一种同时测定半夏中6种有机酸含量的HPLC方法
申请号：.3 申请日：
摘要：本发明涉及一种同时测定半夏中6种有机酸含量的方法，该方法包括以下步骤：(1)样品溶液制备(2)对照品溶液制备(3)高效液相色谱测定：取对照品溶液和样品溶液在以下色谱条件下进行测定分析，色谱柱为GL?InterSustain-C18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为磷酸调节pH＝2.0的0.03mol·L-1(NH4)H2PO4缓冲液和甲醇，体积比为97∶3，流速为0.8mL·min-1，柱温30℃，检测波长为210nm。在该方法条件下，半夏中草酸、甲酸、苹果酸、乙酸、柠檬酸和琥珀酸同时得到了有效分离，且方法学结果均符合分析测定要求。该方法相比以前电位滴定法测定总有机酸的含量更为明确和客观，能有效、快速的测定半夏中6种有机酸的含量，可更全面、更准确的用于半夏药材的质量控制。
地址： 400016 重庆市渝中区医学院路1号
发明(设计)人：
主分类号：
&实质审查的生效IPC(主分类):G01N
30/02申请日:
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
&一种同时测定半夏中6种有机酸含量的HPLC方法，其特征在于包括下列步骤：(1)样品溶液制备：称取干燥的半夏药材粉末2.0g，精密称定，加入40mL水，称定重量，超声，300W，25kHz，提取2次，每次2h，放至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，提取液用砂芯布什漏斗过滤，合并滤液置100mL容量瓶中，加水定容，精密量取滤液20mL于小烧杯中，滴加氨水调pH在11.5?12范围内，用提取液3倍量的乙酸乙酯萃取3次，收集碱水液，再滴加磷酸调pH在2.0?2.5范围内，以3倍量的乙酸乙酯萃取5次，收集乙酸乙酯，旋转蒸发挥干，加超纯水溶解并定容至25mL，用0.22μm滤膜滤过，取续滤液，即为样品溶液；(2)对照品溶液制备：分别精密称取草酸、甲酸、苹果酸、乙酸、柠檬酸和琥珀酸对照品适量，加水溶解，制得含有草酸、甲酸、苹果酸、乙酸、柠檬酸和琥珀酸的混合对照品溶液；(3)高效液相色谱测定：将对照品溶液和样品溶液进行高效液相色谱测定，色谱柱为GLInterSustain?C18，流动相是磷酸调节pH＝2.0的0.03mol·L?1(NH4)H2PO4缓冲液和甲醇，体积比为97∶3，流速0.8mL·min?1，柱温30℃，检测波长210nm，对照品溶液和样品溶液各进样20μL，采用标准曲线法定量，色谱图记录与处理由工作站完成，理论塔板数按草酸峰计算不低于3000。
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进入国家日期论文:高效液相色谱法测定西司他丁钠的含量及有关物质-中大网校论文网HPLC分离测定氨苄西林及其降解产物
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& HPLC分离测定氨苄西林及其降解产物
建立新的HPLC分离测定氨苄西林及其降解产物的方法。方法：色谱条件为：Nova-Pak C18色谱柱；0.02 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(pH4.5)-乙腈(95∶5)为流动相；检测波长为230 nm。
目的：建立新的HPLC分离测定氨苄西林及其降解产物的方法。方法：色谱条件为：Nova-Pak C18；0.02 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(pH4.5)-(95∶5)为流动相；检测波长为230 nm。
结果：在0.24～1.20 mg.ml-1的浓度范围内线性关系良好，r=0.9991，平均回收率为100.6%(n=5)，RSD＝0.47%，重复进样RSD＝0.06%(n=5)，氨苄西林及其降解产物得到分离。
结论：本法简便、快速、准确，适用于氨苄西林的含量测定及其降解产物的检查。
