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超声造影剂SonoVue增强超声辐照介导pEGFPC1AFPtk转染HepG2细胞的实验的研究.pdf 55页
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‘》中山大学岳殿超博士论文
HepG2细胞的实验研究
博士研究生：鬻殿超
师：吕明德教授
中山大学附属第一医院影像医学与核医学(广州510089)
随着分子生物技术，尤其慕因技术和理论的飞速发展，基因治疗在肝癌治
疗中的研究越来越深入方法。如何安全肖效地介导瓣的基因转染入靶细臆是基因
治疗的关键步骤。近年来研究表明超声选影翔作为一种辅剂能进一步提赢超声介
进超声介导基因转染的作用具有较大豹潜力。在超声局部辐照的作用下，造影剂
微泡通过空化效应，提高纲胞膜的通透性，使得载体携带匿的纂因，能有效地进
入靶纲胞内。
单纯瘛疹瘸毒I型的胸腺激酶慕因(herpessimplexthymidine
typer1，HSV-1一tk)是目前使靥最为广泛的自杀纂因。本课题通过体外实验探讨
超声造影剂增强超声辐照对增加HepG2细胞膜逶透性的可能性；薰组构建含甲
胎蛋白(alpha
粒的效能，为建立超声造影剂增强超声辐照介导豹_鞋手瘸基因治疗的新模式奠定初
步的实验基础。
{》孛蠡太攀撩鼹趣簿±论变
第一部磐 声落拣(SonoVue)潜强怒声鞲熙瓣HepG2绷胞膜通逶髅麓影碗
材料舞秀法
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头，灏率1．9
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●SonoVue滚熬凝：取tralPBS缓漫注入SonoVue潍手耱瓶褒，嚣器豢臻。
使题藏震力攘摇滋产黛徽灌。
●臻照蜜黔努联缀：
SO越，不避行越辫辐照；e组(舻s)：越声绷照，辐黧甜润60秒，撵头频率1．9
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瑟黧SonoVue(瓣露鼹B缝)厨，滏褥越矽辗照≤辐慧袋律辩e缱)。
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‘》巾出丈学丞毁瓣耩圭论文
臆活性率大予95％。
滚式绥臆仪测定的荧光染色瓣魅纲飚谣分率分别为：无超声辐照(A
C缝眈较P，j、于0．05)。
第：豁分 熏组真核衮达质敉pEGFP-CI-AFP-tk的梅建
正在加载中，请稍后...AFP指标高是什么原因?
来自于：陕西|
提问时间： 14:04:51|
病情描述：
单位组织体检,抽血结果中有一项AFP指标高,达70,其他指标正常,可能是什么原因造成?
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您好，请问你的年龄性别，建议注意复查。
AFP是人体在胚胎时期血液中含有的一种特殊蛋白，系肝细胞内粗面内网核糖颗粒所合成，胎儿出生后，血清AFP浓度下降，几个月至1年内降至正常，正常成人肝细胞失去合成AFP的能力，因此血清中含量极微（一般&20μg/L），除肝细胞癌可显著升高外，妊娠、胚胎癌如睾丸癌、卵巢癌和极少数胃、胰、胆管、结肠直肠癌也可升高，但其绝对值不如肝细胞癌高。慢性肝炎、肝可有AFP的分子变异体，亦可有一过性升高。因此血清AFP检测结果必须结合临床症状与超声检查才有诊断意义。
　　①血清AFP对肝细胞癌有特异诊断价值，尤其是动态变化测定，如AFP连续4周阳性（&400μg/L），同时ALT正常，并且排除上述其他疾病，可以诊断肝癌，其阳性率可达60%～80%。
　　②可用于高危人群的肝癌普查。上海市曾于年对196万人进行普查，发现肝癌300例，其中亚临床肝癌134例，占44.4%，对早期发现肝癌，尽早治疗意义很大。
　　③AFP还可用于评定手术或其他方法的疗效，判断预后。手术彻底切除者，AFP在2个月内转阴，如遗留残余或局部复发或转移，AFP多不降至正常或降而复升。
　　④可以用于判断肝细胞癌的分化程度和癌肿的大小。AFP阳性者以分化程度II级及III级最高， I级及IV级均低，肝癌坏死程度严重者AFP亦低。血清AFP浓度亦与肝癌的大小有关。&3cm者阳性率仅25%～50%，4cm者多达400μg/L以上，5cm时常突升高至700～1000μg/L，因此对小肝癌应辅以其他肝癌标志物及超声检测。型AFP阳性率为53.8%，巨块型为62%。
　　⑤在各种肝炎及肝硬变时，AFP可见一过性增高，但经治疗肝功能恢复后，AFP也随之降至正常。
医生回答专区
因不能面诊，医生的建议仅供参考
帮助网友：12150收到了：
最最常见的AFP增高的原因是因为肝脏的疾病,而且肝脏疾病也很容易有的表现,平时多休息,多喝水,饮食尽量清淡,比米娜刺激性饮食和生冷性饮食,营养充足,避免感染的发生.
