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【整理总结】到底什么是无血清培养基Opti-MEM及用lipo2000或lipo3000转染质粒是否需要换液？
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这个帖子发布于3年零99天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近因实验需要向life science的技术咨询了一些问题，其中有两个问题觉得是细胞培养中大家经常遇到的，但是可能不是很清楚的。现在把life的技术支持孟佳子博士的回复贴在这里，供大家参考：问题1：到底什么是Opti-MEM培养基，标签上的reduced serum medium该怎么理解：回复如下：关于您咨询的问题，在做转染时，我们推荐用无血清培养基Opti-MEM(R)。这类培养基本身是不含有血清的，同时因为添加了化学成分有替代血清的作用。该培基用于细胞培养时，可以减小血清的添加量，因此叫做“Reduced Serum Medium”，即减血清培养基。配置转染试剂的时候，建议您按照说明书推荐使用该不含血清的培养基进行配置。并且，用该培基配置的转染试剂不会对您的细胞产生影响。附件是该培基的说明书 （），供您参考。问题2：lipo 3000转染试剂的说明书上为什么没有换液时间。回复如下： 关于lipo3000，及lipo2000转染后细胞是否需要换液，需要根据细胞的状态及具体的实验来决定。产品本身的说明书中，并不强调一定要进行换液。不只是lipo3000，在更新了的lipo2000的说明书中也不再强调必须要给细胞换液。如果您的细胞转染后，觉得细胞状态不好，则建议您考虑换液；但是如果细胞状态在转然后没有明显的影响，则不需要换液。此外，lipo3000相比lipo2000对细胞的毒性更低，转染后对细胞的影响也较小。附件是新版的lipo2000的说明书（），供您参考。新版lipo2000的说明书我上传的时候说是已经有了，链接就是上面一行的，但是我不知道是不是真的新版。呵呵，我手里的是技术刚刚发给我的。供大家参考吧
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嘉宇bb 你的问题解决了吗？我用的lipo3000转染，6h换液，细胞状态不好，几乎看不出原来的形态了，小黑点也特别多，但是不动。可能的原因有：1.细胞本身状态不好不能耐受转染。建议将细胞状态搞好先，实在不好重新复苏甚至重新买一株。细胞状态是实验的基础。2.转染的是质粒的话，建议提质粒的过程中注意无菌，最后75酒精那步之后要注意了可以在超净台里面加无菌水溶解质粒。测浓度分装一点出来测就可以了。然后就是有钱的话可以用去内毒素试剂盒要好一些，不过如果细胞能耐受也没问题。3.lipo或者质粒的量要按照说明书。如果太多了减少lipo的量试试。4.转染之后确实都会有小黑点的。只要不是污染只要不是太严重就不用去纠结这个。特别是瞬时转染的。
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这个不好说，情况是各各不同的。磷酸钙沉淀法做转染有黑点是非常正常的，颗粒细小、大小匀称，分布均匀的话说明操作较好，预期转染效果也较好，当然也取决于质粒、细胞状态等等。脂质体我转染的时候是没见小黑点的，突然出现的话应该是和Lipo有关，但不能算作污染吧？细菌污染应该会增多，且可见细菌的运动、活动，，， 。 可通过荧光蛋白等质粒练习转染，优化转染效率。只要能实现自己的目的，小黑点也无所谓啊。另外，主动问客服是最直接的办法，毕竟我们购买时已经为此付费了，不是吗？
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转染miRNA mimics&我用的是X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent，这个有什么说明要求吗？转染比例呢？
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Sigma也有类似opti-MEM的低血清培养基。
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请问用无血清培养基Opti-MEM(R)配置lipo3000转染试剂后，是直接加到培养基里面转染吗，那样最终还不是同有血清培养基混在了一起？
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huming1989 请问用无血清培养基Opti-MEM(R)配置lipo3000转染试剂后，是直接加到培养基里面转染吗，那样最终还不是同有血清培养基混在了一起？ 不是的，是加到opti-MEM里转染的，你再看看说明书。
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你好，我最近也订购了他们家的lipo3000，说明书上貌似没有写RNA olige的量？以前用2000的时候有写明加入20pmol我想请问下，你是加了多少？我看见说明书上转染DNA的稀释量是和opti-MEM 1:1，转染RNA的话，也是1:1吗？
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Suki0122 你好，我最近也订购了他们家的lipo3000，说明书上貌似没有写RNA olige的量？以前用2000的时候有写明加入20pmol我想请问下，你是加了多少？我看见说明书上转染DNA的稀释量是和opti-MEM 1:1，转染RNA的话，也是1:1吗？直接问技术售后吧。在他们的网站找联系我们。然后发邮件吧。
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万能的版主~~我的细胞本来蛮干净的没什么背景，可是每次转染质粒后所有孔都会出现小黑点，会动，已经转了十多次了，质粒重新提了6,7次，lipo也换了一支，还是不行。这个跟细胞有关系么？
