真菌培养基配方真菌感染是絮状物 还是浑浊

& 80株深部真菌感染阳性血培养及药敏结果分析
80株深部真菌感染阳性血培养及药敏结果分析
摘 要:目的:分析80株血培养真菌阳性标本及其药敏结果,寻找深部真菌感染特点。方法:血培养使用Back/Alert血培养仪。分离使用科玛嘉培养基,真菌和细菌鉴定使用Vitek AMS-60微生物分析仪,药敏使
【题 名】80株深部真菌感染阳性血培养及药敏结果分析
【作 者】张正 王贺 等
【机 构】北京大学人民医院检验科,北京100044
【刊 名】《临床检验杂志》 2002年第20卷第5期,276-278页
【关键词】真菌 血培养 药敏实验 院内感染
【文 摘】目的:分析80株血培养真菌阳性标本及其药敏结果,寻找深部真菌感染特点。方法:血培养使用Back/Alert血培养仪。分离使用科玛嘉培养基,真菌和细菌鉴定使用Vitek AMS-60微生物分析仪,药敏使用微量MIC法,HCMV检验使用PCR和RT-PCR方法。结果:80株真菌分布 在4个菌属中,以念珠菌属为主占91.25%,获得阳性结果时间平均31.80h,72h内获得结果者76株占95.0%,对5种真菌作药敏试验,5-氟胞嘧啶敏感率最高(97%),特比奈芬最低(35%),51.25%(41/80)患者从血以外的其他标本获得与血中分离菌种一致的真菌,80例患者中46例伴随有细菌或病毒感染,占患者57.50%,真菌感染多见于免疫功能低下者,本组80例患者中各种肿瘤69例(86.25%),结论:血培养阳性是患者深部真菌感染的确证依据,多为在免疫功能低下者发生的院内感染,多系统真菌感染多为临床致死原因,真菌药敏实验结果给临床治疗提供了有参考价值的信息。
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真菌,血培养,药敏实验,院内感染
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【求助】培养基出现白色絮状沉淀是怎么回事
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老师从北京拿回来的卵巢癌细胞,当时细胞是在培养瓶里,灌满了培养基后带回来的。显微镜底下观察细胞差不多快长满了,于是倒掉一部分培养基留下约5ml继续培养,细胞长得很好,次日冻存传代,此时用的培养基是老师一起从北京带回来的配置好的DMEM+10%FBS+双抗的培养基,结果两天之后细胞全部染菌了。后来发现老师带回来的培养基有白色絮状沉淀。这是培养基染菌了还是怎么回事呢?自己用0.22um的滤器过滤了一部分培养基,取之前冻存的细胞重新复苏,但五天之后细胞又染菌了,细胞长得比较慢,中间换过一次液。这到底是怎么回事呢 ?是因为培养基过滤了也不能用了吗?还是因为冻存液是没有过滤过的,所以导致复苏的细胞中也是夹杂了细菌的?谢谢大家的指点帮助,不胜感激。
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dandelion128 出现白色沉淀是污染了,我之前也出现过这种情况,培养的细胞出现白色沉淀,换液之后就好了,但是第二天又有了,再过几天就彻底变浑浊了。估计在冻存之前你的细胞就已经污染了,只是还不太严重,所以没显示出变化,所以你之后复苏的细胞也是污染的。你可以尝试复苏的时候加大剂量抗生素(平时的10倍),不过刚复苏的细胞比较脆弱,可能会有损伤,但是事已至此就把死马当活马医吧,没准有一线希望。我取了几毫升培养基在无菌的离心管里,置于培养箱中,大概有一个星期了,培养基是没有浑浊的,但是白色絮状物还在。这也是污染了吗?