　　氨苄西林(氨苄青霉素)为&-内酰胺类抗生素，对革兰阳性、阴性菌有较强的抑制作用，临床应用较广。中国药典1995年版二部、美国药典ⅩⅩⅢ版、英国药典1993年版均有收载，其质量控制方法相应为硫醇汞盐紫外分光光度法，HPLC，电位法。分光法、电位法，操作繁琐，分析周期长，专属性不够好，且汞盐毒性较大。本文采用HPLC分离测定了氨苄西林及其降解产物，结果满意。
1　仪器与试药
　　日本岛津LC-6A仪，SPD-6N紫外-可见检测器，C-R4A色谱数据处理机。
氨苄青霉素三水物(氨苄西林)对照品(批号410-9402，含量85.6%，中国药品生物制品检定所)；注射用氨苄西林钠(批号，石家庄市第二制药厂)；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
　　色谱柱：大连化学物理研究所Nova-Pak C18(4.6 mm&200 mm,4 &m)；流动相：0.02 mol。L-1磷酸二氢钠溶液(pH4.5)-乙腈(95∶5)，薄膜(0.5 &m)过滤并脱气；检测波长为230 nm；流速：1.3 ml。min-1；灵敏度：0.08 AUFS；进样量：20 &l。
2.2　系统适用性试验
　　碱性降解产物的制备：称取氨苄西林对照品，用0.01 mol。L-1氢氧化钠溶液制成0.6 mg。ml-1溶液，放置30 min，然后用磷酸调节溶液pH值至(4.5&0.1)，量取5 ml置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
取上述溶液20 &l注入色谱仪，在上述色谱条件下分离，得(图1)，从图中可见，氨苄西林峰的约为12 min，氨苄西林与降解产物实现基线分离。以氨苄西林峰计为2700，氨苄西林峰与相邻降解产物峰的为7。
2.3　线性关系
　　精密称取氨苄西林对照品适量，用流动相制成2.4 mg。ml-1溶液，精密量取1，2，3，4，5 ml分别置10 ml量瓶中，用流动相定容，摇匀。在上述色谱条件下各进样20 &l测定。结果氨苄西林在0.24～1.20 mg。ml-1的浓度范围内(A)与浓度(c,mg。ml-1)线性关系良好，回收方程为：A=50,r=0.9991。
2.4　精密度试验
　　取氨苄西林对照品，用流动相制成0.6 mg。ml-1溶液，在上述色谱条件下重复进样5次，峰面积的RSD为0.06%，精密度良好。
2.5　重现性试验
　　精密称取同一批号样品5份，按样品测定方法操作。结果RSD为0.40%。
2.6　回收率试验
　　精密称取已准确测定含量的注射用氨苄西林钠，准确加入适量氨苄西林对照品，用流动相溶解，按样品测定项下方法测定，结果见表1。
表1　回收率测定结果.n=5
加入量/mg 测定量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
11.81 11.93 101.00
11.95 12.01 100.50 100.60 0.47
12.01 11.99 　99.80
12.12 12.19 100.60
12.24 12.35 100.90
2.7　样品测定
　　精密称取注射用氨苄西林钠样品3批各适量，分别用流动相稀释成0.6 mg。ml-1溶液，在上述色谱条件下进样测定。另精密称取氨苄西林对照品适量，同法稀释测定。以外标法计算含量，面积归一化法检查降解产物，结果见表2。
表2　样品测定结果.n=3
批号 含量/% RSD/% 降解产物/%
.97 0.18 0.79
.28 0.15 0.84
.09 0.11 0.77
3.1　考察了流动相中乙腈量对氨苄西林保留时间的影响。乙腈量减少，保留时间延长，以5%配比，保留时间较合适。
3.2　考察了流动相中，磷酸盐缓冲液不同的pH值(5.0，4.5，4.0)对保留时间的影响。缓冲液的pH值调至4.5与5.0时，保留时间大致相同。pH值调至4.0时，保留时间明显延长。
3.3　配好的样品溶液在室温放置5 h后再测定，结果几乎不变，溶液稳定性良好。
3.4　取氨苄西林对照品用流动相制成95.7 &g。ml-1溶液，于岛津UV-265FW型在200～400 nm波长范围内扫描，在波长208 nm处有最大吸收，但此处为末端吸收，干扰较大。选择230 nm波长处测定，灵敏度适
(责任编辑：)
[ 早9:00 至 晚21:00 ]286ChinaPharmacist2003,Vol.6　No.
