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关于透射电镜和扫描电镜等的样品制备分析.ppt 181页
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第五章 透射电子显微镜的  样品制备技术 5.1 TEM对样品的基本要求制备 5.2 TEM样品的制备方法
根据样品的种类、性质和分析要求选用不同的制备方法，有以下三种方法：
支 持 膜 法
法 5.2.1支持膜法 悬浮液、粉体等细小试样需要捞在覆有薄膜的金属载网上。经干燥后进行观察。 具体操作
制作载网的材料大多是铜，因此习惯上将载网称为铜网，不过制作载网的材料还可以是金、银、镍、铝、铂及尼龙。载网的大小随电镜的需要而不同，一般直径为3mm。网孔的形状有圆形、方形、单孔形等，网孔有50、100、200、300及400目等多种规格。常用一般普通组织超薄切片选用200-300目的载网，对于过小的和过碎的样品，可选用400目的载网；对于不易查找的样品，可选用带字母标记的载网。 载网类型
带字母的载网
400目平行载网 载网的数目再高也是有空隙的，为了防止极微小的样品在捞片时漏掉；或切片时在电子束的轰击下卷曲；或为了加强空隙大的载网的支持作用等，需要在载网上覆盖上一层支持膜。制作支持膜所选的材料要求透明、本身在电镜下无可见的结构以及在电子束轰击下有高度的机械稳定性3个基本的条件。 有多种支持膜，较常用的有孚尔瓦膜、碳膜、火棉胶膜等。孚尔瓦膜一般制成20nm左右，它的支持力较强，但制备较复杂。碳膜只需几个纳米厚，它的特点是分辨力高，化学性能稳定，机械强度也高，常用于加固其它膜。火棉胶膜的机械强度较孚尔瓦膜小，但容易制备，所以也较常用。
介绍一下Formvar膜的制法：该膜的化学成分为聚乙烯醇缩甲醛（Polyvinyl formal，简称PVF）。
首先制备02.-0.5%的氯仿（或二氯乙烯）溶液，然后用洗净的干燥的载玻片伸入到该溶液中停留片刻，平稳取出，自然干燥后玻片上形成一层薄膜。
再用刀片沿玻片边缘将膜划破，继将该玻片的一端垂直浸入玻璃平皿的蒸馏水中，待玻片上的薄膜完全漂在水面，把玻片轻轻下压取出。
再将铜网排列在膜上，用滤纸与铜网完全贴附后，用镊子夹住滤纸的一角轻轻将其取出放于培养皿中，待自然干燥后就使用了 。 Formvar支持膜的制备
在使用之前，新网和旧网都需要进行清洗，清洗的目的除了使载网清洁之外，还有除去载网的静电以便捞片的作用。对于新的载网，直接用95％的乙醇浸泡一下，再用重蒸水冲洗后自然晾干即可。旧载网的清洗方法有以下两种： 氯仿法：把旧网放入锥形瓶中，用氯仿浸泡若干天，经常晃动帮助残存的样品从载网上脱落，接着用重蒸水冲洗数次，再用100％乙醇洗一次后，放在垫有滤纸的培养皿中自然晾干。 烧灼法：用95％的乙醇烧灼片刻后放入其中，最后用重蒸水冲洗数次，最后一次用100％乙醇，捞出后自然晾干。 5.2.2 复型法 由于电子束穿透能力很低，因此要求所观察的样品很薄，对于常用的75-200kv加速电压来说，样品厚度控制在100-200nm为宜。对于那些易起变化或难以制成电子束透明的薄膜试样采用复型法制备样品。复型法是用中间媒介物（碳、塑料薄膜）把固体样品表面微观形貌浮雕复制到薄膜上，利用透射电子的质厚衬度效应，通过对浮雕的观察，间接地得到材料表面组织形貌。复型法得到的样品是一种间接试样。
它只能用于试样表面形貌的观察和研究，而不能用来观察试样的内部结构。 对复型材料的主要要求： ①复型材料本身必须是“无结构”或非晶态的； ②有足够的强度和刚度，良好的导电、导热和耐电子束轰击性能。 复型的种类 按复型的制备方法，复型主要分为：
萃取复型（半直接样品）
碳一级复型 （1）用常规方法将试样的表面抛光、腐蚀，其腐蚀深度较一般金相腐蚀略深。断口最好为新鲜断口。 （2）在真空镀膜仪中将试样表面喷镀一层碳膜，厚度控制在10~20nm。 （3）用刀片或针尖将碳膜表面划成3×3mm的小方块。 （4）将试样在专用的电解液中进行电解。当碳膜的边角翘起或有个别碳膜脱落时，取出试样并放到无水乙醇溶液中轻轻晃动，使碳膜脱落。 （5）再用无水乙醇或水将碳膜轻轻漂洗2~3次，再在溶液中停留几分钟，将电解液彻底清除干净。 （6）用铜网捞出晾干即可。
碳一级复型示意图 二级复型 （1）用常规方法将试样表面抛光、腐蚀，其腐蚀深度较一般金相腐蚀略深。 （2）配制好0.5%、1%、2%、5%几种不同浓度的火棉胶醋酸异戊脂溶液。 （3）取0.5%的火棉胶溶液均匀地涂于试样表面，用红外灯烤干，依次用同样的方法将1%、2%或5%的火棉胶溶液涂于试样表面，并烤干。 （4）用透明胶带紧
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&&多孔的水凝胶材料培养细胞后能否拍细胞在材料上的SEM
