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分子杂交仪厂家报价/分子杂交仪供应价格
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品牌：其他
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概 述：依据核酸分子杂交仪技术原理，采用智能型数字温度控制器，可作分子杂交，也可作酶联反应的孵育器。与酶免结合可建立全定量或半定量PCR检测方法。在病毒、细菌疾病的基因诊断的临床检测中具有良好的应用效果。特 点：仪器结构采用模块化设计，外观新颖、温度控制稳定、操作简单可靠、转速稳定、不受外界电源电压影响,杂交过程在连续旋转的杂交瓶内进行,膜与探针完全混合,彻底避免了杂交袋的繁琐封装及放射同位素的泄漏;该仪器工作室具有防辐射功能.可一次装六只杂交管。地址：上海闵行区虹梅南路5201号电话：400-052-6177手机：联系人：曹先生邮件：网站：http://www.shom17.net&&原创文章 （编码）仪器仪表行业是中国发展的新型行业，在与国际接轨的同时，中国的仪器仪表行业发展有了长足的进步空间具备了与国际竞争的实力。国内科技水平及发展趋势：仪器仪表行业整体综合技术水平达到国际80年代中期水平，微电子技术和计算机技术在仪器仪表产品中普遍采用，约15%的产品实现了智能化，达到国际90年代水平；30%的产品实现了数字化，达到国际80年代末期水平。综合服务能力显著提：可以承接30万-60万千瓦火电站、核电站、30万吨合成氨、120吨转炉、日产30万立方米城市煤气站工程、成套大型炉窑等大型工程成套控制项目。大类产品满足需要程度：中高档科学测试仪器国内市场满足率为30%，中低档科学仪器满足率65%；生产过程测量控制仪表及系统产品在大型工程项目中的品种满足率达50%，中小型工程达70%。进口产品往往是科研、生产所需的重大、关键设备，技术含量大，附加值高。产业从无到有、从小到大、初步形成了门类比较齐全的仪器仪表生产、科研、营销体系。建成了一批科研开发机构（其中机械系统的仪器仪表专业科研所20家，国家级工程研究中心3家、企业技术中心5家，国家级产品质量检测中心9家）；培养了一批专业的经营、管理、技术人才。特别是部分中低档产品形成了自己的优势和特色各种数字万用表、电度表、水表、煤气表、水准仪、中低档光学显微镜、望远镜等产量世界前列，在基本满足国内需要的同时，大量出口。通过科技攻关、联合开发、合资合作和引进技术消化吸收国产化等多种形式，使中国仪器仪表行业部分中高档主导产品缩小了与国际先进水平的差距，并形成生产能力。自主开发的主要产品包括中小型DCS、现场总线智能仪表、总线式测试系统、汽车专用检测试验设备、超声诊断仪器、微波等离子光谱、新型扩散硅敏感元件等，引进技术国产化的主要产品有记录仪、精小型调节阀、新型变送器、光谱、色谱、扫描电镜、水质分析仪、专用复合材料等;合资合作的主要产品有大型DCS、EJA、流量计、电子经纬仪、动平衡试验机、高低温试验仪器等。
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设备仪器&&&全自动核酸分子杂交仪HBHM-9000A
全自动核酸分子杂交仪HBHM-9000A
产品特点：
& 采用导流杂交技术，提高杂交效率，简化操作步骤，缩短杂交时间；
& 高速热循环系统，采用先进热电制冷技术，快速加热和冷却；
& 彩色LCD显示器，更加程序化；
& 机械臂自动完成加样步骤，实现杂交全自动化；
& 压力平衡系统，减少杂交过程试剂的损耗。
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&&|&&&&|&&核酸分子杂交的基本原理
核酸分子杂交的基本原理