高效液相色谱法测定西咪替丁注射液的含量
彭军　(天津医科大学总医院　天津300052)　蒙有绪　(天津医科大学药学院98级实习生)
摘　要　目的:建立用高效液相色谱法测定西米替丁注射液含量的方法。方法:以甲硝唑为内标,色谱柱为ODSC18柱,甲醇2水2三乙胺(27∶73∶011,用磷酸调节PH至315±011)为流动相,流速018ml/min,检测波长225nm。结果:在510～3010μg?
ml-1的浓度范围内具有良好的线性关系,r=019999,平均回收率为10013%,RSD=014%。与美国药典23版方法相比,无显
著性差异(P&0105)。结论:该方法简便、灵敏、准确可靠,适用于西米替丁注射液的含量测定。关键　西米替丁:甲硝唑;高效液相色谱法;内标法
中图分类号:R927.2　　文献标识码:A　　文章编号:03)
DeterminationofCimetidineinjictionbyHPLC
PengJun,MengYouXu(PharmacyDepartment,GeneralTianjin300052)
ABSTRACT:OBJECTIVEToestablishatheinjection.METHODS:Theseperationwasperformedona(C.2water2triethylamine(27∶73∶011,adjustedtopH315±011withphosphoric01ml/min,thedetectionwavelengthwas225nmandmetronidazolewasusedasthein2ternalstandard.Thelinearityrangeswasgoodinμg.ml-1,r=0199991Theaveragerecoverywas10013%,RSD=0149%.TherewerenosignificantdifferencesbetweentheUSP(23)methodandtheHPLCmethod(P&0105).CONCLU2
SIONS:Themethodwassimple,convenientandaccurateandwassuitableforthedeterminationofcimetidineinjection.KEYWORDS:CMHPLC;Internalstadardmethod
　　西咪替丁(cimetidine,又名甲氰咪胍,商品名:
泰胃美,Tagamet)是一种H22受体阻断剂,具有较强的抑制胃酸分泌的作用,能明显抑制基础和夜间胃酸分泌,亦能抑制因组胺、五肽胃泌素、胰岛素和试餐等所刺激的泌酸作用。临床上应用广泛,主要用于各种急慢性溃疡病的治疗。其含量测定方法报道较多,中国药典[1]采用非水滴定法测定原料及片剂的含量,美国药典23版[2]采用HPLC外标法。其注射剂的含量测定国内各地方标准均采用电位滴定法,用HPLC内标法国内鲜有报道,本实验参考有关文献及资料[3-8],建立了用HPLC内标法则定西咪替丁注射剂含量的方法,与美国药典23版相比,此方法采用内标法测定简便、灵敏、结果准确可靠、重现性好,能满足西咪替丁的药品质量监控。
1　仪器与试剂
JASCO高效液相色谱仪(PU-1580泵,UV-1575检测器,CPUcderonⅡ,windows98系统微机);
2　实验方法与结果
211　色谱条件　ODSC18色谱柱(416mm×250mm,5μm);流动相:甲醇2水2三乙胺(27∶73∶011,用
磷酸调节pH至315±011,超声脱气20min);流速:
018ml/检测波长:225进样量:20μl。在上述条件下,西咪替丁的tR=31317min,内标甲硝唑tR=71567min,分离度大于3,理论塔板数大于2000,样品和内标能够有效的分离,见图1
1-西咪替丁峰;2-内标峰
西咪替丁(对照品,由天津市药品检验所提供);甲硝
唑(内标,由天津市药品检验所提供);西咪替丁注射液(无锡市第七制药有限公司,批号:0916);泰胃美注射液Tagamet(中美史克制药有限公司,批号:T和T);甲醇为色谱纯;磷酸、三乙胺均为市售分析纯。
图1　西咪替丁与内标的分离图谱