网友回答专区
不知年龄，性别，有什么症状，若为女性，在妊娠时AFP可以升高。若非此情况，肝功能正常，（CEA也正常），可以追查。
AFP升高可能跟肝脏疾病有关，也可能与非恶性疾病如急,慢性肝炎,重症肝炎恢复期,肝硬化；先天性胆管闭塞有关.因此,仅凭AFP单一指标的升高无法确定具体原因,AFP持续高于300才有临床价值，不要在意，定期做检查就行了。
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目前共收到封感谢信甲胎蛋白怎么测
【导读】作为胚胎时期血液里含有的特殊蛋白质，甲胎蛋白只有在胎儿的肝细胞中才能合成，尤其在怀孕16-20周时，胎儿体内含量最高。如果要测甲胎蛋白，目前常见的方法有哪些？针对“甲胎蛋白怎么测”话题，接下来妈妈网将于大家分享有关甲胎蛋白的相关资讯。
甲胎蛋白怎么测？这是很多人都不了解的问题，除了肝疾病患者外，处于预备期或是怀孕初期的孕妇，适当了解测甲胎蛋白的检查方法，也是有很大好处的。那么，甲胎蛋白具体检测方法是什么，一起来看看吧。方法一：双向琼脂扩散法：1970年以前主要用双向琼脂扩散法，其阳性率虽不高，但诊断原发性肝癌的特异性却较大。不过随着检测方法的不断改进和完善，双向琼脂扩散法检测甲胎蛋白的方法准确性已经不能满足需求。方法二：放射免疫法：现在，测甲胎蛋白一般通过抽血检查，最常用的检测方法就是放射免疫法。这个方法检测的甲胎蛋白正常值为0—25μg/L，如果超过25μg/L则为阳性，如果在25-400μg/L之间为低浓度阳性，超过400μg/L即为高浓度阳性。如果检查出阳性，则需要进一步做综合检查，结合定位检查如B超、CT、磁共振（MRI）和肝血管造影等作出诊断确定是否为肝癌疾病。此外，如果孕妇甲胎蛋白检测数据偏高，这还很可能意味着胎儿有缺陷，这时候必须要再结合临床经验、B超结果进行更全面的诊断。方法三：化学发光法：化学发光法也是检测甲胎蛋白的常用方法之一，其因操作简单、灵敏度高、特异性强等优点在临床上被广泛应用。另外，化学发光法相对于放射免疫法，其在测定上大大缩短了放映时间，而且没有放射性污染，满足临床需求。 ...
