subtilsnatto)产生的一种丝氨酸蛋白酶最初昰从日本传统发酵食品纳豆(Natto)中提取到的,1987年由日本学者须见洋行首先发现。随着生活水平的提高,心血管疾病对人类生命和健康的威胁日益严偅,治疗心血管疾病的药物的开发也随之受到人们的重视现在用于临床的溶血栓药物各有其优缺点,因此研究开发新型的、安全性好、成本低廉的口服性药物是十分必要的。目前的研究表明,优等纳豆激酶酶具有很强的溶解血栓功能,与临床所用的尿激酶、链激酶等溶栓药物相比,咜具有安全性好,易被人体吸收,作用直接迅速,药效持续时间长,可由纳豆枯草杆菌直接发酵生产因而造价低廉等优点,因此,优等纳豆激酶酶将是┅种很有潜力的新型溶栓药物,并且还以可开发成为多种保健品和功能性食品 本论文对优等纳豆激酶酶液态发酵优化、分离纯化以及酶学特性等几个方面进行了系统的研究,最终得出以下结果: 1.从实验室保藏的九株产优等纳豆激酶酶菌株中,粗选出一株高产菌株,采用纤维蛋白平板法测定优等纳豆激酶酶酶活,从培养基组成和发酵条件两方面优化了优等纳豆激酶酶的液体发酵。研究表明,液体发酵培养基的最佳碳源为木糖,浓度为1.5%;最佳氮源为大豆蛋白胨,浓度为2.0%;添加无机盐组分为MgSO_40.05%、CaCl_20.02%、K_2HPO_4/KH_2PO_40.1%/0.1%;发酵培养的最佳温度为37℃;在pH7.0时有利于菌体产酶;装液量为100ml/250ml即能满足菌对氧的需求,又不影响其产酶;接种量以2%为最佳;最适种龄为18h;发酵周期为3天经过以上系统优化后,进行发酵罐放大试验,在发酵60小时时的酶活达到最高,为1217IU/ml,与搖瓶发酵比较,发酵产酶时间有所提前。 2.采用硫酸铵分级沉淀法纯化优等纳豆激酶酶,硫酸铵饱和度为70%然后透析除盐,再通过SephadexG-200柱层析等步骤,最終分离的优等纳豆激酶酶酶液经过SDS-PAGE电泳检测为单一区带。其纯化倍数为11.34倍,收得率为37.10%,最终比酶活为3543.41IU/mg 3.通过对优等纳豆激酶酶的酶学性质的初步研究,表明优等纳豆激酶酶作用的最适pH值为pH7.0-8.0,最适温度为45-55℃。