室温观察1~24h,如仍不明显,可在氯仿液中滴加稀盐酸,绿脓色素在酸液层呈红色。1.2、绿脓荧光色素:铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌在King B斜面培养基上呈现黄绿色荧光。1.3、红脓色素:在King A斜面培养基上呈红紫色,如置37℃ 24h红色不明显,可再置室温3~5天观察。铜绿假单胞菌产生红脓毒素者较少见。4、黑脓毒素:铜绿假单胞菌在含蛋白胨培养基中生长时常有黑脓毒素产生。嗜麦芽窄食单胞菌也有黑脓毒素产生。2、其他鉴定绿脓杆菌和其他假单胞菌的主要鉴别是葡萄糖氧化分解、氧化酶、精氨酸双水解、乙酰胺酶、糖酸氧化、硝酸盐还原产氨试验均为阳性。绿脓杆菌败血症患者尿中出现铜绿色蛋白尿,将患者尿液调成酸性、碱性和中性,置于暗室分别用紫外线照射,如有铜绿蛋白尿则发生淡绿色荧光。铜绿假单胞菌之预防铜绿假单胞菌广泛存在于自然界,通过多种途径在医院内传播;因此,必须严格消毒器械、敷料,医务人员及护理员勤,认真执行无菌操作,患者应予隔离,其敷料应予焚毁。同时积极治疗原发疾患,去除诱发因素等。铜绿假单胞菌菌苗分多价和单价两种,两者对感染的防治均有一定效果,与多价高效抗血清合用可以提高菌苗的免疫原性。其他如内毒素菌苗、OPE菌苗等以细菌组分制备的化学对保护同型菌株的攻击也有一定作用。
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【求助】请问培养铜绿假单胞菌用哪种培养基好一些？
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非苛养菌一般营养琼脂就可以生长为了避免杂菌可以在mac等肠道菌选择平板上生长
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一般的培养基就可以了，37℃一天就长出来了，血平板上很特殊的味道。
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铜绿营养要求不高，一般平板都生长，但最好同时接种血平板和麦康凯；铜绿有多种菌落形态，典型的可以从菌落形态（古典型、枫叶状，边缘不整 ），颜色（铜绿可产多种色素：绿色、蓝色、红色、黑色等）、气味（生姜味）轻易判断出来，如果是不典型，就要通过系列生化反应进行鉴定；像有些粘液绿脓，生长慢，没有气味、不产色素，有些菌落小，气味、色素不明显。
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关于丁香园论文发表、论文指导
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铜绿假单胞菌在儿童临床标本中的分布与分析
　　[摘要] 目的 探讨铜绿假单胞菌在儿童送检标本中的分布及其临床意义。方法 收集2009年1月―2012年12月临床微生物实验室分离培养的366例铜绿假单胞菌，对其进行标本统计和资料分析。结果 临床各儿科和新生儿科检出的366例铜绿假单胞菌标本构成如下，呼吸道标本284例，占77.6%；粪便9例，占2.5%；血培养42例，占11.5%；尿液7例，占1.9%；各种创面及脓性分泌物16例，占4.4%；体腔积液8例，占2.2%。结论 铜绿假单胞菌主要引起儿童呼吸系统疾病，但要考虑细菌的污染与定植；其次是败血症，亦是引起儿童泌尿系统与肠道感染的重要病原菌。 中国论文网 /6/view-6441462.htm　　[关键词] 铜绿假单胞菌；儿童；标本 　　[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] （2014）11（b）-0038-03 　　铜绿假单胞菌（pseudomonas aemginosa， PA）是革兰阴性杆菌，又称绿脓杆菌，对多种药物具有耐药性，在儿童感染性疾病中检出较多。目前PA在临床分离的革兰阴性非发酵菌中仅次于鲍曼不动杆菌，居第2位（520/1 569）[1]，在PA感染的诊疗过程中，病原学诊断和药物敏感试验日益发挥重要的作用。PA在自然界分布较为广泛，水、空气、土壤、医院环境中都存在此菌，亦存在于人的皮肤、呼吸道及肠道，成为人体的正常菌群和重要的条件致病菌。儿童标本中检出PA首先要确定其致病性，明确是正常菌、污染菌、定值菌还是致病菌，否则会造成诊断和治疗的失误。在临床标本中检出PA目前对其致病作用存在一定分歧。为分析PA在儿童临床送检标本中的分布，探讨其致病性和致病机制，对于PA的微生物学检验和感染性疾病的正确诊断和治疗具有重要意义。