甲胎蛋白什么时候测，这对于怀孕期准妈来说是个值得关注的话题。虽然说甲胎蛋白检测并不是常规的产前检查项目，但医生建议，有条件的准妈最好还是要进行该项目的检查，毕竟这对诊断开放性神经管缺陷、诊断唐氏综合征、了解胎儿成熟度以及诊断其他诸如死胎、先天性食管闭锁、先天性肾病等疾病具有重要的作用。甲胎蛋白什么时候测？一般在怀孕后的16-20周期间进行，因为母体血清中的甲胎蛋白通常在妊娠16周左右开始上升，到36周时逐渐下降。有部分的孕妇，在孕期12周，也会建议可以做甲胎蛋白检查。
测甲胎蛋白要注意什么？甲蛋白是肝功能检查中的一个常见项目，是判断肝病患者是否发生癌变、孕妇胎儿是否健康的一个重要指标，因此，甲胎蛋白检查数据的准确性很关键。了解清楚测甲胎蛋白注意注意事项，能更好确保检查结果数据的可靠性。测甲胎蛋白注意事项：1、空腹检查：甲胎蛋白为新生肝脏细胞所产生，受进食影响不大，但需要参考肝功能检查予临床判断，一般建议予空腹抽血检查。2、注意饮食作息：检查前一天注意不要熬夜，最好是在11点前入睡。另外，体检前一天晚上吃得太油腻，很有可能造成甲胎蛋白一时的升高，因此检查前一天到检查开始期间，尽量避免进食油腻、刺激、重口味食物。3、禁止饮酒：医师建议，每天有喝酒习惯的朋友如果进行甲胎蛋白检查，检查前3-7天最好禁止饮酒，因为酒精是导致出现甲胎蛋白偏高现象的一大原因。4、检查后出现甲胎蛋白偏高或偏低的现象，不管患者有没有什么不良症状，一定要及时做全面的检查，判断引起甲胎蛋白异常的原因，不管患者有没有什么不良症状，一定要做全面的检查，判断引起甲胎蛋白偏高的原因，以免病情恶化危及到生命健康。
甲胎蛋白正常值是多少？正常情况下，甲胎蛋白主要存在于胚胎时期，胎儿出生大约2周后会从血液中消失，所以正常人血清中甲胎蛋白的含量其实还不到20微克/升。如果大家进行甲胎蛋白检查项目，不同的检测方法，其正常值的划分范围也不相同，具体可以分为以下几种情况：1、放射免疫电泳检测法：正常值≤25μg/L ，如果在25～400 ug/L之间为低浓度阳性，超过400ug/L为高浓度阳性，如果甲胎蛋白升高幅度不大，在50ug/L-300ug/L，可能是病毒性肝炎。2、放射免疫分析法：正常值≤20μg/L。3、酶联免疫法：正常值≤25μg/L这里，大家需要了解清楚的是，胎儿和孕妇的甲胎蛋白暂时性升高是正常的生理现象。一般情况下，孕妇妊娠3个月后,血清甲胎蛋白开始升高,7-8个月时达到高峰,一般甲胎蛋白在400ug/L以下为正常,再分娩后，孕妇体内的甲胎蛋白就会逐渐恢复正常范围。
甲胎蛋白偏高怎么办？在解答该疑问之前，我们首先得了解清楚甲胎蛋白偏高的原因，这样才能更好地对阵下药寻找解决办法。1、肝癌是常见的造成甲胎蛋白偏高的原因解决方法：一般正常人血清中甲胎蛋白的含量不到20μg/L，但当肝细胞发生癌变时，患者血清中甲胎蛋白会明显升高。因此，建议肝硬化、慢性肝炎病人、家族中有肝癌患者的人要根据自身情况定期到医院做相关检查。2、妊娠妇女和新生儿也会出现甲胎蛋白的一时性升高的情况解决方法：因为甲胎蛋白是胚胎早期的主要蛋白质，所以妊娠期孕妈体内的甲胎蛋白含量会明显升高，一般在妊娠后3个月就明显升高，到7-8月达到最高峰并相对稳定，约在产后3周后逐渐恢复正常水平。所以孕妈们不必过分担心，建议孕妈定期到医院做有关甲胎蛋白的检查，以便及时发现问题，及时缓解病情。3、与病毒性肝炎有关解决方法：慢性肝炎活动期甲胎蛋白有轻度、中度升高，一般在50~300μg/L，可以通过药物治疗后降低甲胎蛋白含量，帮助恢复到正常水平。
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AFP的诊断及鉴别诊断-张星虎重点分析.ppt 41页
