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是否早期癌变 分析仪扫描细胞可知
据介绍，经过15年研发，该公司开发出细胞DNA自动检测分析仪，有望在人体尚无症状的阶段，用细胞DNA定量方法对细胞标本逐个扫描分析，判断是否有癌变细胞存在。
　　OFweek网讯：随着医学科学技术的发展，早期肿瘤的诊断与治疗已经成为我国预防医学的重中之重，也是精准医学的一个重要目标。5月25日，在第二届广东院士高峰年会的&大数据与精准医疗前沿技术应用创新&论坛上，深圳兰丁医学检验所有限公司董事长孙小蓉分享了该公司在精准诊断领域的创新。据介绍，经过15年研发，该公司开发出细胞DNA自动检测分析仪，有望在人体尚无症状的阶段，用细胞DNA定量方法对细胞标本逐个扫描分析，判断是否有癌变细胞存在。　　现状：细胞学诊断存在较大人为误差　　据介绍，在我国，80%以上的肿瘤患者被确诊时已到中晚期。&肿瘤晚期为什么不能治好，因为癌细胞突破了机体膜，手术治疗、放疗把癌细胞全部消除后它还会复发。&孙小蓉说，但在人没有症状，而且还没有形成包块的时候，肿瘤又是很难被发现的。晚期肿瘤的诊断以X光、CT、核磁共振、B超等影像诊断为主，影像学找到的都是肿瘤的包块，而肿瘤包块是由成千上万癌细胞组成的。　　因此，不少科研人员希望通过细胞学诊断的方法，在癌前病变阶段或者肿瘤早期阶段，对病变细胞进行早期诊断和治疗，把肿瘤扼杀在萌芽状态中，降低肿瘤的发生率。细胞学诊断是国内外宫颈癌普查的首选方法。在发达国家，细胞学已经受到了重视，有细胞学校培养细胞技术员，其病理医生也必须要会看细胞。&但是，在中国没有细胞专业、没有细胞技术员的培训学校，我们的组织病理医生是发现的包块切下来以后，才在下再来看细胞是否发生病变，这就是我们的差距。&孙小蓉说，而且用技术进行细胞学诊断也存在很大人为误差。　　经过了15年的反复研制，孙小蓉团队建立细胞学形态分析模型与细胞算法，利用计算机图像处理技术对特殊染色的细胞核进行细胞DNA含量和胞浆形态分析，从而得到DNA物质含量与细胞形态的诊断信息，辅助临床医师判断细胞对是否有癌变及癌变程度。　　突破：机器扫描细胞核测定病变程度　　孙小蓉介绍，DNA细胞自动检测分析仪是用光、机、电、镜加计算机技术将显微镜的视野扩展到细胞核内，测定细胞核内DNA含量，并实现扫描、诊断、出报告的全自动过程，改变了人在显微镜下阅片的历史，解决了人为因素造成的细胞诊断误差，敏感性可达90%以上。　　&把要检测的片子放到设备上，设备会自动对玻片上的每个细胞进行扫描。只需两三分钟时间，就会产生一张彩色的细胞图像报告，其中有问题的细胞会被红框框出来。&孙小蓉说，这个报告是量化的，它会统计一共扫了多少个细胞，其中癌变细胞和正常细胞各有多少都会在报告中显示。　　值得一提的是，这个系统的创新点在于把细胞智能数字诊断与人工经验诊断相结合，实现细胞精准诊断。　　孙小蓉表示，报告产生了以后，还要进行复核，毕竟报告是机器人[-1.01%资金研报]做的，而复核的工作则由医生承担，&医生去做复核的时候，再不需要在显微镜下去找癌变细胞，只需要把框出来的细胞找到就可，再把这些有病变的细胞放在一起，用鼠标一点，这些有病变的细胞在显微镜下立即就可以看到。&　　由于机器人技术的创新，把简单重复的细胞检测工作交给了机器去做，而细胞病理医生的职责也发生了改变，从此他只要做一个指控和复核。　　&该设备能让细胞病理医生的工作量减少85%，且精确度更高。&孙小蓉说。据介绍，兰丁公司已经完成了100多万人次的宫颈癌癌前筛查。大量数据证明，自动化的细胞DNA诊断超过现有的人工显微镜诊断细胞技术。　　孙小蓉透露，借助物联网，兰丁公司正在搭建细胞诊断云平台，也就是可以在云平台上进行自动化的细胞诊断。&细胞扫描完后，通过互联网传到云平台上做诊断，诊断完后病理医生只需做复核，就能生成自动化、智能化和标准化的报告。&孙小蓉说，中国有3亿妇女要做宫颈癌的筛查，如果通过这个云平台做诊断，只需少量医生复核，就可以让基层妇女直接享受更高端的宫颈癌筛查服务，同时减少门诊医生的工作量。　　CINtecPLUS细胞学检测在华上市　　这项技术旨在改善宫颈癌前病变的检测和早期措施。与传统的Pap等检测手段相比，CINtecPLUS的灵敏度和精确度都有所提高，这也是它获得批准的一大原因。&宫颈癌是目前唯一病因明确、可以早期预防和治疗、可以彻底根除的恶性肿瘤。&北京大学第三医院妇科主任郭红燕表示，早诊早治是抵御宫颈癌最为有效的方法，通过临床检测及早发现癌前病变，对宫颈癌的防治发挥着至关重要的作用。　　1:30　　肿瘤细胞维持基因组稳定之谜破解　　12月2日，《自然》杂志在线发表了两校教授合作完成的研究论文。共同第一作者、浙大医学院教授应颂敏说，正常细胞的分裂遵循经典的细胞分裂周期理论，在S期完成DNA复制。这好比工人扎扎实实工作8小时，产出的是质量过关的产品。但是，肿瘤细胞有另外一套机制。　　3:31　　免疫细胞&瞄准&肿瘤有了新靶点　　据介绍，在放疗、化疗和手术的基础上，近几年发展起来的肿瘤免疫治疗被认为是对付肿瘤的第四种手段。肿瘤免疫治疗，就是利用人体内免疫系统来清除肿瘤。许琛琦研究团队和李伯良研究团队将目光聚焦到细胞代谢领域。研究团队锁定了T细胞的细胞内胆固醇代谢通路，当T细胞与肿瘤细胞竞争时，从代谢角度入手增强T细胞对抗肿瘤细胞就成为一种可能。研究团队的代谢线路开创了一个全新的研究角度。　　1:29　　日本科研团队发现癌细胞&免疫逃避&部分机制　　癌细胞基因的特定结构域若出现异常，免疫系统的攻击力就会降低。