现分析2009年1月―2012年12月间在临床微生物实验室分离培养的366例铜绿假单胞菌的资料，报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取在潍坊市妇幼保健院各科室门诊及住院的患儿，年龄1 d～15岁。各类送检标本的细菌培养与药敏试验中，共分离出PA366株，主要来自儿科病房和新生儿科病房，其中男226例，女140例。标本来源于血液、痰液、尿液、浓液、粪便、体腔积液和各种分泌物标本中。 　　1.2 标本采集 　　送检标本由临床医师采取，呼吸道痰液由儿童漱口后用力深咳出深部粘稠痰液，置无菌痰杯中；上呼吸道鼻烟试子、气管分泌物、创口、浓液分泌物用一次性无菌试子采取；无菌体液由临床医师针管抽取后置无菌容器后送检；大便标本无菌容器留取后，取脓血部分接种培养基；血培养患儿抽取患儿动脉或静脉血，置细菌培养瓶中，尽快送至细菌室培养；尿液培养常规消毒后留取中段尿进行培养并作菌落计数，革兰阳性菌≥104 cfu/mL，革兰阴性菌≥105 cfu/mL为有临床意义。 　　1.3 细菌的培养与鉴定 　　PA的分离培养与鉴定按照《全国临床检验操作规程（第3版）》进行，鉴定试剂和培养基购自杭州滨和微生物试剂公司，质控菌株ATCC27853来自山东省临床检验中心。CO2培养箱为上海力申HF90，血培养采用美国BD公司9050型全自动血培养仪。 　　1.4 统计方法 　　所有统计学数据处理采用 SPSS l9.0 软件统计分析。构成比以百分率（%）表示，统计分析采用χ2检验，多因素样本均数差异的检验采用方差分析。 　　2 结果 　　临床各儿科和新生儿科检出的366例铜绿假单胞菌标本构成如下，呼吸道标本284例，占77.6%；粪便9例，占2.5%；血培养42例，占11.5%；尿液7例，占1.9%；各种创面及脓性分泌物16例，占4.4%；体腔积液8例，占2.2%。见图1。 　　3 讨论 　　在检出的366例PA中，有284例为呼吸道标本，包括痰液、气管插管分泌物或冲洗液、咽试子等，占的比重很大，为77.6%，PA是引起儿童呼吸系统感染的重要病原菌，但检出的细菌易受口咽部和上呼吸道细菌的污染。有报道[2]支气管肺泡灌洗液培养可以降低污染率，提高分离率，但还要采取细菌定量（≥104 cfu/mL为致病菌，<104 cfu/mL为污染菌）的标准。因此检出的细菌必须结合临床综合分析，要区分正常菌群、污染菌、定值菌和致病菌。陈俊华[3]等在新生儿咽试子培养中，感染组和非感染组患者PA检出4株和0株，表皮葡萄球菌检出52株和44株，金黄色葡萄球菌检出33株和13株，分析得出感染组和非感染组表皮葡萄球菌检出率无统计学意义，而金黄色葡萄球菌有意义，PA例数少未统计。PA在正常人的皮肤，呼吸道，和肠道都有存在[4]，该研究检出的PA主要分布于呼吸道标本中（77.6%），这主要与呼吸道送检保本多和呼吸道PA定植有关。在呼吸道标本中检出PA不一定具有临床意义，应结合临床表现、标本类型、细菌数量（纯培养意义大）、标本涂片、白细胞吞噬细菌等资料综合分析。从痰中或血中等无菌部位培养出致病菌可作为病原学确诊，及时送检、多次培养出同一种细菌、或作痰定量培养则意义更大。 　　粪便中检出PA 9例（2.5%），PA可以引起食物中毒和腹泻并在食物来源和（或）粪便中检出[5-6]。PA与肠道菌群失调症有关[7]，以往常规粪便培养中只报告沙门菌、志贺菌、致病弧菌等主要感染性病原菌，但腹泻的病原菌非常复杂。感染性腹泻中肠杆菌科细菌只有沙门菌、志贺菌、耶尔森菌、和致病性大肠埃希菌4个属，检出的其它菌如克雷伯菌，变形杆菌，阴沟杆菌等尚不能明确它们的致病机制[8]。PA在粪便中检出尤其是优势生长时具有临床意义应予以报告。PA引起泌尿系感染应引起临床重视，本文共检出7例，占临床标本总数的1.9%。大肠埃希菌是引起儿童尿路感染的主要病原菌，PA虽然不是常见病原菌，但有报道其在尿路感染中仅次于大肠埃希菌和屎肠球菌，占到第3位（7.39%）[9]。PA所致尿路感染常发生于尿路器械检查后，主要因为PA在环境分布广泛，因此对做好医疗器械检查前的消毒灭菌等感染控制措施非常必要。Nunez-Pereira等[10]发现手术发生感染是很普遍的现象，特别是革兰阴性菌感染在持续增加。国内曹阳等亦报道有基础疾病如和尿路手术史儿童的社区获得性尿路感染易感性增加，特别是革兰阴性菌感染在持续增加[11]，由于它对尿路的许多药物天然及多重耐药等，应引起临床医师的重视。这类儿童更要重视微生物培养和药物敏感性试验，有助于更好的病因学治疗和相关手术的恢复。 　　在366例PA中血液标本检出42例，占11.5%，说明PA是引起儿童败血症的重要病原菌之一。