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叶酸和核定位信号介导载药纳米胶束的肿瘤细胞靶向作用研究
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【专题讨论】激光共聚焦时样品能否固定过夜后再孵抗体或染色
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这个帖子发布于5年零253天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已关闭悬赏丁当:2
望高手指导：做激光共聚焦时样品4%多聚甲醛固定后能不能过夜保存再做染色孵抗体？
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丁香园荣誉版主
可以，但固定时间应根据组织块具体情况有所不同。采取组织时，组织块尽量小于1 cm×1 cm×1 cnl，置于4％PFA中进行后固定，后固定的时间可根据组织块的大小和致密程度而调整，可以4℃固定过夜，或室温1—4 h。提供一点资料供参考。
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pennhmp116 edited on
非常感谢楼上，我的样品是药物处理过的贴壁细胞，不是组织切片。用4%的多聚甲醛固定后还可以过夜吗？
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最好部要过夜， 时间长了 也不好
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非常感谢！！！
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关于丁香园关注今日：6 | 主题：213964
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（求助）多聚甲醛的固定时间
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这个帖子发布于13年零55天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我的实验因为有一部分大鼠脑要取新鲜的，另一部分才做石蜡片做免疫组化，请教各位：生理盐水灌注取脑后，切成2mm的脑片，4%多聚甲醛固定时间为多少才不至于破坏抗原，组织形态又比较好？
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野原 edited on
你是还要做膜片钳吧，你是问做石蜡片做免疫组化部分标本的固定吗？没有太懂你的意思
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24小时就可以了。
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24小时以内，超过24小时就不太好！
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因为你说的不是很清除，我部明白你的意思。根据我的经验，做石蜡免疫组织化学时，组织块最好用Bouins液固定，固定时间根据组织大小而定；做冰冻免疫组织化学时，最好用4%多聚甲醛固定组织块，切片后可以再用4%多聚甲醛4℃固定10min。
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丁香园荣誉版主
做石蜡免役组化时,用多聚甲醛固定的效果要好于Bouins液,因为后者对于抗原的破坏较前者大，两个毫米的组织３个小时就可以了．
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谢谢各位指教！我正在做预实验，希望能顺利找出理想的条件。
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可以用4%多聚甲醛灌流，再后固定，但不能超过24小时。
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我们实验室的灌注步骤是：：先灌入生理盐水100毫升，然后灌入百分之四的多聚甲醛的300毫升（4℃），最后再灌入100毫升的10%的糖水，这样既能固定组织又能保护抗原不受破坏。取出的脑组织先放入百分之四的多聚甲醛4℃存放24～48小时，然后放入20%的蔗糖溶液中过夜即可。
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必须要灌注吗？我刚刚开始为免疫组化的石蜡切片取材固定，老师说不用灌注。而且，请教了病理的技术老师，他们建议用中性福尔马林固定，标本可以在里面泡2－3天。
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一个神经系统高表达蛋白BEX1及其相互作用蛋白hSNF5的功能研究.pdf 125页
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一个神经系统高表达蛋白BEX1及其相互作用蛋白hSNF5的功能研究
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中国协和医科大学
博士学位论文 一个神经系统高表达蛋白BEX1与其相互作用蛋白hSNF5的功能研
姓名：刘瑾
申请学位级别：博士
专业：生物化学与分子生物学
指导教师：袁建刚;强伯勤
------------------------------
中国协和医科大学博：匕研究生论文
人bexl是从人胎脑cDNA文库中分离获得的一个主要表达于脑和睾丸组织
编码一个125个氨基酸的蛋白。同源性 的cDNA克隆，其开放读码框为358bp， 比较发现，人BEXl蛋白与小鼠Bexl
蛋白有较高的同源性，氨基酸一致性为 65．89％，与小鼠的另外两个同家族蛋白Bex2和Bex3也有不同程度的同源性， 基因均分别定位于人和小鼠x染色体短臂的22区(Xq22)，推测它们的功能有一 定的相关性。用Pfam软件对人BEXl蛋白进行结构域分析，未发现已知的结构域。
已有文献报道，在小鼠植入前的胚胎发育过程中Bexl基因在转录水平表达 量发生变化，在出生后睾丸的发育过程中表达也有差异，说明这个基因与小鼠的 发育相关。基于人BEXl基因与小鼠Bexl基因的同源性，而且它在人脑中高表达，
由此推测，人BEXl的功能可能与入脑的发育相关。
我们首先克隆得到小鼠的Bexl基因，检测小鼠不同发育时期胚胎中Bexl mRNA的表达变化情况，发现它在成年鼠脑中的表达量大大低于小鼠胚胎，说明 它确实与小鼠脑的发育相关。用小鼠胚胎进行的整体原位杂交显示，Bexl在神经 系统高表达，尤其在前脑和侧脑。用成年小鼠脑切片进行的原位杂交发现，Bexl 在神经元中特异性表达，且在海马中的表达量离于其它部位。
因信息学分析未发现己知的功能结构域，为寻找人BEXl基因的功能线索， 我们以BEXl全长为“诱饵”蛋白，通过酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库，
寻找与之相互作用的蛋白。结果发现，人染色质重塑复合体SWI／SNF的核心成员
down结果证实，
细胞后，获得真核表达的带myc标签的hSNF5蛋白。GST-Pull
BEXl和hSNF5能在体外结合。此外，免疫荧光共定位试验显示，两者在细胞中
3------------------------------
中国协和医科大学博士研究生论文 的分布有重叠区域，均在细胞核中有分布。以上三种实验结果基本证实两者之间 确实存在相互作用。
为了研究BEXl可能具有的功能，我们进行了细胞周期试验。观察到SNF5 的染色质重塑复合体单独存在时作用没有特异性，我们推测，BEXl可能作为接 头分子，介导了其它蛋白与hSNF5的作用，导致控制细胞周期相关基因的转录激 活或抑制。
本实验室通过酵母双杂交方法同时还筛选到BEXl的另一个相互作用蛋白 行了初步的研究。
4------------------------------
中国协和医科大学博士研究生论文
clonenamed
By screening
library，a
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