从化学和生物学意义上理解，探针(Probe)是一种分子，它带有供反应后检测的合适标记物，并仅与特异靶分子反应。抗原-抗体、外源凝集素-碳水化合物、亲和素-生物素、受体-配体(ligand)以及互补核酸间的杂交均属于探针-靶分子反应。蛋白质探针（如抗体）与特异靶分子是通过混合力（疏水、离子和氢键）的作用在少数特异位点上的结合，而核酸探针与互补链的反应则是根据杂交体的长短不同，通过氢键在几十、几百甚至上千位点上的结合。核苷酸经某一原子、功能基团或长侧链修饰后仍有可能进行碱基配对，这取决于修饰的部位和修饰物的性质。标记的探针每1kb只掺入10-30个修饰碱基，仅4％-12％的单个碱基被修饰的类似物取代了。尽管掺入位点外的碱基配对较弱或不存在，但对整个杂交分子的稳定性影响很小
核酸探针的种类
根据标记方法不同可分为：放射性探针；非放射性探针两大类，
根据核酸的性质不同又可分为：DNA探针RNA探针cDNA探针cRNA探针
DNA探针还有单链(ssDNA)和双链(dsDNA)之分。所以原位杂交可分为DNA-DNA，cDNA-RNA，RNA-RNA和寡核苷酸与DNA或RNA等杂交方式。
核酸标记方法及其显示方法（一）核酸探针的放射性标记技术
1. 缺口平移标记方法
其原理是首先用DNA酶在双链DNA探针的一条链上制造一个缺口（nick），缺口处形成3’-羟基末端，在大肠杆菌DNA聚合酶I的催化下将核苷酸残基加在3’-羟基本上。同时根据大肠杆菌DNA聚合酶I的5’→3’核酸外切酶活性，此酶将缺口5’端核苷酸依次切除，其结果是在缺口的5’端不断消除核苷酸而在3’端则依次添加核苷酸，从而使缺口沿着互补DNA链移动，故称缺口平移（nick
transcription）。根据这个原理，用α-32P
dATP置换先前存在的核苷酸，则可制备高活性的DNA探针，能满足大多数杂交的要求。
2. DNA 快速核酸标记
大肠杆菌聚合酶I经枯草杆菌酶切割可得到两条多肽链，其中分子量为76kD的大片断称为Klenow片段。该酶具有完整聚合酶I的5’→3’核酸聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，但缺乏5’→3’核酸外切酶活性。利用Klenow片段可以填补由限制性酶消解DNA所产生的3’凹陷末端。因此，用这种方法可以标记双链DNA的凹陷3’末端。用Klenow片段标记末端一般只用一种[α-32P]
dNTP，加入反应的[α-32P] dNTP取决于延伸的5’末端序列。
3. 用T4T4多核苷酸激酶标记DNA5DNA5’’末端
寡核苷酸探针或短的RNA和DNA探针可选用此方法。T4多核苷酸激酶(polynucleotide kinase,
PNK)是由T4噬菌体感染的大肠杆菌中提取的，此酶能催化ATP的γ-磷酸转移至DNA或RNA的5’-OH末端。在过量ADP存在时，也可促进磷酸交换反应，使PNK将DNA末端5’磷酸转移到5ADP上生成ATP，然后催化[α-32P]
dNTP上的标记磷酸转移至DNA的5’末端，从而使DNA重新磷酸化，并得到标记。注意要用碱性磷酸酶去掉磷酸基团。
4. 随机引物延伸标记方法
是从单链DNA或RNA模板合成高比活性的32P标记探针所选用的方法。原理是使长6-8nt的寡核苷酸片段与变性的DNA或RNA模板退火，在DNA聚合酶I的作用下，以每一个退火到模板上的寡核苷酸片段为引物引发DNA链的合成，在反应时将α-32P
dNTP掺入合成链，即得到标记。变性处理后，新合成链（探针片段）与模板解离，即得到无数各种大小的探针DNA。因为所用真核苷酸片段很短，在低温条件下可与模板DNA随机发生退火反应，因此，被称为随机引物(random
primer)。这种随机引物可用小牛胸腺DNA或鱼精DNA制备。
5. 聚合酶链反应
聚合酶链反应(polymerase chain reaction,
PCR)是一种分子生物学新技术，由于美国Cetus公司人类遗传学部的KaryB.