由于正常血液是无菌的，且目前血流感染诊断的金标准仍是血培养，尽管有降钙素元、超敏C反应蛋白等检测指标。PA败血症病情凶险，致死率高，疾病确诊及病原学药物敏感试验对提高疗效非常关键。有报道[12]PA对亚胺培南的耐药率高达50%，碳青霉烯类抗生素的使用、患儿的住院时间、应用血液净化、糖皮质激素及哌拉西林-他唑巴坦和三代头孢菌素均为导致PA对亚胺培南耐药的危险因素。血培养标准的操作规程是采集双瓶双套血，但在儿童和新生儿由于采血困难和量少等多种原因常常只采集一瓶，这就容易造成真阳性率的降低和由于污染等原因造成的假阳性率升高。有报道指出在所有血液培养结果报告中有42.9%被认为是污染菌[13]，所以必须引起临床医师的高度关注，只有正确解释结果结果，才能正确指导临床的诊断和治疗。 　　[参考文献] 　　[1] 李耘， 吕媛， 薛峰， 等. 我国年MOHNARIN项目临床分离常见病原菌的耐药监测[J]. 中华检验医学杂志， ）： 67-86. 　　[2] 孙淑红， 胡晓峰， 朱德全.支气管肺泡灌洗液312份细菌定量培养及药物敏感性分析[J]. 中华临床感染病杂志， ）： 69-72. 　　[3] 陈俊华， 张宏艳， 孙夫强.新生儿咽试子培养的临床意义[J]. 武警后勤学院学报：医学版，）：95-97. 　　[4] 张栩， 盛传伦. 铜绿假单胞菌感染现状及耐药分析[J].中国实验诊断学， 2013， 17（1）： 199-201. 　　[5] 闫芳， 隋英杰， 孙静， 等. 桶装饮用水污染引起学生食物中毒的调查分析[J]. 中国卫生检验杂志， ）： . 　　[6] 沈瑛， 杨正林， 岳凤. 食物中毒标本中检出铜绿假单胞菌[J]. 浙江预防医学， 2010， 22（3）： 544-546. 　　[7] 崔国辉， 梁陶， 林湛， 等. 61例抗生素相关性腹泻患者失调菌群耐药性分析[J]. 检验医学与临床， 2011， 8（16）： ， 1938. 　　[8] 叶应妩， 王毓三.全国临床检验操作规程[M].3版.南京： 东南大学出版社， 2007： 820-821. 　　[9] 伏小红， 周雯， 张雪梅， 等. 22例儿童铜绿假单胞菌社区获得性尿路感染临床分析[J]. 中华儿科杂志， 2013， 51（4）： 298-301. 　　[10] Nunez-Pereira S， Pellise F， Rodriquez-Pardo D， et a1. Individualized antibiotics prophylaxis reduces surgical site infections by gram-negative bacteria in instrumented spinal surgery[J]. Eur Spine，2011， 3： 397-402. 　　[11] 曹阳， 李筑英， 张国琴， 等. 413例儿童化脓性扁桃体炎病原学及药敏分析[J].国际儿科学杂志， ） ： 107-108. 　　[12] Furtado GH， Gales AC， Perdiz LB， et al. Risk factors for hospital-acquired pneumonia caused by imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa in an intensive care unit[J]. Anaesth Intensive Care， 2010， 38： 994-1001. 　　[13] Zimerman RA， Machado DP， Constante CC， et a1. Over 18h to positivity in the BacT/ALERT system with clustered Gram-positive cocci is highly predictive of coagulase-negative Staphylococci[J]. J Clin Pathol， 2007， 60（6）： 733-734. 　　（收稿日期：）
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单项选择题铜绿假单胞菌接种在十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板上，37℃培养24h后，形成的菌落特点是A．表面湿润，菌落呈粉红色B．表面湿润，菌落呈淡绿色C．表面湿润，菌落呈灰白色D．表面干燥，菌落呈蓝绿色E．表面干燥，菌落呈灰白色
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