科研团队的京大肿瘤学教授小川诚司介绍称：&通过调查这一结构域是否存在异常，就有可能设法事先知道让免疫系统攻击不要停止的抗癌药物是否有效。&科研团队用超级计算机对约一万份各类癌细胞样本的遗传信息进行了分析，在肺癌、胃癌、食道癌及大肠癌等的部分数据中发现这些癌细胞基因的特定结构域存在共同的异常情况。　　0:29　　体外培养大肠肿瘤将助力癌症研究　　对患者的肿瘤组织进行体外培养极为困难，这成为制约开发新的治疗药物和方法的瓶颈。庆应义塾大学发表的新闻公报说，该校医学部一个研究小组将6种不同生长因子以不同组合加入培养皿中，成功地长时间体外培养55种人类大肠肿瘤，几乎覆盖了人类大肠肿瘤的全部类型。这些体外培养的肿瘤组织和患者体内的肿瘤同样具有构造和转移能力。研究人员表示，这项研究的意义在于，能够对肿瘤组织&活生生&地研究解析。　　市儿童医院血液肿瘤科呼吸科启动&三名工程&　　记者了解到，市儿童医院血液肿瘤科引入EricBouffet教授团队后，该团队将亲自带领多名由白血病、实体瘤、骨髓移植、肿瘤外科、护理、疼痛、影像等相关领域的专家，定期来市儿童医院现场指导、参与查房，或利用病童医院的综合优势资源通过远程视频系统进行。　　肿瘤免疫治疗规模化应用在即上市公司争市场　　作为精准医疗的重要组成部分，肿瘤免疫治疗药物已在市场崭露头角。相对于传统化疗或靶向治疗，免疫疗法的本质是针对免疫细胞，不是癌症细胞，是动员患者自身天然的抗癌症免疫功能。　　0:10　　质子治疗&分清敌我&杀灭肿瘤　　而质子治疗能治疗不同大小的病灶，比传统放射治疗更安全，且极大地降低放射剂量对正常组织的伤害。在杀灭肿瘤细胞之时，也有效保护正常组织，大大降低了放疗的毒副作用。儿童癌症患者更多获益虽然，质子技术是对抗肿瘤的一大利器，但非无所不能的神器，更不可能每个病患都&质到病除&。
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仪器法血细胞检查,
    
前面章节已经先容了手工操纵的血细胞计数方法。可发看出，由于操纵地程的随机误差，实验器材的系统误差及测方法本身的固有误差，手工法细胞良数不但费时费力，实验结果的精神桷性、正确性也受影响。50年代初期，美国的库尔特研制了电阻抗血细胞分析仪器开创了血细胞分析的新纪元，随着基础医学的发展、高科技技术的应用，特别是计算机技术的引用，血细胞分析仪的丈量水平不断得高，丈量参数不断增加。不但得高了医学检验水平，还为临床提供了更多的有用的实验指标，对于某些疾病的诊断与治疗具有重要的临床意义。
　　 一、电阻抗法血细胞分析仪测试原理
　　（一）白细胞分析原理
　　50年代初，库尔特（W。H。Coulter）发避孕药并申请了粒子计数技术的设计专利，其理是根据血细胞埋传导的怀质，以电解质溶液中悬浮的白细胞在通过计数时引起的电阻变化进行检查为基础，进行血细胞计数和体积的测定，这种方法称为电阻抗法，也称为库尔特原理（图2-7）
图2-7 电阻抗法血细胞计数原理
　　把用等渗电解质溶液（被称为稀释液,diluent）稀释的细胞悬液侄进一个不导电的容器中，将小孔管插到细胞悬液中。小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要的组成部分，其内侧布满了稀释液，并有一个内电极，外侧细胞悬液中有一个外电极。检测期间，当电流以接通通后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流。稀释液通过小孔孔管壁上固有的小孔（直径一般<100μm.厚度为75μm左右）向小孔内部活动。由于小孔这壁布满了具有专导性的液体，其电子脉冲是稳定的。假如供给电流I和阻抗Z是稳定的，根据欧姆定期律通过小孔的电压E也是不变的（这时E=IZ）。当有一个细胞通过小孔时，由于细胞的导电性质比稀释液要低，在电路中小孔感应区内的电阻的增加，于瞬间能上能下起了电压变化而出现一个脉冲信号，自然数为通过脉冲。电压增加的变化的程度取决于非传导的细胞占据小孔感应区的体积，即细胞体积越大，引起的脉冲越，产生的脉冲振幅越高，脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数结果。
　　1．放大：由于血细胞通过微孔时产生的脉搏冲讯号非常微弱，不能直接触发计数电路，因此必须通过电子放大器械，将微伏讯号放大为优级脉冲扭号。
　　2．甄别：通过微孔时的各种微粒均可产生相应脉冲讯号，讯号电平（脉冲幅度）与微粒在小成正比。因除血细胞外，血中细胞外，血中细胞碎片、稀释液中杂质微粒均可产生假讯号，使计数结果偏高。所谓甄别就是利用甄别器根据阈值调节器提供的参考电平，将低于参考电平的假讯号往掉，以进步细胞计数的正确性。
　　3．阈值鹿茸：在一定范围内调节参考电平的大小，使计数结果可能符合实际。
　　4．整形：经过放大和甄别后的细胞脉冲讯号波形尚不一致必须经过整形器作用，修整为形伏一致标准的平顶波后，才能触发电路。
　　5．计数：血细胞的脉冲信号，经过放大、甄别、整形后，送进计数系统。各型血液分析仪器计数系统甄别方式不同，通过各种方式得出计数结果。（图2-8）
图2-8 仪器监测屏上显示白细胞通过脉冲
　　目前很多仪器在给出细胞数据结果之外，是时提供细胞体积分布图形，这些可以表示出细胞群体分布情况的图形，称为细胞分布直方图（图2-9）。直方图是由丈量通过感应区的每个细胞脉冲累积得到的，是在计数的同时进行分析丈量的。如图2-8所示，示波器显示的是所分析的细胞的脉冲大小，图2-9是相应的体积分布直方图，横坐标为体积，纵坐标是血细胞的相对数目，血细胞分析仪在进行细胞分析时将每个细胞的脉冲根据其体积大小分配并存在相应的体积通道中，每个通收集的数据被统计出相对数并表示在&#8220;Y&#8221;轴上。体积数据以飞机升（fl）为单位，表示在X轴上。