212　西咪替丁对照品贮备液的配制　精密称取西
咪替丁对照品20mg置200ml量瓶中,加80ml甲
醇溶解后,加水稀释至刻度,摇匀,即得100μg?ml-1的对照品贮备液。
213　甲硝唑内标的配制　精密称取甲硝唑40mg
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中国药师　　2003年第6卷第5期
置100ml量瓶中,加40ml甲醇溶解后,加水稀释至刻度,摇匀,即得450μg?ml-1的贮备液
液稳定,能满足实际需要。
表2　注射剂含量测定结果(n=3)
本实验建立的HPLC方法美国药典的HPLC外标法
图2　西咪替丁空白样品色谱图
214　西咪替丁标准曲线的制备　精密量取西咪替
312　实验中发现柱长、流动相的配比对西咪替丁的
丁对照品贮备液215,510,715,和1510ml分别置于50ml量瓶中,各加入内标液5ml,用流动相稀释至刻度,摇匀,制成5,10,15,20,25,30μg?ml-1的溶液,在上述条件下进行色谱分析。以西咪替丁与内标的峰面积比Y对浓度X进行直线回归,得回归方程为:Y=(n=6)。结果表明513010μg?ml-　　214项下方法配制10,20,30μg?ml-13个浓度的样品与内标混合液并测定,以西咪替丁与内标的峰面积比代入回归方程计算回收率,结果见表1。
表1　西咪替丁回收率的测定结果(n=10)
(μg?ml101520
保留时间及其与内标峰的分离度影响很大。柱越
长,保留时间也越长。改变流动相的配比,增大甲醇的比例,,而且tR也随之缩短。,pHt,加入。最终选用流2∶73∶011),再用磷酸调节011,可使分离度、tR及峰形达到较为理
想的效果。313　本实验条件下,西咪替丁对照品及样品的水溶液在室温避光下很稳定,放置1周也未影响测定结果。314　应用本实验建立的HPLC内标法测定西咪替丁的含量,具有简便、准确、重现性好的特点,能够满足西咪替丁的药品质量监控。
参　考　文　献
1　中国药典[S]1二部　美国药典[S]123版1373
3　于谨发等1高效液相色谱测定人血浆中的西咪替丁[J]1药物分
( x±s)/μg?ml
( x±s)/%115±55
1103±±0111
21512　稳定性实验　取上述西咪替丁对照品系列
析杂志,):408
4　王伟1HPLC法测定西咪替丁的含量[J]黑龙江医药,1997,10
5　邵水娟1建议修改中国药典西咪替丁片含量测定方法[J]1中国
浓度的溶液在室温下立即测定与放置24h后测定,
其峰面积比值几乎不变。216　样品含量测定　精密量取样品1ml置100ml量瓶中,加40ml甲醇溶解后,加水稀释至刻度,摇匀。精密量取1ml置50ml量瓶中,加入内标液5ml,用流动相稀释至刻度,摇匀,进行测定。同时将测定结果与美国药典23版HPLC外标法进行比较,结果见表2。3　讨论311　本实验采用内标法测定西咪替丁的含量,与美国药典23版外标法比较,无显著性差异(P&0105)。以甲硝唑为内标,甲硝唑对照品易得,水溶
现代应用药学杂志,):53
6　邵水娟1建议修改中国药典西咪替丁片含量测定方法[J]1中国
医药工业杂志,):22
7　王琼芳,叶文波1高效液相色谱法测定西咪替丁制剂中西咪替丁
的含量[J]中国现代应用药学杂志,):144
8　BettoP.,Ciranni2SignorettiE.DiFavaR.DeterminationofCime2tidineandfelatedimpuritiesinpharmaceuticalformulationsbyhigh-performanceliquidchromatography[J]1JournalofChromato2
中药药名趣味对联
　　1.春霞带云锄芍药,秋风和露采芙蓉。
2.人参(生)在世唯官桂(贵),厚朴传家无滑石。3.东牛黄,西麝香,南星北胆;春苁蓉,夏枯草,秋菊冬花。
4.慈姑穿山采红花走遍生地熟地,苏子过江寻紫草翻
越常山淮山。
潘明安　供稿)
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