Mulli于1985年创立。该技术利用两个与相反链杂交并随着于靶DNA两侧的寡核苷酸引物经酶促合成特异的DNA片断，包括膜板变性、引物退火和引物延伸三个步骤的反复循环，最终两引物所夹靶DNA得到千万倍以上的扩增。可用来标记高比活性的DNA探针，PCR技术有很高的特异性，可以在1-2小时内大量合成探针DNA片断。如果在底物中加入[α-32P]
dNTP或其它标记的dNTP，则探针DNA合成过程中可得到很好的标记，标记物掺入率可高达70％-80％。PCR标记技术特别适用于大规模检测和非放射性标记。该法的特点是要合成一对特异性PCR引物。
6. 体外转录法
先把DNADNA片段克隆到有噬菌体转录启动子的载体中，然后在RNARNA聚合酶的作用下，以DNADNA为模板，以含有标记的三磷酸核糖核苷为原料，对启动子下游的序列进行转录，所谓启动子(promotor
promotor)，，又称启动基因，是入出境DNADNA分子上可与RNARNA聚合酶特异性结合而使转录开始的部位，而启动子本身并不被转录。
体外转录常用的噬菌体转录启动子有沙门氏菌噬菌体SP6SP6和大肠杆菌噬菌体T3T3，，T7T7。当二个不同的噬菌体转录启动子结合在载体多克隆位点的两侧，而且互相呈相对方向时，则可分别启动插入DNADNA片段SenseSense和AntisenseAntisense的转录。
转录前要用限制酶先在cDNAcDNA插入点的下游切割，使DNADNA直线化，做为模板，以标记的三磷酸核糖核苷为原料，转录合成RNARNA探针。
（二）核酸探针的非放射性标记技术
1. 光敏生物素标记核酸
有二种光敏生物素：均由一个光敏基团、一个链接臂和一个生物素基团组成。
光生物素： 光敏基团是-N3，在光作用下可与核酸中的碱基结合。
补骨脂素生物素：
光敏基团是补骨脂素，在光照（320-400μm）下，可与单链或双链DNA发生反应，反应主要在T上，C上也有一定程度的反应。
光敏生物素的连接臂含有6-12个碳原子，用以减少探针杂交时的空间位阻。此方法简单，灵敏度可达ng水平，可用于外源基因的检测
2. 酶促生物标记核酸以生物素化的脱氧核苷三磷酸（Bio-11-dUTP, Bio-7-dATP,
Bio-11-dCTP）等代替相应32P标记的脱氧核苷三磷酸，以DNA聚合酶作用掺入DNA。Bio-dUTP代替dTTP，Bio-dATP代替dATP，Bio-CTP代替dCTP。Bio-11-dUTP的11是指生物素基团与脱氧核苷酸之间连接臂的碳链长度。常用的酶促生物标记DNA的方法有缺口平移法和随机引物延伸法。
3. 寡核苷酸的生物素末端标记
5’-磷酸的化学标记法：
将寡苷酸的5’-磷酸接上一个乙二胺，然后用琥珀亚胺生物素，将生物素基团连接到磷酸酰胺基上。
3’-OH 的酶捉标记法：
用末端转移酶将Bio-11-dUTP加于其3’-OH端，脱去一个焦磷酸。
4. 酶标DNADNA
标记试剂：辣根过氧化物酶（HRP）；碱性磷酸酶（AP）
通过对苯醌（PBQ）与聚乙烯亚胺（PEI）连接而成（HRP-PBQ-PEI+），此试剂在戊二醛的作用下与变性的DNA结合，使HRP与DNA连接在一起，组成HRP标记的DNA探针。
5. 酶标寡核苷酸
核苷酸5’-末端标记HRPHRP法：
在HRP中产生一个-SH反应基团，在寡苷酸合成终了加在5’-端，带一个C6的-HS，与活化的HRP反应生成5’-HRP寡苷酸。
内中标记APAP法：
在合成寡核苷酸过程中将一个5’带连接臂及CF3基团的尿苷3’亚磷酰亚胺合成在寡核苷酸链中，合成后此活化的寡核苷酸与AP即得到AP标记的寡核苷酸。
其原理与Bio-11-dUTP相同，只是用毛地黄甙抗体检测标记在DNA上的半抗原分子地高辛（Digoxigenin，DIG）。
（三）非放射性探针的显示体系
1. APAP显色体系
ASO-AP+BCIP→BCI-OH+Pi
BCI-OH+NBT→紫色
ASO：等位基因特异的寡核苷酸
BCIP：5溴-4氯-3吲哚磷酸
NBT：四氮唑蓝
2. HRPHRP显色体系
HRP+H2O2→[HRP&H2O2]
ODA-NH2+[HRP&H2O2] →ODA-N=ODA/棕色↓+HRP+H2O
ODA；邻-联茴香胺
3. ABC 显色体系
DNA-B+SA-AP→DNA-B-SA或
DNA-B+SA+BAP→DNA-B-SA-BAP
SA：streptavidin(链霉亲合素)
BAP：生物素化的磷酸酶
B：biotin(生物素), ABC:avidin-botin-enzymecomplex(亲合素-生物素-酶复合物)。
4. 非放射发光身显影
若将AP或HRP的显色底物根据光化学原理换成一种酶解后产生的光子的化合物，可用自显影技术曝光X线片显示。
HRP 发光自显影：氨基苯-甲酰肼在HRP与H2O2作用下氧化为氨基苯二甲酸，同时放出N2及发光。
发光自显影：发光底物金刚烷二氧丁环磷酸盐（AMPDD），其磷酸二脂键在AP作用下水解一个磷酸，进而由分子内过氧键提供能源分解并产生金刚酮和激发态的甲基间-氧苯甲酸阴离子，恢复到基态时发光