　　在进行白细胞体积分析时，仪器计算机部分可以将白细胞体积从35-450fl 分为256个通道(channal)，每个通道为1.64fl，细胞根据其大小被分别放在不同的通道中，从而得到白细胞体积分布的地直方图。（图2-10）
图2-9 细胞体积直方图
图2-10 三部法血液分析仪白细胞分布直方图
　　经过溶血剂处理后的白细胞可以根据体积大小初步确认其相应的细胞群：第一群是小细胞区，主要是淋巴细胞。第二群是单个核细胞区，也被称为中间细胞（MID），包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，核象左移或白血病可有各阶段幼稚细胞及白血病细胞。第三群是大细胞区，主要是中性粒细胞（GRAN）。仪器根据各亚群占总体的比例计算出各亚群的百分率，假如与该标本的白细胞总数相乘，即得到各类细胞的尽对值。可以看出，电阻法只是根据细胞体积的大小，将白细胞分成几个群体。在一个群体中，可能发某种细胞为主（如小细胞区主要是淋巴细胞），但由于细胞体积间的交叉，可能还有其它细胞的存在。显然习惯上甩称的&#8220;三分类、&#8221;&#8220;二分类&#8221;血细胞分析仪达个名称是不够确切的。国外多采用&#8220;三部法&#8221;（3-part）或&#8220;二部法&#8221;(2-part)称之。国内也有专家建议使用&#8220;三分群&#8221;或&#8220;二分群&#8221;描述电阻抗法血细胞分析仪的白细胞分类。
　　（二）红细胞测试原理
　　根据各项参数在血液分析仪检测原理的不同，检测大致分为三个部分。
　　1．红细胞数和红细胞比积迄今，尽大多数血液分析仪使用电阻抗法进行红细胞计数和红细胞比积测定，其原理同白细胞一样。红细胞通过小孔时，形成的相应的脉冲的多少即红细胞的数目，脉冲的高度代表单个脉冲细胞的体积。脉冲高度叠加经换算即可得到红细胞的比积（有的仪器先以单个细胞高度计算均匀红细胞容积（MCV），再乘以红细胞的数得出红细胞比积。）稀释的血液进进红细胞检测通道时，其中含有白细胞，因此，红细胞检测的各项参数均含有白细胞因素，但正常血液有形成分中白细胞比例很少，故其影响可忽略不计，要某种病理情况下，如白血病，白细胞数明显增加而又伴严重贫血时，即可使所得务项参数产生明显误差。根据所测单个红细胞体积及相同体积细胞占总体的比例，可打印出红细胞体积分布直方图。
　　2．血红蛋白测定：任何类型、档次的血细胞分析仪，血红蛋白测定原理是相同的。被稀释的血液的加进溶血剂后，红细胞溶解，开释血红蛋白，后者与溶血剂结合形成血红蛋白衍生物，进进血红蛋白测试系统，在特定波长（一般在530-550nm）下比色，吸光度的变化与液体中Hb含量成比例，仪器便可显示Hb浓度。不同系列血液分析仪配套溶血剂配方不同，形成的血红蛋白衍生物亦不同，吸光度各异但最大吸收峰均接近540nm .这是由于ICSH推荐的氰化高铁法，HICN最大吸收峰在540nm。校正仪器必须以HICN值为标准。大多数系列血液分析仪溶血剂内均含有氰化钾，与血红蛋白作用后形成氰化血红蛋白（留意不是氰化高铁血红蛋白），其特点是显色稳定，最大吸收峰接近540nm，但吸收光谱与HICN有明显的不同。此点在仪器校正时应十分留意。
　　为了减少溶血剂的毒性，避免含氰化的血红蛋白衍生物检测后的污物处理，近年来，有些血液分析仪使用非氰化溶血剂（如SLS-HB）实验证实，形成的衍生物与HICN吸收光谱相似，实验结果的精确性、正确性达到含有氰化物溶血剂同样水平。既保证了实验质量又避锡了试剂对分析职员的毒性和环境污染。
　　3．各项红细胞指数检测原理：同一手工法一样，MCV、均匀红细胞血红蛋白量（MCH）、均匀红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞体积分布宽度（RDW）均是根据仪器检测，的红细胞数、红细胞比积和血红蛋白量的实验数据，经内存电脑换算出来的。
　　RDW由血液分析仪器丈量后获得，是反映外周血红细胞体积异质性的参数。简言之，是反映红细胞大小不等的客观指标。多数仪器用所测红细胞体积大小的变异系数来表示，即RDW-CV，也有的仪器采用RDW-SD报告方式。
　　红细胞通进小孔的一瞬间，计数电路得到一个相应的大小的脉冲，脉冲的高度是由细胞体积大小决定的，不同大小的脉冲的信号分别贮存在仪器内装计算机的不同通道内，计算出相应的体积及细胞数后，统计处理而得RDw 值。由于RDw 来自十几秒内近万个红细胞的检测数据，不希看可以克服丈量红细胞直径时人为制片因素和主观因素等影响，还较P-J曲线更能直接、客观、及时地反映红细胞大小不等程度，对贫血的诊断有重要意义。RDW的正常参考范围见表2-4。
表2-4 RDW正常参考范围
RDW（<1.64SDX）
报告时间（年）
<48(RCSDW)
81（儿童）
70（成年）
60（老年）
　　*为北京协作组六家医院使用五种型号全自动血细胞分析仪调查2013例成人（男1013例，女1000例）RDW结果。
　　（三）血小板分析原理