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神经系统病理特点 主要累及中枢神经系统运动神经细胞，以脊髓以前角运动神经细胞病变最重，严重者病变可累及脑干。脊髓病变又以颈段及腰段最重，尤其是腰段受损严重。 病变亦可波及整个灰质、后角及背根神经节。大脑皮质病变轻微，软脑膜可有病变，病灶特点为散在不对称及多发。 * 临床分型 隐性感染或无症状型（&90％）：无症状，鼻咽分泌物和粪便排毒，血清抗体升高 顿挫型(4％-8％)：不典型上呼吸道感染症状和消化道症状，早期排毒，抗体阳性 无瘫痪型(1%-2%)：出现神经系统症状，但不发生瘫痪，无菌性脑膜炎改变 瘫痪型(0.1%)：系脊灰典型表现
* 临床分期 潜伏期：一般为5~14天（3~35天） 前驱期 上呼吸道感染及胃肠炎症状 双峰热：儿童多见 成人以发热、肌肉酸痛、皮肤过敏为主，双峰热少见 多于l~4d退热，症状消失，此为顿挫型 瘫痪前期 多数病人由前驱期进入，少数与前驱期热退4-7 天出现 主要表现为发热及中枢神经系统症状
未出现瘫痪
如经3~5d恢复，则为无瘫痪型 少数病人进入瘫痪期
* 临床分期 瘫痪期 多在起病2-7d后，体温开始下降时出现瘫痪，以后逐渐加重，48h内达高峰 一般体温正常后，瘫痪亦停止进展 恢复期 一般从肢体远端小肌群开始恢复，继之近端大肌群，肌腱反射亦逐渐出现 最初1-2个月恢复较快，6个月后则恢复慢，脑神经损伤多能恢复正常 轻者l-3个月恢复，重者常需12-18个月甚至更久才能恢复 后遗症期 因运动神经元损伤严重而发生的瘫痪和肌肉萎缩，l-2年仍不恢复则为后遗症 可导致肌肉萎缩及畸形，如脊柱弯曲、足内翻、足外翻及足下垂等
* 病变部位分型 脊髓型 脑干型 脑型 混合型 * 各型特点 脊髓型瘫痪特点 表现为弛缓性瘫痪，肌张力减退、腱反射减弱或消失 多不伴有感觉障碍 瘫痪表现多不对称，常见四肢瘫痪，尤以下肢瘫痪多见，多数为单肢瘫痪 近端重于远端 严重可导致呼吸衰竭、肠麻痹、尿潴留或失禁 * 各型特点 * 脑干型瘫痪特点 占瘫痪型病例的6-25%，常与脊髓型同时发生 病变主要在延髓及脑桥 脑神经瘫痪：以第VII、IX、X、XII对脑神经最易受损，表现面肌瘫痪及延髓麻痹。其次亦可波及第III、IV、V、VI及XI对脑神经而引起相应症状 呼吸中枢瘫痪 病变部位：延髓网状结构外侧 临床表现：中枢性呼吸障碍，表现为呼吸节律改变，严重者有缺氧及呼吸衰竭 血管运动中枢麻痹 病变部位：延髓网状结构内侧 临床表现：脉搏细弱不规则、心律失常、血压下降、四肢厥冷；发绀及循环衰竭 各型特点 脑型表现（弥漫性或局灶性脑炎） 较少见 表现与病毒性脑炎类似，发热、剧烈头痛、烦躁不安、嗜睡、震颤、昏迷及惊厥，可有上运动神经元瘫痪 混合型 上述各型同时存在 以脊髓型及脑干型同时存在最常见
* 实验室检查 血常规：多正常 血沉：急性期可增快
脑脊液检查：发病后第l周与病毒性脑膜炎相似，WBC轻度增多 病毒分离：发病后l周内，从鼻咽部、血、脑脊液及粪便中可分离出病毒，粪便中病毒存在时间长，从潜伏期至病后3周或更长 免疫学检查：用中和试验或补体结合试验检测血中特异性抗体，病程中抗体滴度4倍以上增高有诊断意义 核酸检测 * 诊断 流行病学史：与脊髓灰质炎病例接触史、疫苗接种史等 临床表现：出现不对称的肢体弛缓性瘫痪 实验室检查：大便病毒分离阳性 * 典型病例分享 患者男性，22岁，维吾尔族 以“发热，双下肢无力4天，加重1天
”于日收住和田地区医院感染科 4天前不明原因出现发热(T39℃)，伴咽痛，颈背部酸痛，并出现双下肢无力，1天前咽部异物感，腰骶部疼痛，双下肢无力加重，无肢体麻木，无二便障碍 既往服用糖丸不详 入院查体：T37.4℃， P96次／分， R22次／分，Bp130／70mmHg。