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caatt 万能的版主~~我的细胞本来蛮干净的没什么背景，可是每次转染质粒后所有孔都会出现小黑点，会动，已经转了十多次了，质粒重新提了6,7次，lipo也换了一支，还是不行。这个跟细胞有关系么？ 应该是Lipo 和质粒形成的复合物，部分复合物颗粒较大，在显微镜下被放大后可以观察到。采用其他的转染方式也会产生或大或小的颗粒沉淀在培养皿的底部的，不用担心。但是我们可以通过每次转染形成的颗粒大小、密度等信息预估转染效果，提前决定实验是否需要优化。
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应该是Lipo 和质粒形成的复合物，部分复合物颗粒较大，在显微镜下被放大后可以观察到。采用其他的转染方式也会产生或大或小的颗粒沉淀在培养皿的底部的，不用担心。但是我们可以通过每次转染形成的颗粒大小、密度等信息预估转染效果，提前决定实验是否需要优化。 如果形成了这种复合物，是说明转染效率好还是不好？应该怎样优化？撇开上面不说。。放假回来我再用lipo，没加转染试剂之前细胞很干净，加了之后确实是马上看到污染了，我再在另外一个孔只加全培和lipo，直接就能看到小黑点。原来lipo真的是会污染的。
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这个不好说，情况是各各不同的。磷酸钙沉淀法做转染有黑点是非常正常的，颗粒细小、大小匀称，分布均匀的话说明操作较好，预期转染效果也较好，当然也取决于质粒、细胞状态等等。脂质体我转染的时候是没见小黑点的，突然出现的话应该是和Lipo有关，但不能算作污染吧？细菌污染应该会增多，且可见细菌的运动、活动，，， 。 可通过荧光蛋白等质粒练习转染，优化转染效率。只要能实现自己的目的，小黑点也无所谓啊。另外，主动问客服是最直接的办法，毕竟我们购买时已经为此付费了，不是吗？
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你好，我想问一下lipo3000转染的时候可以不可用普通的培养基来代替opti？需不需要加双抗？
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实验做的蛋疼 你好，我想问一下lipo3000转染的时候可以不可用普通的培养基来代替opti？需不需要加双抗？ 一切按照说明书来操作。印象中是用opti-mem的。
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lipo3000转染时为什么要加P3000试剂，有什么作用？求指教
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可不可以用普通的无血清培养基代替Opti-MEM
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回复15楼可以替代
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请问转染前几个小时，细胞要做什么处理吗
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丁香园版主
楼上各帖已阅
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亲爱的大神们，我想问一下：1，做转染前为什么要换液呢？2，a液和b液混合时是把转染试剂加入质粒复合物里吗？如果是，为什么？
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caatt 万能的版主~~我的细胞本来蛮干净的没什么背景，可是每次转染质粒后所有孔都会出现小黑点，会动，已经转了十多次了，质粒重新提了6,7次，lipo也换了一支，还是不行。这个跟细胞有关系么？你的问题解决了吗？我用的lipo3000转染，6h换液，细胞状态不好，几乎看不出原来的形态了，小黑点也特别多，但是不动。
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嘉宇bb 你的问题解决了吗？我用的lipo3000转染，6h换液，细胞状态不好，几乎看不出原来的形态了，小黑点也特别多，但是不动。可能的原因有：1.细胞本身状态不好不能耐受转染。建议将细胞状态搞好先，实在不好重新复苏甚至重新买一株。细胞状态是实验的基础。2.转染的是质粒的话，建议提质粒的过程中注意无菌，最后75酒精那步之后要注意了可以在超净台里面加无菌水溶解质粒。测浓度分装一点出来测就可以了。然后就是有钱的话可以用去内毒素试剂盒要好一些，不过如果细胞能耐受也没问题。3.lipo或者质粒的量要按照说明书。如果太多了减少lipo的量试试。4.转染之后确实都会有小黑点的。只要不是污染只要不是太严重就不用去纠结这个。特别是瞬时转染的。
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我最近买了只lipo3000准备转染THP-1试试看，刚试了一次，效果不好，几乎没传进去。仔细看了看说明书，说的是配制转染试剂lipo3000和质粒的时候，推荐用opti-mem，而加入的细胞中，可以有血清和抗生素，也可以没有的。
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用麦可瑞的转染试剂不换液，不稀释，用量比LIPO少，转染效率高，能转质粒,RNA小RNA,还比LIPO便宜！熠晨生物代理的！
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实验做的蛋疼 你好，我想问一下lipo3000转染的时候可以不可用普通的培养基来代替opti？需不需要加双抗？我们实验室是用
无双抗培养基，脂质体复合物用OPTI来配置，转染还可以。（说明书里3000可以：在血清/抗生素存在或不存在时均可）你参考下
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转染悬浮细胞，所用的培养基CD FortiCHO为无血清培养基，配置脂质体DNA复合物时可不可以直接用该培养液，不用opti-MEM?