　　目前有半自动、全自动两种血细胞分析仪器仪器的红细胞计数微孔旁有一股稳定持续的稀释液流，称扫洗液体。其流向与孔呈直角，使计数后的流体流走，可防止计数后细胞重新进进循环。计算机还可进行一次校正，即对有多个细胞是时经过通道时，只计一个脉冲数情况的校正。校正指数与计数值多少相关。另钉，用一个脉冲编排器消除中心轴外的颗粒计数及检测各种细胞经小孔时引起的电阻变化，脉冲经数学化后，数字被送到记忆线路全程，储存于体积通道中，形成直方图。血小板计数储存于64道直方图范围为2-20fl。不同仪器血小板直方图的范围不一。均匀血小板体积就是此平整曲线所含的群体算术均匀体积，所以MPV也就是PLT大小分布直方图的产物。为了使血小板更正确，有些仪器专门设置了增加血小板正确性的技术，如鞘流技术、浮动界标、拟合曲线等。
　　 二、血细胞分析仪检测参数的临床意义
　　（一）细胞直方图的应用
　　1．白细胞直方图变化的临床意义，前已述及，在进行白细胞计数时，细胞根据体积大小分配在不同计算机通道中，从而得到白细胞体积分布直方图。反之从图形的变化可以会计被测血液中细胞群体的变化。这种变化细胞图形并无特异性。比如中间细胞群可包括大淋巴细胞、原始细胞、幼稚细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，其中任何一类细胞的增多，均可使直方图产生相似变化，只是提示检查者粗略者判定细胞比例变化或有无明显的异常细胞出现，进而在显微镜下检查中留意这些变化或在正凡人体栓中，筛选是否需要进一步作血涂片检查。图2-11显不的是各种血液学异常时，直方畋的变化，可以看出，尽管引起血液学变化的病因不同、细胞形态变化不同，但直方图型很相似，说明白细胞直方图形变化并无特异性。
图2-11 不同疾病白细胞分布直方图
　　图中横坐标为细胞体积，纵坐标为细胞相对数目，玄色区域是正常细胞分布图
　　（a）来自末梢血淋巴细胞增多（其中大颗粒淋巴细胞占42％）（b）为急性非淋巴细胞性白血病（M2）（其中幼稚细胞占72％）的图形（c）为急性淋巴细胞白血病（L2）（幼稚细胞63％）的图形
　　另外，白细胞直方图的变化也可反映某些人为的或现变化扰白细胞计数和分类计数的情况，比如外周血出现有核红细胞或巨大血小板，采血时由于技术大兵在造成血小板聚集或某些病理因素使红细胞膜对溶血剂有抵抗作用，使红细胞溶血不完全，以至测检标本中大量红细胞膜碎片等情况，均可使白细胞直方图在50fl以下区域出现一个或大或的小峰。因此当实验结果出现这种图形时，提示白细胞计数和分类计数均不正确，需在采取相应的手段进一步检测。
　　2．红细胞体积直方图的临床意义：与白细胞直方务图意义不同，某些贫血红细胞体积直方图的其特点，此种图形变化再结合其它参数进行分析，对鉴别诊断颇有价值。分析时，要留意观察图形的位置，峰底的宽度、峰顶的形态及有无双峰出象。
　　下面先容几种贫血时图形变化：
　　（1）缺铁性贫血的直方图（2-12A）：其特点为曲线波峰左移，峰底变宽，显示小细胞不均一性。
　　（2）轻型β-血红蛋白合成障碍（β-珠蛋白障碍性贫血）的直方图图形表现为小峰左移，峰底变窄，典型的小细胞均一性贫血。
　　（3）铁粒幼细胞性贫血的直方图显示红细胞呈典型的&#8220;双形&#8221;性改变（即同时存在着两类型的红细胞，一种是低色素红细胞，另一种是正常形态的红细胞）多见于铁粒幼细胞性贫血。在缺铁性贫血经治疗有效时，也可出现类似的图形，但峰底要更宽些。
　　（4）顺酸缺乏引起的巨连续剧细胞性贫血治疗前与治疗后的直方图治疗前直方图波峰右移，峰底增宽，显示明显的大细胞不均一性，是叶酸或维生素B12缺乏引起巨连续剧细胞性贫血的重要直方图特征。给予叶酸或维生素B12后，幼稚细胞分化成熟正常，正常红细胞逐步开释进血液，而病理细胞并完全消亡，检测时即再出现双峰形，说明治疗有效。
　　应该指出，不同型号仪器其特点及使用稀释液不同，红细胞直方图的形态亦异常，但反映病理变化基本特征是相同的，不同实验室应根据本室仪器的图形进行对比分析。
　　3．血小板直方图的变化：血小板丈量结果是根据血小板直方图得出的，微机根据直方图形态，绘出拟合曲线，决定大血小板数目的补偿并计算MPV、PCT、PSW各项参数。当测标本中小细胞增多或出现细胞碎片或血小板凝聚时影响实验结果，血小板体积直方图均能反映这些变化。因此在发出血小板报告之前，首先要观察其图形是否正常，如为异常的图形（见图2-13），均为检查血液是整流器有血小板凝聚，必要时作血涂片检查是否有小红细胞或大血小板增多现象。
图2-12 不同类型贫血红细胞体积分布直方图（图中横会标是细胞体积（fl），纵坐标代表红细胞相对数目。玄色区域是正常图形）（A）缺铁性贫血图形（B）轻型珠蛋白天生障碍性贫血（C）铁粒幼细胞贫血图形（D）、（E）治疗前后巨幼细胞性贫血图形
图2-13 不同情况血小板体积直方图图中横坐标为血小板体积（fl）纵坐标代表血小板相对数目，玄色区域是正常图形（a）标本中含有大量红细胞碎片引起图形变化（b）标本中有多数血小板聚集（c）由于标本中小红细胞增多所致
　　（二）RDW的临床意义
　　1．鉴别缺铁性贫血和β-珠蛋白天生障碍性贫血，由于Hb合成障碍，缺铁性贫血和轻型β-珠蛋白天生障碍性性贫血均可表现为小细胞低色素性贫血，但前者红细胞形态明显小于不等，后者形态大小较为均一。Bassman曾分析了两类贫血患者的RDW变化，发出53例缺铁性贫血RDW全部增高（异常率为100%），而44例轻型β-珠蛋白天生障碍性贫血中38例中RDW正常（正常率为88%）他以为RDW可作为此两类贫血筛选及鉴别指标。
　　2．诊断向导铁性贫血：鉴于95%以上的缺铁性贫血的RDW均异常，一般以为，假如患者血液检查表现为小细胞低色素性贫血而RDW正常，此类病人患缺铁性贫血的可能性不大。
