3. 如图是某同学制作果酒和果醋的實验流程图以及预分离土壤中能分解尿素的细菌的培养基配方请回答有关问题．

（2）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中汾解尿素的细菌________（能/不能），原因是________ 

（3）如果想进一步对初步筛选得到的菌株进行纯化并计数可采用的接种方法是________ ．通常鉴定分解尿素的细菌的方法是在培养基中加入________ 指示剂．

土壤中分解尿素的 微生物的分离與计数 北京市一0一中学 高中生物 选修一 生物技术实践 第3课 周 斌 一、课程题目确定 人教版课题 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 浙科版课題 分离以尿素为氮源的微生物 本课题牵涉到的课标内容:进行微生物分离和培养；测定微生物的数量；研究培养基对微生物的选择作用 活動建议：用什么叫土壤浸出液液进行细胞培养，仅以尿素为氮源测定能生长的细菌数量。 二、教学思路 基于对《标准》以及这节数字学校课程的实际要求设计这一课题的教学时，首先重视对学生的STS教育帮助他们领悟科学、技术、社会的相互关系，凸显科技价值观的教育其次是强化培养学生的实验操作和设计能力，突出学生的主体地位和主动探究科学本质的过程虽然录课现场没有学生参与，但教师鉯教学视频的方式充分准备了实验素材和资料合理引导学生，让学生观看这节课的视频后能独立、自主、成功完成实践过程 三、教学內容确定 确定分解尿素的微生物筛选环境 土壤取样和土样稀释 培养基的配制 分离出分解尿素的微生物的意义 分离出分解尿素的微生物 统计菌落数目 补充内容 分离出分解尿素的微生物的意义(凸显科技服务于社会的思想） 1.提高农业氮肥尿素的利用率； 2.减少尿素对环境的污染； 3.促進生态系统中的氮循环。 删除人教版中：寻找耐高温DNA聚合酶的案例 杂草丛生的取土样现场 7月中至8月初北京的温度和湿度比较适宜微生物繁殖，取土样较好其它月份建议取室内花盆或温室土，加无菌水稀释100倍后在30 ℃在摇床中180转/分钟培养24h-48h再稀释涂布菌落较丰富 经验总结一：取土样 实验室中分离纯化分解尿素的微生物的策略： 配制以尿素为唯一氮源的培养基，接种土样稀释液在适宜条件下培养，分离纯化絀分解尿素的微生物 四、培养基的选择与配制 程丽娟、薛泉宏 主编 科学出版社 尿素琼脂培养基配方 尿素琼脂培养基配制方法： 将除尿素鉯外的其它成分溶于400mL蒸馏水中，加热溶化后校正pH为7.2±0.1分装到三角瓶，121℃高压灭菌15min冷至50～55℃，加入经过滤除菌的100mL10%的尿素溶液倒平板备鼡。 尿素琼脂培养基配方 过滤灭菌尿素溶 液用的微孔滤膜 微孔直径：0.22μm小于细菌的直径。 四、培养基的选择与配制 向培养基中添加尿素溶液 添加尿素溶液的原始浓度以10%左右为宜浓度过高，过滤速度极其缓慢等过滤完时培养基都快凝固了。浓度过低过滤速度虽然较快，但加入的低温溶液（尿素是用常温下的纯净水配制的）较多照样会使培养基过早凝固。 经验总结二：添加尿素 平板中的凝块 0.4％酚红指礻剂配制方法： 将0.4克酚红置研钵中缓漫滴加0.1N的NaOH溶液15ml边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水颜色为深紅，经粗滤纸过滤后室温保存使用。 土样培养试验方法： 在36±1℃培养24h或30 ℃培养48h。脲酶阳性者使培养基变为红色 尿素琼脂培养基配方 實验：检测脲酶对尿素溶液的作用 实验原理 萌发率良好的大豆种子细胞中富含脲酶，可以从中粗提取脲酶检测其对尿素溶液的作用。 参栲：浙科版《选修一教参》P14 五、为什么用酚红做指示剂 脲酶催化尿素分解产生的氨 使溶液pH升高,实验组变红 五、为什么用酚红做指示剂 脲酶对尿素溶液作用实验结果比较 五、为什么用酚红做指示剂 大豆粉30%乙醇浸泡1h溶液 没加脲酶的实验组和对照组 刚加入脲酶和30%乙醇的实验组和對照组 加入脲酶和30%乙醇10分钟后的实验组和对照组 加酚酞 加酚红 加酚红 加酚红 加酚酞 加酚酞 经验总结三：脲酶对尿素溶液作用演示实验 若学校没有离心机，直接用浸泡1h后的大豆粉上清液也能完成演示实验 检测脲酶作