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核酸分子杂交 - Sojubio
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核酸分子杂交
核酸杂交（Nucleicacidhybridization），又称核酸分子杂交。
原理：是核酸变性和复性理论。双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开形成单链，
当理化因素消除后，具一定同源性的两条 （探针和待测核苷酸序列）单链在适宜的温度及离
子强度条件下，可按碱基互补配对原则特异性地复性形成双链。核酸分子杂交可在DNA与
DNA、RNA与RNA或RNA与DNA 的二条单链之间进行。
分类：核酸分子杂交按作用环境不同分为固相核酸分子杂交和液相核酸分子杂交。
一、固相核酸分子杂交
原理：将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上，另一条游离在溶液中。固体支持物
有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。固相杂交时，未杂交的游离片段
很容易漂洗除去，膜上的杂交物容易检测并能防止靶DNA 自我复性，故该方法最为常用。
常用类型：菌落原位杂交、斑点杂交、狭缝杂交、Southernblot杂交、Northernblot杂交、
组织原位杂交和夹心杂交等。
基本操作步骤：
1、制备样品：从待检测组织样品中提取DNA或RNA。DNA应先用限制性内切酶消化以产
生特定长度的片段，然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。再将含有DN***
段的凝胶进行变性处理后，直接转印到支持膜上并使其牢固结合。这样检测片段在凝胶上的
位置就直接反映在了转印膜上。RNA样品则可直接在变性条件下电泳分离，然后转印并交
2、制备探针：探针是指一段能和待检测核酸分子依碱基配对原则而结合的核酸片段。它可
以是一段DNA、RNA或合成的寡核苷酸。探针需要被标记上可直接检测的元素或分子。这
样，通过检测与转印膜上的核酸分子结合的探针分子，就可知道被检测的核酸片段在膜上的
位置，也就是在电泳凝胶上的位置，也就知道了它的分子大小。
3、杂交：在杂交前先进行预杂交，封闭膜上非特异的DNA结合位点，以降低非特异性杂
交。正式杂交时，由于转印在膜上的核酸分子已经是变性的分子，所以核酸杂交过程中只需
变性标记好的探针，再让探针与膜在特定的温度下反应，然后洗去未结合的探针分子即可。
4、检测：检测的方法依标记探针的方法而异。用放射性同位素标记的探针需要放射自显影
来检测核酸片段在膜上的位置；而如果是用生物素等非同位素方法标记的探针则需要用相应
的免疫组织化学的方法进行检测。
二、液相核酸分子杂交
液相核酸分子杂交，是一种研究最早且操作复杂的核酸杂交类型，在过去的30年里虽被应
用，但总不如固相杂交那样普遍，主要原因是杂交后过量的未杂交探针在溶液中除去较为困
难，误差也较高。
常用的两种固相核酸分子杂交技术
1.SouthernBlot
原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，
继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素
或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，
则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检
测，从而显示出待检的片段及其相对大小。
用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。
2.NorthernBlot
原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同SouthernBlot相
同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。
用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。
Q1：标记方法有哪几种？
A1：（1）切口平移法 （2）随机引物法 （3）末端标记法 （4）单链DNA探针标记 （5）寡核
苷酸探针标记法
Q2：探针标记物的分类有几种？
A2：（1）探针标记物有放射性核素与非放射性物质两种。放射性核素标记敏感性高，可检
测pg水平的核酸，但因不易长期保存，且存在放射性污染等问题，现已较少应用。
（2）非放射性物质常用的有生物素、地高辛等，非放射性探针安全、稳定、操作方便并
且经济，但敏感性较低，近年来，由于杂交信号检测方法的改进，检测的敏感性得到了很大
Q3：怎样确定探针的浓度？
A3：总的来说，随探针浓度增加，杂交率也增加。另外，在较窄的
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