　　3．进行贫血的新形态学分类（MCV/RDW分类）根据不同病因引起的贫血的红细胞形态特点不同，Bassman（1983）观察各种贫血红细胞参数变化，提出了MCV、RDW贫血分类法（见表2-5）将其分成六类。实践症明：这种分类方法更能反映贫血的病理变化对贫血的鉴别诊断有一定参考价值。
表2-5 MCV、RDW 贫血分类法
小细胞均一性
小细胞不均一性
正细胞均一性
正细胞不均一性
大细胞均一性
大细胞不均一性
　　（三）血小板丈量参数的临床意义
　　1．涸小板各项参数的正常参考范围：有文献报道国内2013例正凡人成人血小板计数参考范围大致为（100-300）&#215;109/L，而MPV和参考值并非一个同一的范围。Bassmen丈量683例年龄为20-34岁正凡人积存小板数和MPV值，发现人种及性别间无显明差异，但MPV的正常范围地随群体中不同血小板数目而变化的，根据检测结果设计了一个关于血小板数和血小板体积的列线图（见图2-14），用于分别估计每个人的结果是否异常。
图2-14 血小板数与MPV的关系
　　2．血小板各项参考测定的临床意义
　　（1）血小板计数的临床意义：见第三章
　　（2）MPV变化的临床意义：各种疾病PLT 与MPV可出现以下几外方面结果：1）血小板数低而MPV增升高：骨髓自身正常，但外周血血小板破坏增多造成血小板降低的刺激后反应性增生时，巨核细胞DNA倍体数及细胞大小都增加， MPV也增高。由于骨髓受抑制而造成血小板减少的病人在恢复初期MPV也升高，这主要因外周血血小板数减低应激性地致使巨核细胞倍体数增加所致。
　　2）血小板数高、MPV正常：骨髓增生性疾病如血小板增多，红细胞增多但MPV正常。
　　3）血小板数与MPV值均下降：AIDs （艾滋病）病毒直接影响巨核细胞并导致血小板减少。大约2/3的病人血小板数降低，92%的病人MPV值下降，与骨髓受抑时的血小板状态相似。患发育不良性贫血的病人积存小板数通常都降低，其MPV值也低，但 PDW升高。当骨髓纤维化或被脉冲瘤细胞浸润危及正常造血时，血小板数减少，随即MPV值也降低。再生障碍性贫血，骨髓瘤或白血病化疗后，败血症所致血小板沽少等骨髓受抑性疾病中，固然仍可能有一些大血小板，但血小板的均匀体积减小。
　　4）MPVE值与血小板数都升高：反应性血小板增多症病人中，其MPV值升高，因血液的流失和本内损伤造成的急性大失血都可使血小板值上升。
　　5） MPV值升高而血小板正常：慢性髓细胞性白血病、骨髓纤维化、脾切除均可周到MPV升高，慢性髓细胞性白血病和骨髓纤维化主要使骨髓增生异常，两种疾病中，血小板体积经常增大并大小不均。外周血涂片中可出现大血小板。半数α-型和β-型珠蛋白天生障碍性贫血的患者有4种明显的血液学改变；血小板大小改变、红细胞大小改变、肝珠蛋白改变和对疟原虫抵抗力改变。其MPV值增高而血小板数正常。
　　另外，由于MPV先于 PLT变化，因此，可用于观察病情变化。白血病化疗时，MPV上升是 BM恢复的第一特征。在感染时 Lelie等以为，局部炎症的 MPV正常而败血症中则一半病人有MPV增加；并以为 MPV持续低时，说明存在感染未控制而继续抑 PLT抑天生，如MPV随 PLT数持续下降则为骨髓衰竭的特征。 MPV越小越严重，直到 MPV上升，PLT数才恢复。 Elder逐日检测 MPV并观察结果，以了解出血性素质病人的变化，发现有出血倾向者MPV明显低于无出血倾向者，即使严重 PLT下降者，如 MPV>6.4fl，出血发生率也低。Thompson研究结果表明MPV与PLT体外功能之间明显相关，对佼原和凝血酶诱导的PLT聚集，其速度信程度随MPV增加而增加。
　　三、方法学评价
　　白细胞计数及分类有两种方法：一种是显微目视法，一种是血液分析仪方法。显微镜法是基础，血细胞分析仪在要根据显微镜法正确计数结果进行校正后方能使用，但这种计数不同于常规工作进行的白细胞计数，根据统计学研究白细胞计数结果的总变异系数为：
　　（公式中nb为所见实际数目，nc为用计算盘的次数，np为用吸管的次数）。
　　在一个标本中，只有使用多支吸管，使用多次（个）计数盘，计数细胞数目达到一定程度时，才能避免细胞在计数盘分布的固有误差，计数盘和吸管的系统误差和操纵随机误差的影响，使计数结果接近真值。一般在进行血细胞分析仪校正时，应使用这种方法。但实常规检验中，目视法很难达一上述在求。由于上述各方面误差的影响，白细胞计数的重复性和正确相对较差。经过严格校正的血细胞分析仪，由于计数细胞多，计数的每个步骤都可标准化，便于质量控制（特别是全自动血液分析仪），计数的精确性、正确性均较高（CV可在2%以下）。这一点在红细胞计数和血小板计数时也是相似的。
　　仪器法白细胞分类有两大类：一类是电阻抗法，这类仪器是根据溶血剂作用后的白细胞大小，人为地分成几个部分，显然这种分类是不够正确的。另一类是利物用各种高科技技术联合对同一白细胞的体积、细胞核外形及胞质中颗粒进行检测，综合分析后，进行细胞分类。这种多方位检测分类法，可较正确地进行白细胞分类，但仍不能正确地检查白细胞形态的病理变化，特别是对幼稚白细胞的检测。因此必须夸大，仪器法白细胞分类计数，只能提供正常血液标本（血红蛋白、白细胞数、血小板数均正常）中各种白细胞数目的大致分布情况或为常规工作进一步镜检提供筛选的信息，而决定不能完全代替油浸显微镜下进行的白细胞分灯检查，另外由于目视法与仪器法实验方法的不同，且全自动力血液分析仪多使用静脉血检测，仪器法测定值的参考范围与传统使用的目视法的参考值有所差异，表2-6是近年来国内外文献先容的静脉血全自动血细胞公析仪的正常参考范围。