神志清，精神欠佳，颈部稍抵抗，双上肢肌力5级，双下肢肌力2级，双下肢膝反射减弱，巴氏征(-)，感觉检查（-） * 典型病例分享 日16：30，头痛，Bp150／90mmHg，甘露醇脱水降颅压，患者头痛减轻 日19：30, 神志不清，瞳孔等大等圆，对光反射迟钝，急查头颅CT未见异常，返回病房后，患者出现口唇紫绀，呼吸急促，监测SaO2 80％，立即给予呼吸兴奋剂及面罩吸氧后，患者唇红润，心电监测P100次／分，R37次／分， SaO2 97％，仍神志不清 日23：00，出现呼吸深而慢，口唇及面部紫绀，瞳孔散大，对光反射消失， 血SaO2 45％，立即给予面罩吸氧并气管插管，呼吸机辅助呼吸，病情稍平稳，心电监测P131次／分， SaO2 96% * 典型病例分享 日03：50，出现心率加快（195次／分），Bp165／75mmHg，血SaO2 90％ 3：55
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抗冻肽表达载体构建与应用、绿色木霉分泌表达系统及AFP基因内含子功能的研究.pdf 77页
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抗冻肽表达载体构建与应用、绿色木霉分泌表达系统及AFP基因内含子功能的研究.pdf
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中国科学院研究生院
博士学位论文
抗冻肽表达载体构建与应用、绿色木霉分泌表达系统及AFP基因
内含子功能的研究
姓名：徐军
申请学位级别：博士
专业：生物化学与分子生物学
指导教师：龚蓁蓁
中国科学院生物化学与细胞生物学研究所
抗冻肽表达载体构建与应用、绿色木霉分泌
表达系统及AFP基因内含子功能的研究
本论文由三部分工作组成：
PCR引物，从含美洲拟鲽AFZP基因cDNA序列的细菌表达质粒中扩增出目的
片段，将PCR扩增的目的片段克隆到pUC-19质粒并进行了序列测定，测序结
果与已发表的美洲拟鲽AFZP基因cDNA序列完全一致，最后我们将AFZP基
子及NOS终止子之间。采用花粉管通道方法，我们对数种植物进行了AFZP
植物表达载体的转化，初步实验结果表明转化植株与野生植株相比显示了一定
程度的酬寒能力。
二、绿色木霉(Trichoderma
viride)是～种有希望用于外源基因分泌表达的丝
状真菌，为了探索在绿色木霉中进行分泌表达，我们将来源于巨大曲霉
(Aspergillusgiganteus)的抗真菌蛋白AFP基因(430
bp)开放阅读框(包含
前导序列以及内含子)插入真菌表达载体TrpC基因的启动子和终止子之间
并利用表达载体中潮霉素抗性基因为筛选标记．以PEG介导的原生质体转化方
法转化了绿色木霉，SDS—PAGE和Western印迹分析表明，绿色木霉转化子分
泌表达了具有抗真菌活性的成熟AFP，本部分的工作为研究在绿色木霉中分泌
表达具有重要应用价值的异源真核蛋自打下了基础。
中国科学院生物化学与细胞生物学研究所
三、丝状真菌内含子的剪接可能与其他高等真核生物相似，但它是否影响基因
表达呢?对此，人们依然知道的很少。巨大曲霉(Aspergillusgiganteus)的抗
真菌蛋白AFP基因(430
bp)开放阅读框中间有两个小的内含子(89
bp)，具有保守的剪接位点及丝状真菌内含子的一些典型特征。为了解内含子是
否会影响AFP基因的表达，我们构建了插入AFP基因(430
bp)或无内含子的
AFP基因(即285 cDNA序列)的真菌表达载体并将它们分别转化
viride)，对转化子的表达分析结果表明，内含子的存在
绿色木霉(Trichoderma
对于AFP基因的表达是必需的，这说明真菌内含子不仅仅只是被剪切的间插序
列，它们还可能对基因表达产生关键影响。最近的研究表明AFP与寡核苷酸结
合结构域有相似的结构特征，而已有研究通过比较ADH及其相关基因的内含
子和外显子结构，证实，ADH基因的寡核苷酸结合结构域的进化是内含子依赖
的，因此，基于
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