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肠道常见菌群荧光定量PCR检测方法的建立.pdf5页
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肠道常见菌群荧光定量PCR检测方法的建立.pdf
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? 4338 ? 现代预防医学2014年第41卷第23期 ModemPreventiveMedicine，2014，Vo1．41，NO．23 ? 实验技术及其应用 ? 肠道常见菌群荧光定量PCR检测方法的建立 程悦 ，左浩江 ，廖虹瑜 ，陈嘉熠 ，郑田利 ，裴晓方-，许欣 - 1．四川大学华西公共卫生学院
华西第四医院 ，四川成都．四川省疾病预防控制中心，四川成都 610041 摘要 ：目的 分别建立检测部分肠道常见菌群的荧光定量PCR方法，为肠道菌群及其相关疾病的研究提供快速、敏 感、准确的检测手段。方法 根据肠道细菌 16SrRNA基因序列，选择针对不同肠道细菌的特异性引物 ，建立并优化 荧光定量PCR检测方法，并对建立的方法进行特异性及重复性实验。采用基因重组技术，构建肠道常见菌群 目的基 因的重组质粒，作为PCR检测定量参考。结果 成功建立了检测大肠埃希菌、肠球菌、乳杆菌、双歧杆菌、产气荚 膜梭菌、拟杆菌、拟杆菌门菌、硬壁菌门菌以及肠道菌群总量的荧光定量 PCR方法。方法特异性试验结果表明，反 应体系与待测菌以外的其他细菌无交叉反应。重复试验结果显示 ，各待测菌 8次重复试验的变异系数均小于2％。各 待测菌标准曲线的相关系数r≥0．994，线性关系良好。结论 本研究建立的EvaGreen荧光定量PCR检测方法可以特 异的从粪便中检出部分肠道常见菌群 ，且方法重复性好，是快速、敏感、准确地检测肠道菌群的有利手段。 关键词：荧光定量PCR；肠道菌群；重组质粒标准品 中图分类号：R115 文献标志码 ：A 文章编号： 38―05 Establishmentofreal-timePCR methodfordetection ofintestinalbacteria CHENGYue，ZUOHao-jiang，LIAOHong―yu，CHENJia―yi，ZHENGTian-li，PEIXiao―fang，XU-Xin WestChinaSchoolofPublicHealth WestChinaFourthHo~ita1 ,ScihuanUnwenity,Chengdu，
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