表2-6（1） 血细胞分析仪检测静脉血各项参数胡考值
WBC（109/L）
WCHC（g/l）
RDW（%）PLT（109/L）
（台湾1993）
28.2～34.7
26.4～34.3
31.8～36.4
31.3～36.1
Williams(纽约1995)
27.5～33.5
丛玉隆等（北京1996）
3.48～9.48
27.2～34.3
10.9～15.398.7～302.9
表2-6（2） 血细胞分析仪检测静脉血各项参数参考值 [续表（1）]
RBC（1012/L）
0.40～0.51
0.345～0.44
0.42～0.50
0.36～0.45
3.77～5.17
0.40～0.517
0.367～0.467
0.437～0.583
　　1）摘自：周子秋主编，实用临床检查，1993　　2）摘自：Williams 主编，hematology，第15版，1995　　3）摘自：北京市成人静脉血正常参考值调查，中华医学检验杂志，1996（3）　　4）摘自：Bassmen主编， Automateb Blooc Blood Countw and Differentials，1986
　　固然血液分析仪进步了实验结果的精确性和正确性，但先进的仪器应用，必须有一套全面质量治理措施，性质在有高素质的技术职员。这方面包括：
　　1．操纵职员上岗前的培训
　　（1）上岗前在接受良好的培训。要对仪器的原理、操纵规程、使用留意事项、异常报警的含义、引起实验误差的因素及如何维护要有充分的了解，把握ICSH推荐的标准方法校正仪器的每一个测试参数的程序。
　　（2）留意在分析前、中、后每一步的质量控制，留意病人生理或病理因素给实验造成的误差或服用药物的干扰作用。随时监控仪器的工作状态，留意工作环境的电压变化和磁场、声的干扰。根据质控图的变化及时进行仪器的调试，测试后要根据临床诊断、直方图变化、各项参数的关系，确认无误后方能发出报告。
　　2．仪器的鉴定：新仪器安装后，或每次维修后，必须对仪器的技术性能进行测试和评价，这对保证检验质理将起到重要作用。ICSH公布了对电子血球计数仪的评价方案。在细胞计数和血红蛋白测定方面在鉴定仪器测试杯本的总变异、携带污染率、线性范围、可比性和正确性。一般而言，白细胞计数总变异在3%以睛，携带污染率小于2%，线性范围较宽，重复性小于3%时，可满足临床测试需在。在电阻抗法白细胞分类部分应留意细胞分类结果的重复性，与显微镜检查的相关程度及能否在直方图显示血液中存在一定数目异常细胞等。
　　3．仪器的校正：仪器经鉴定全格且，需要进一步校正，校正方法根据不同仪器的要求进行。校正时最好使用经参考（此仪器已用国际参考方法校正）标定的新鲜血液。在无参考仪器的单位，应用严格手工法得出各项参数值后，进行仪器校正。
　　4．标本的采集和运送：全自动血细胞分析仪一般在求用抗凝的静脉血，尽可能不用皮肤穿刺采血，由于不同部位皮肤穿刺血的细胞成分和细胞与血浆的比例常不一致与静脉血的差别则更大，从技术角度讲，毛细管采血时较少，特别对一些全自动的仪器，不易采到足够量血，更不能在有疑问时重复检查。因此除少数不易取得静脉血，如婴儿、大面积烧伤及某些需要经党采血检查的病例（如血液病、肿瘤化疗等）外，均就用静脉血做实验。使用半自动血液分析仪时也可用手指血进行。
　　上述抗凝血在室湿下，WBC、RBC、PLT可稳定24h，白细胞分类可稳定6-8h，血红蛋白可稳定数日。但镜下白细胞分类，2小时后粒细胞形态即有变化，故需作镜检下分类者，应及早推制血片。固然40C条件可延长血液贮存期，但血小板不宜在低温下贮存，因会影响PLt MPV值，故如不能及时检查时，血液应在室温保存。
　　5．操纵有员在分析中应留意的几个题目
　　（1）测试时试剂的温度对结果的影响：血液分析仪细胞计数最适温度为18-220C，低于150C，高于300C抱歉对结果有影响。其原因可能是由于温度不同，致使细胞体积发生变化，而影响体积的丈量，进而改变细胞粘度分布曲线，影响细胞计数。
　　（2）溶血剂的用量及溶血时间，对血小板、白细胞计数影响：全自动俯器由于在机内自动加溶血剂并定时检测可避免其影响，但使用半自动仪器进行血细胞计数时，是要血液预稀释后加进溶血剂，溶血后进行血细胞计数和分类计数，因此溶血剂量及溶血的时间至关重要。加溶血剂的量不同或加后放置时间过短，以致使溶血不完全；或放置时间太久使白细胞明显变形（阻抗法仪器分类是以白细胞体积作为分群依据的，加溶血剂后白细胞膜溶解，胞质大部分溢出，整个细胞体积缩小，仅留下核和部分颗粒），均可导致计数误差，甚至用仪器不能进行分群计数。
　　（3）仪器的半堵孔现象：根据检测器上微孔堵塞的程度，通常将其分为完全堵孔和不完全堵孔两种。如发生完全堵孔，血细胞不能通过微孔计数，也不显示结果，有的仪器还同时在屏幕上显示clog，所以完全堵孔很轻易判定。不完全堵孔主要通过下述方法判定：①观察计数时间；②观察示波动器波形；③看计数批示灯闪动，如该灯闪动无规律常是不完全堵孔表现。