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我用的lipo2000，转染的时候出现了很多的小黑点，正常的细胞只有零星的几个，但是有的孔里细胞又好的很，这是什么原因，加样问题？还是细胞数不均匀导致的？求解
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欢迎大家来我的腺病毒、慢病毒、腺相关病毒技术答疑贴讨论！帖子链接如下：
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转染miRNA mimics&我用的是X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent，这个有什么说明要求吗？转染比例呢？
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我近期也在用lipo3000转染hela细胞，同时铺了二个六孔板，转染板杆菌污染，另一板没有污染，我用的opti-mem稀释lipo3000和DNA，六孔板加入opti-mem，现在想是不是可以按照说明书说的可以加入血清试试。现在重新复苏细胞，所以液体重新配制，再看看结果怎么样吧。
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您好，我想问一下如果6h换液的话，吸走混有质粒和lipo2000的opti-mem后，要清洗细胞么？还是吸走后就直接加入10%FBS培养基。
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wanliheng huming1989 请问用无血清培养基Opti-MEM&reg配置lipo3000转染试剂后，是直接加到培养基里面转染吗，那样最终还不是同有血清培养基混在了一起？ 不是的，是加到opti-MEM里转染的，你再看看说明书。您好，想咨询一下，转染前孔中细胞培养基是什么？是10%FBS普通培养基还是opti-MEM培养基？也就是说铺板的时候空中的培养基是什么最好呢？
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你可以试试汉恒的转染试剂看看，这个转染试剂效率高，重复性好，操作简单，无明显细胞毒性，抗血清干扰，我之前用过，感觉蛮好的，丁香通上就有免费试用装申请活动！ —【汉恒生物LipoFiter转染试剂免费申领-丁香通】
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DOTASK 用麦可瑞的转染试剂不换液，不稀释，用量比LIPO少，转染效率高，能转质粒,RNA小RNA,还比LIPO便宜！熠晨生物代理的！请问用迈克锐你转染的什么细胞？转染效率高不高？我的细胞属于难转的，发愁啊~
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楼上您好，你转染的是什么细胞呀，我转染的悬浮细胞转染也不成功，您有什么好建议吗？
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最近因实验需要向life science的技术咨询了一些问题，其中有两个问题觉得是细胞培养中大家经常遇到的，但是可能不是很清楚的。现在把life的技术支持孟佳子博士的回复贴在这里，供大家参考：问题1：到底什么是Opti-MEM培养基，标签上的reduced serum medium该怎么理解：回复如下：关于您咨询的问题，在做转染时，我们推荐用无血清培养基Opti-MEM(R)。这类培养基本身是不含有血清的，同时因为添加了化学成分有替代血清的作用。该培基用于细胞培养时，可以减小血清的添加量，因此叫做“Reduced Serum Medium”，即减血清培养基。配置转染试剂的时候，建议您按照说明书推荐使用该不含血清的培养基进行配置。并且，用该培基配置的转染试剂不会对您的细胞产生影响。附件是该培基的说明书 （），供您参考。问题2：lipo 3000转染试剂的说明书上为什么没有换液时间。回复如下： 关于lipo3000，及lipo2000转染后细胞是否需要换液，需要根据细胞的状态及具体的实验来决定。产品本身的说明书中，并不强调一定要进行换液。不只是lipo3000，在更新了的lipo2000的说明书中也不再强调必须要给细胞换液。如果您的细胞转染后，觉得细胞状态不好，则建议您考虑换液；但是如果细胞状态在转然后没有明显的影响，则不需要换液。此外，lipo3000相比lipo2000对细胞的毒性更低，转染后对细胞的影响也较小。附件是新版的lipo2000的说明书（），供您参考。新版lipo2000的说明书我上传的时候说是已经有了，链接就是上面一行的，但是我不知道是不是真的新版。呵呵，我手里的是技术刚刚发给我的。供大家参考吧
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请问转染前几个小时，细胞要做什么处理吗
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丁香园版主
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亲爱的大神们，我想问一下：1，做转染前为什么要换液呢？2，a液和b液混合时是把转染试剂加入质粒复合物里吗？如果是，为什么？