多孔的水凝胶材料培养细胞后能否拍细胞在材料上的SEM
我刚做了一个大孔的多孔水凝胶，孔径在1mm左右，想问问大家，这种水凝胶材料是不是不可以拍细胞在材料上的图片？有人说拍前，材料的脱水处理，干燥，会导致固定在材料上的细胞裂掉？所以，想问问大家的水凝胶材料是不是都不能拍细胞与材料共培养的？
虽然是down来的，不过都是自己亲自做过的，效果挺好的！
细胞密度仅供参考，
如果密度过大，看到就是一片细胞，根本看不到材料，
如果要看单个细胞的话，细胞密度建议稀一点较好！
当然，也要根据材料本身对细胞的粘附性来决定！
所以做的时候可以多设几个浓度，摸索一下条件哦！
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生物样品脱水后，为什么要用乙酸异戊酯置换酒精
我有更好的答案
乙酸乙酯的极性较弱,临界点干燥时可以更好的与co2置换,从而更加完整的保持生物样品的表面形态.
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中国海洋鱼类寄生宫脂属线虫蛔总科异尖科分子分类学及研究.pdf 117页
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学位论文原创性声明
本人所提交的学位论文《瓠哟拜搬蜜谁禹鲑生c虫l搪钟辱蜊)务孑感掌研渺，
是在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的原创性成果。除文中已经注明引用的
内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的
研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中标明。
本声明的法律后果由本人承担。
论文作者c签名)．灰Ij＼圈国
幺D侈年y月2f日
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解河北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交
学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北师范大学可以将学
位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制
手段保存、汇编学位论文。
(保密的学位论文在——年解密后适用本授权书)
f多、岁、己l
鱼类寄生线虫的重要类群，也是蛔目线虫中最大的类群之一。宫脂属线虫，尤其幼虫，
可造成鱼类宿主发育不良甚至死亡，是鱼类的重要病原物之一。
本论文以rDNAITS序列为标记序列，运用形态分类与DNA分类相结合的方法
对中国海洋鱼类寄生的宫脂属线虫进行了准确的物种鉴定，其结果如下：
(Houttuyn)(Perciformes：Siganidae)$1黄斑篮子鱼S
longilabrum
Siganidae)体内的长唇宫脂线虫HysterothylaciumLi，Liu&Zhang，20
采自东海海域少牙斑鲆Pseudorhombus
zhoushanensis
Paralichthyidae)体内的舟山宫脂线虫H
海海域花鲈Lateolabrax
宫脂线虫Hsimile
Li，Zhang&Liu，2012。此外，分别对长唇宫脂线虫Hlongilabrum
和舟山宫脂线虫H
的ITS序列进行比较分析，从分子水平证明了这2个新种的有效性。
2)发现报道宫脂属线虫中国新纪录种2种，分别为采自南海海域长尾大眼鲷
PriacanthUSRichardson和短尾大眼鲷PmacracanthUS
thalassini
Priacanthidae)体内的萨氏宫脂线虫H
thalassini和旗鱼宫脂线虫H
&Cannon，1989)。并且首次通过对萨氏宫脂线虫H
分子水平证明了这2个物种的有效性。
herzensteini
paralichthydis
海域不同鱼类宿主体内的内弯宫脂线虫尾乳突的形态学变异进行了比较和讨论。
4)通过对幼虫与成虫的ITS序列进行分析比较，首次准确鉴定了长唇宫脂线虫
zhoushanens括的三期和四期幼虫，并对其形态进行
longilabrum和舟山宫脂线虫H
此外，作者通过对相关宫脂属分类文献的整理，还编写了世界宫脂属线虫物种名
录，列出已报道宫脂属线虫82种。
关键词：海洋鱼类蛔目 宫脂属ITS序列DNA分类
917isoneofthe
HysterothylaciumWard&Magath．1 largestgroups family
AnisakidaeintheorderA
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