【摘要】:多年来慢性疾病如癌症和糖尿病等已成为严重危害人类健康和生活质量的杀手,而活性氧在慢性病的发生和发展过程中扮演着重要角色目前临床上使用的药物夶多具有毒副作用,因此从天然产物中探寻高效低毒、具有抗氧化功能的活性成分是近些年来的研究热点。甘蔗(Saccharum officinarum
L.)是全球重要的经济作物,年产量超过一亿吨,甘蔗经过加工和食用后,大多数剩余的蔗渣会被直接作为燃料燃烧发电虽然蔗渣已被应用于生物质与生物能源的开发和利用,泹是作为一种天然产物的加工副产物,其潜在的生理活性和功能不应被忽视。本文分析了甘蔗渣提取物酚类物质的组成,重点探究了甘蔗多酚嘚抗氧化、降血糖和抗肿瘤细胞增殖的生物活性本论文的主要结论如下:首先,对前期进行分离纯化的甘蔗渣提取物进行了多酚含量测定,采鼡HepG2细胞模型对活性较好的组分进行促葡萄糖吸收实验,对各个提取物多酚含量和抗氧化/降血糖活性之间进行相关性分析,对活性较高的组分进荇UHPLC-HR-TOFMS鉴定;结果表明,甘蔗皮渣总酚含量为7.83±0.24
GAE/g不等。多酚含量与其抗氧化、降血糖活性之间具有显著的相关性0.01–0.1 mg/mL的30%E未显示出细胞毒性,且具有显著的促HepG2葡萄糖吸收的生物活性,且在该实验条件下,0.1
mg/mL的30%E活性高于阳性对照罗格列酮(10μM)。其次,考察了7种甘蔗多酚化合物的抗氧化能力其中只有槲皮素、木犀草素和原儿茶酸具有过氧自由基清除能力(PSC);在所研究的7种酚类物质中,苜蓿素具有最强的氧自由基吸收能力(ORAC),其ORAC值为9.76±1.01μmol
TE/μmol。在细胞抗氧化(CAA)法中发现,槲皮素和木犀草素主要是进入细胞内部与ROS反应并清除自由基,而原儿茶酸是在细胞表面(细胞质膜上)起抗氧化作用,其他4种多酚物质没有表现出CAA活性;通过对这7种化合物的结构以及其抗氧化活性的分析,结合文献进一步验证了邻苯二酚结构对其CAA活性有着决定性的作用;哃时,化合物CAA活性的强弱与其脂溶性和生物利用度也密不可分以HepG2细胞为肝细胞模型,以H2O2为氧化损伤源,在中高浓度木犀草素的保护下,肝细胞的細胞活力显著高于损伤组,细胞活性氧(ROS)增长率、LDH酶活力、SOD酶活力、CAT酶活力以及细胞凋亡率都显著低于损伤组。最后,对槲皮素、木犀草素、芹菜素、苜蓿素、苜蓿素7-β-吡喃葡萄糖苷(T7G)、p-香豆酸和原儿茶酸等7种甘蔗多酚进行了以人肝癌细胞HepG2,人结肠癌细胞Caco-2为模型的抗肿瘤细胞增殖活性研究;并对槲皮素、芹菜素、木犀草素、p-香豆酸、苜蓿素以人乳腺癌细胞MCF-7为模型研究了联合作用对MCF-7细胞增殖和毒性的影响木犀草素对HepG2细胞嘚抑制效果最好,其半数抑制浓度(EC_50)为36.28±0.30μM,对HepG2细胞的半数细胞致死率(CC50)大于113μM,其选择指数SI值大于2。Caco-2细胞对槲皮素、木犀草素和芹菜素的敏感度较低,其EC_50低于抑制HepG2细胞的EC_50芹菜素为在这三种黄酮中对Caco-2细胞最为有效的,其EC_50为213.91±2.95μM,CC50大于311μM,选择指数SI大于1.55。芹菜素和木犀草素联合作用,在EC_50时,其CI值为1.1,為加和作用木犀草素抑制MCF-7细胞增殖的EC_50为28.45±0.91μM,联合苜蓿素后EC_50为14.91±0.34μM,槲皮素抑制MCF-7细胞增殖的EC_50为161.30±1.48μM,联合苜蓿素后其EC_50为61.46±1.46μM。槲皮素和木犀草素两药联合作用,在EC_50时,其CI值为1.22,为中等拮抗作用木犀草素和p-香豆酸在所用浓度范围内具有很好的协同作用,且随着浓度的增加,CI值降低,在EC_50时其CI值為0.80±0.02,木犀草素的剂量减少指数(DRI)值为1.80±0.07,而p-香豆酸的DRI达到了4.04±0.11。槲皮素和p-香豆酸联合作用抑制22%的MCF-7细胞增殖时,其联合作用为中等协同作用,CI值为0.70±0.14,泹是当抑制率升高时,其CI值也随之升高,表现出拮抗作用