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caatt 万能的版主~~我的细胞本来蛮干净的没什么背景，可是每次转染质粒后所有孔都会出现小黑点，会动，已经转了十多次了，质粒重新提了6,7次，lipo也换了一支，还是不行。这个跟细胞有关系么？你的问题解决了吗？我用的lipo3000转染，6h换液，细胞状态不好，几乎看不出原来的形态了，小黑点也特别多，但是不动。
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嘉宇bb 你的问题解决了吗？我用的lipo3000转染，6h换液，细胞状态不好，几乎看不出原来的形态了，小黑点也特别多，但是不动。可能的原因有：1.细胞本身状态不好不能耐受转染。建议将细胞状态搞好先，实在不好重新复苏甚至重新买一株。细胞状态是实验的基础。2.转染的是质粒的话，建议提质粒的过程中注意无菌，最后75酒精那步之后要注意了可以在超净台里面加无菌水溶解质粒。测浓度分装一点出来测就可以了。然后就是有钱的话可以用去内毒素试剂盒要好一些，不过如果细胞能耐受也没问题。3.lipo或者质粒的量要按照说明书。如果太多了减少lipo的量试试。4.转染之后确实都会有小黑点的。只要不是污染只要不是太严重就不用去纠结这个。特别是瞬时转染的。
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我最近买了只lipo3000准备转染THP-1试试看，刚试了一次，效果不好，几乎没传进去。仔细看了看说明书，说的是配制转染试剂lipo3000和质粒的时候，推荐用opti-mem，而加入的细胞中，可以有血清和抗生素，也可以没有的。
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用麦可瑞的转染试剂不换液，不稀释，用量比LIPO少，转染效率高，能转质粒,RNA小RNA,还比LIPO便宜！熠晨生物代理的！
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实验做的蛋疼 你好，我想问一下lipo3000转染的时候可以不可用普通的培养基来代替opti？需不需要加双抗？我们实验室是用
无双抗培养基，脂质体复合物用OPTI来配置，转染还可以。（说明书里3000可以：在血清/抗生素存在或不存在时均可）你参考下
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转染悬浮细胞，所用的培养基CD FortiCHO为无血清培养基，配置脂质体DNA复合物时可不可以直接用该培养液，不用opti-MEM?
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我用的lipo2000，转染的时候出现了很多的小黑点，正常的细胞只有零星的几个，但是有的孔里细胞又好的很，这是什么原因，加样问题？还是细胞数不均匀导致的？求解
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欢迎大家来我的腺病毒、慢病毒、腺相关病毒技术答疑贴讨论！帖子链接如下：
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转染miRNA mimics&我用的是X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent，这个有什么说明要求吗？转染比例呢？
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我近期也在用lipo3000转染hela细胞，同时铺了二个六孔板，转染板杆菌污染，另一板没有污染，我用的opti-mem稀释lipo3000和DNA，六孔板加入opti-mem，现在想是不是可以按照说明书说的可以加入血清试试。现在重新复苏细胞，所以液体重新配制，再看看结果怎么样吧。
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您好，我想问一下如果6h换液的话，吸走混有质粒和lipo2000的opti-mem后，要清洗细胞么？还是吸走后就直接加入10%FBS培养基。
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wanliheng huming1989 请问用无血清培养基Opti-MEM&reg配置lipo3000转染试剂后，是直接加到培养基里面转染吗，那样最终还不是同有血清培养基混在了一起？ 不是的，是加到opti-MEM里转染的，你再看看说明书。您好，想咨询一下，转染前孔中细胞培养基是什么？是10%FBS普通培养基还是opti-MEM培养基？也就是说铺板的时候空中的培养基是什么最好呢？
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你可以试试汉恒的转染试剂看看，这个转染试剂效率高，重复性好，操作简单，无明显细胞毒性，抗血清干扰，我之前用过，感觉蛮好的，丁香通上就有免费试用装申请活动！ —【汉恒生物LipoFiter转染试剂免费申领-丁香通】
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DOTASK 用麦可瑞的转染试剂不换液，不稀释，用量比LIPO少，转染效率高，能转质粒,RNA小RNA,还比LIPO便宜！熠晨生物代理的！请问用迈克锐你转染的什么细胞？转染效率高不高？我的细胞属于难转的，发愁啊~
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楼上您好，你转染的是什么细胞呀，我转染的悬浮细胞转染也不成功，您有什么好建议吗？
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