　　（4）病理因素对血液分析仪使用的影响：①由于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、转移癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有冷球蛋白，或骨髓瘤、癌症、白血病、妊娠、血栓疾病、溏尿病病人血中存在有冷纤维蛋白等，均可导致血液中某些物质凝集，致使血细胞计数增高。此时将稀释标本放在370C水浴10分钟后立即计数可消除此影响；②血液中白细胞明显增高而影响红细胞计数划有核红细胞出现而影响白细胞计数；③低色素必贫血或红细胞内含大量sHb或HbCO而抵抗溶血剂作用时，红细胞溶解不完全；④某些新生儿或某些肝病病人红细胞膜质类异常，抗溶血剂作用，导致红细胞溶血剂不完全；⑤多发性骨髓瘤的M蛋白增多时，Ph低的情况下，M蛋白可与溶血剂发生反应而使结果偏高；⑥各种病顺引起的血栓前状态使血小板易于聚集，机时影响结果。
　　6．分析后留意事项
　　（1）根据直方图及参考数变化确定计数结果是否正确及是否需要显微镜检查：前已述及，标本中出现小的凝块或血小板聚集时可影响白细胞、红细胞及血小板计数。这些影响可在直方图中显示出来，因此在发生白细胞分灯的结果吸是在正凡人体格检查世界形势血液检查务项参数均正常时，作为白细胞分类的参考。
　　（2）分析实验结果各参数之间的关系：实验结果的各项的胡数之间有内在联系，比如RBC、HCT（红细胞压积）与MCV；HB、RBC与MCH之间，又如RDW与涂片的红细胞形态变化之间，都有明显的相关关系。加外还可以分析实验结果与临床资料的相关关系，相关检查对于实验中出现的未预料的结果，是否可以从临床角度加以解释，或是否与其它实验有关的分析均十妥重要，例如Hb值过高或过低，是否可用输血、大量失水或出血、溶血来解释。此外，MCHC的高或低与瑞特染色的血片上红细胞中血红蛋白量情况是否一致；白细胞与血小板计数值是否与血片上白细胞、血小板公布情况相一致等相互参照，对保证质量均有重要价值。
　　（3）定期征求临床医护职员对本室结果的评价：临床医生对实验结果的评价也是质理控制的重要环节，临床医生最熟悉病人的病情变化和疾病的发展过程，实验数据是否符合临床也是衡量结果正确与否的重要依据之一，因此，实验室要经常定期听取临床医生的意见，以精益求精实验室的工作。
　　 四、血细胞分析仪应用进展
　　随着高技术的引用和基础医学的发展，各种类型的血液分析仪相继问世。其进展主要表现在以下几方面：
　　（一）仪器测试原理的改进
　　这些仪器主要体现在白细胞分类部分的改进，即电阻抗法的三分群发展为多项技术联合同时检测一个细胞，综合分格实验数据，得出的较为正确的白细胞分群结果。迄今，世界上应用的这类仪器主要有以下四种类型。
　　1．容量、电导、光散射（VCS）白细胞分类法VCS(volume conductivity lightscantter)技术可使血细胞在未经任何处理，与体内形态完全相同的自然状态下得出检测结果。首先在标本内中进只作用于红细胞的溶血剂使红细胞溶解，然后加进抗溶血剂，起中和前述溶血剂的作用，使白细胞表面、胞质及细胞大小等特征仍然保持与体内时间相同的状态。
　　根据流体力学的原理使用鞘流技术使溶血后液体内剩余的白细胞单个通过检测器，VCS三种技术的同时检测，体积的丈量使用的是电阻抗原理。电导性是根据细胞壁能产生高频电流的性能，采用高频电磁探针丈量细胞内部结构 &#8212; 细胞核、细胞质的比例，细胞骨的化学成分，以此来帮助鉴别细胞。因此电导性可辨别体积完全相同的而性质量同的两个细胞群。如小淋巴细胞和嗜酸性粒细胞两者直径均为9-12μm，当前高频电流通过这两种细胞时，由于他们的核与胞质比例不同，而呈现出不同的信号，借此可把他们区分开来，光散射（scatter,S）是除了体积和电导性以外，又从细胞表面光散射的特点提供细胞类型的鉴别方式，来自激光光源的单色光束直接进进计数池的敏感区，在100-700时对每一个细胞进行扫描分析，提供细胞结构、形态的光散射信息。光散射特别具有对细胞颗粒的构型和颗粒质量的区别能力。细胞粗颗粒挑散射要双细颗粒更强，所以通过光散射可帮助仪器将粒细胞分开。
　　根据以上三种方法检测的数据，经计算机处理得出细胞分布图（图示-15）进而计算出实验结果。图中各圈内的范围均代表正常细胞和异常细胞在图中可能出现的位置，数字代表细胞的类型。
图2-15 VCS法细胞分布图1．幼稚细胞　2．杆状核粒细胞3．单核细胞　4．单核细胞或淋巴细胞5．淋巴细胞　6．变异淋巴细胞7．小型非典型淋巴细胞　8．有核红细胞9．巨大血小板　10．血小板凝块
　　2．阻抗与射频技术联合的白细胞分类法这尖仪器白细胞计数通过四个不同检测系统完成。
　　（1）嗜酸性粒细胞检测系统：血液进进仪器后，经分血器使血液与嗜酸性粒细胞特异计数的溶血的剂混合，由于其特殊的PH，使除嗜酸性粒细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整的嗜酸性粒细胞液体的通过小孔时，使计数电路产生脉冲而被子计数。
　　（2）嗜三性粒细胞检测系统：计数原理与嗜酸性粒细胞相同，由于碱性溶血剂只能保存与血液中嗜碱性的粒细胞，因此根据脉冲的多少即可求得嗜碱性粒细胞数。上述二种方法除需要使用专一的溶血剂外，还需特定的作用温度和时间。
　　（3）淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性性）的检测系统：这个系统采用电阻与射频联合检测的方式。使用的溶血剂的作用较轻溶血剂穿透细胞膜时仅使少量的胞质溢出，对核的皱缩作用也较稍微，细胞形态改变不大。在小孔的内外电级上存有直流和高频两个放射器，在小孔四周存在直流电及射频两小及颗粒的多少。因此细胞进进小孔时产生两个不同的脉冲信号，脉站的高低分别代表细胞的大小和核及颗粒的密度，以DC信号为横丛标，RF为纵坐标，就可根据2个信号把同一个细胞定位于二维的细胞散射图上。由于淋巴细胞、单核细胞及粒细胞的细胞大小、细胞质含量，胞质内颗粒的大小与密度、细胞核的形态与密度不同，DC及EF的脉冲信号有较大的差异，定位在各自散射的区域，通过扫描技术得出各类细胞比例（见图2-16）。
图2-16 电阻抗与射频联合检测白细胞分布图
　　（4）幼稚细胞检测系统：此胞膜上脂质较成熟细胞少的现象，在细胞悬液加进硫化氨基酸后，由于细胞上脂质占位不同，故结合在幼稚细胞的硫化氨基酸较成熟的细胞多，且对溶血剂有抵抗作用。当加进溶血剂后，成熟细胞被溶解，假如悬液中存在细胞细胞，其形态不受契约坏，因此可通过电阻抗的方法检测出来。（图2-17）。
图2-17电阻抗与射频联合检测白细胞、幼稚细胞、屏幕细胞分布图
　　3．光散射与细胞化学技术联合应用于白细胞分类计数：联合应用激光射的过氧化物酶染色技术来进行白细胞分类计数。嗜酸性粒细胞有很强的过氧化物酶活性，中性粒细胞有较强的过氧化物酶活性，单细胞资助之，而淋巴细胞和嗜碱性粒细胞均无此酶。将血兴高采烈经过氧化物酶染色后，胞质内即可出现不同的酶化学反应，由此构成了此种血液分析仪的分析基础，化妆品的分血器将血加进到含有清洗剂和甲醛的高渗液体内（21倍稀释）并孵育（400～700）20秒钟。其中清洗剂（含有非离子表面活性剂）使细胞破坏，甲醛使白细胞质内酶被固定，此后发生第二步反应，即加进过氧化氢和4氯=蔡酚，并加热13秒，此时假如待测细胞质中含有过氧化酶即可分解H2O2产生[O]，后者可使4氯-蔡酚显色并沉积定位于酶反应部位，此类细胞通过测试区时，由于酶反应强度不同（阴性、弱阳性、强阳性）和细胞体大小不同，激光束射互细胞上的前向角和散射角有所不同，以X轴为吸光率标记（酶反应强度），Y轴为光散射（细胞大小）。每个细胞产生的两个信号结合定位在细胞图上（图2-18）。每秒钟仪器可测上千个细胞。计算机系统对存储的资料进行分析处理，并结合嗜好碱性粒细胞或分叶核粒细胞通道结果计算出白细胞总参数和分类良数。
图2-18 激光与细胞化学联合检测白细胞直方示意图
　　4．多角度偏振光散射白细胞分类技术（multi &#8212; Angle polatised scatter separation of white cell,MAPSS）其原理是一定体积的全血标本用鞘流液按适当比例稀释。其白细胞内部结构近似于自然状态，因嗜碱性粒细胞嘌粒具有吸湿的特性，所以嗜碱性粒细胞的结构有稍微改变。红细胞内部的渗透透压高于鞘兴高采烈的渗透压而发生改变，红细胞内的血红蛋白从细胞内游离出来，而鞘液内的水分进进红细胞中，细胞膜的结构仍然完整，但此时的红细胞折炮指数与鞘液的相同，故红细胞不干扰白细胞检测。
　　在水动力系统的作用下，样本被集中为一个直径为30μm的小股液流，该液流将稀释细胞单个排列，因是单个通过激光束，故在各个方向都有其散射光。可以从四个角度测定散射光的密度（见图2-19）：①00：前角光散射（10～30）粗略地测定细胞大小；②100：狭角光散射（70～110）测细胞结构及其复杂性的相对特征；③900：900消偏振光散射（700`～1100），基于颗粒可以将垂直角度的偏振激光消偏振的特性，将嗜酸细胞从中性粒细胞和其它细胞中分离出来。④900：垂直光散射（700～1100）主要对细胞内部颗粒和细胞成分进行丈量。可以从这四个角度同时对个白细胞进行丈量，同一种特定的程序自动储存和分析数据，将白细胞分为嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞5种。
图2-19 MAPSS丈量原理
　　（二）仪器自动化水平的进步
　　80年代以前，血细胞分析仪主动脉要是半自动型。此类仪器需要将标本经机外预稀释后才能检测，惚受干扰，随机误差也很大。随着全自动型仪器不断涌现，血液直接被进血细胞分析仪后的在机内自动稀释、自动加溶血剂、定时检测，进步了仪器的精确度和正确度。
　　最近，&#8220;联合型血液分析系统&#8216;问世，这个系统将先进的血细胞分析仪、涂片机、染色下、网织红细胞仪串联在一起。血液先经血细胞分析仪检测，根据红细胞情况决定是否做网织红计数；根据HCT来改变推片机的角度和速度，以保证血涂片的合格。根据实验数据和直方图的变化，计算机选择是否需要一步显微镜检查。特别是自动加样系统和真空采血管的应用。不但可能避免实验的随机误差，进步工作效率，而且可避免某些实验环节造成的血行感染，对工作职员的劳动保护起以关键作用，成为仪器发展和使用的潮流。
　　（三）各种特殊技术的应用
　　为了保证实验结果的正确，不同仪器使用不同的特殊技术：①为了使细胞计数正确采用&#8220;三次计数&#8220;表决；②采用热敏电阻装置，监测试剂温度；③为了使积存小板计数正确，采用流技术及鞘流；④为同避免小细胞和大血小板干扰血小板计数，采用浮动界标技术；⑤仪器自动保护技术、采用了燃烧电路、管道和过样针的自动清洗及故障碍自检功能；⑥各种方式的质控制资料储存和处理（比如X-B质控法）。这些技术对于质量控制起了关键作用。
　　以上先容了近年来五分类法血细胞分仪白细胞分类的原理及临床应用价值。不丢脸出，由于高科技的应用，使细胞分析更精确、更正确，为临床诊断与治疗提供了重要依据，也大大进步了实验室工作效率。但应指出，各类仪器仍有其不足之处，如不能对单个细胞完全识别，特别是白血病细胞和正常单核细胞、异常不典型淋巴细胞，由于五分类法仪器的白细胞分类只是严格根据筛选标准报告实验结果，必要时仍需以显微镜涂片检查进行复检。
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