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reyesa 染菌了之后过滤也不能用了只要菌长起来了,就不容易挽回了如果培液染菌就全部扔掉,重新配。再复苏一次,如果还染菌那应该就是冻存的细胞本身就染菌了老师的细胞只剩下一株了。。。我都害怕不敢复苏了。。我取了几毫升培养基在无菌的离心管里,放在培养箱中大概有一个星期了,培养基是没有浑浊的,但白色絮状物还在,这也是染菌了吗?重新配置培养基时,如果担心血清分装时有细菌,可以拿0.22微米的滤器过滤吗?谢谢您的解答,不胜感激。
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dandelion128 出现白色沉淀是污染了,我之前也出现过这种情况,培养的细胞出现白色沉淀,换液之后就好了,但是第二天又有了,再过几天就彻底变浑浊了。估计在冻存之前你的细胞就已经污染了,只是还不太严重,所以没显示出变化,所以你之后复苏的细胞也是污染的。你可以尝试复苏的时候加大剂量抗生素(平时的10倍),不过刚复苏的细胞比较脆弱,可能会有损伤,但是事已至此就把死马当活马医吧,没准有一线希望。谢谢您的解答。要是冻存的细胞已经污染了,那我就悲催了,老师千里迢迢拿回来的细胞。。。
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张小雅yy 絮状的?我倒觉得有点像血清质量不好,反复冻融出现的现象嗯,有可能是吧,因为我取培养基在无菌的离心管中,放在培养箱中几天,是没有浑浊的。O(∩_∩)O谢谢
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dandelion128 你说的是你带细胞回来用的培养基还是之后培养细胞用的?不是带细胞回来时培养瓶里的培养基,是之后培养细胞的培养基
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lijiamei 可能是培养基污染了,很可能是带回的细胞就已经污染了,冻存的时候也就有污染啦,即使你过滤除菌也没办法救治,再或者如果当时没污染,你过滤除菌有可能细菌除掉了但同时损失了血清,用没有血清的培养基也会长得很慢谢谢你,O(∩_∩)O~。想问一下血清不能用滤膜过滤吗?
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dandelion128 问:在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀,加热后溶解。它是什么?对我的细胞有害吗?
答: 可能是谷氨酰胺沉淀,但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的浓度比在RPMI 1640中高25倍,而且比谷氨酰胺更加难以溶解。沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解,对实验不会有不利的影响。 谢谢你,又长知识了
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experiment 这种情况肯定要先看你细胞培养后的状态,如果细胞已经由贴壁变悬浮或不同形状类似细菌的棒球状、丝状颗粒,那毫不疑问是细胞污染。具体污染原因肯定就要分析细胞本身是否污染,还是使用的源头试剂、耗材,还是因个人操作不当造成的后期污染。就你说的培养里沉淀是不是染菌了,是不是他造成的细胞后期污染,其实解决方法很简单,如果实验室有条件,就拿细菌和真菌及支原体常用培养基接种少量含沉淀的培养基正常环境培养1-2天后看结果,那样哪种污染也比较直观了。最简单就是取少量含沉淀的培养基进行实验室内一组正常细胞的培养,24-48小时候后看结果!如果那细胞也死了,那ok绝对是培养基污染了。建议加入血清后尽快使用避免高蛋白反复室温存放造成的蛋白讲解而生成的絮状!细胞污染的原因很多,需一步步仔细分析,关键是源头和操作一定要谨慎,祝实验顺利!分析的好详细,谢谢你,O(∩_∩)O~后来实验就先停掉了没做,准备开始接着做,培养箱,洁净室都要重新消毒灭菌还有实验用到的一切,操作上自己也在思考有没有别的问题。谢谢
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培养基出现白色絮状物是怎么回事?
老师从北京拿回来的卵巢癌细胞,当时细胞是在培养瓶里,灌满了培养基后带回来的。显微镜底下观察细胞差不多快长满了,于是倒掉一部分培养基留下约5ml继续培养,细胞长得很好,次日冻存传代,此时用的培养基是老师一起从北京带回来的配置好的DMEM+10%FBS+双抗的培养基,结果两天之后细胞全部染菌了。后来发现老师带回来的培养基有白色絮状沉淀。这是培养基染菌了还是怎么回事呢?自己用0.22um的滤器过滤了一部分培养基,取之前冻存的细胞重新复苏,但五天之后细胞又染菌了,细胞长得比较慢,中间换过一次液。这到底是怎么回事呢 ?是因为培养基过滤了也不能用了吗?还是因为冻存液是没有过滤过的,所以导致复苏的细胞中也是夹杂了细菌的?谢谢大家的指点帮助,不胜感激。
我取了几毫升培养基在无菌的离心管里,置于培养箱中,大概有一个星期了,培养基是没有浑浊的,但是白色絮状物还在。
前四天细胞生长的是很缓慢,状态变化也不大,但第五天的时候就发现培养瓶里的培养基变浑浊了,中间换过一下液,我的操作应该是没有问题的
我也在找原因,不知道。。。
照片里白色絮状物看不清。这些东西是沉在瓶底的,稍稍摇晃才能发现。
将絮状打碎滴玻片在镜下观察,如果是真菌应该能很明显看到的,菌丝什么的很明显
嗯,谢谢,我去试试。
我刚刚看到另外一个帖子里有人写道“真菌污染的情况下,真菌可以和细胞共生的,各长各的”,这个是真的吗。。?谢谢。。我实在是很着急了,细胞实验没做多长时间,自己也不是太熟悉,更不想浪费了老师的细胞:)
这个不太清楚,但如果有菌的话这细胞你怎么能用呢?如果染菌不是很严重,你上Sigma查询一种可以抗真菌的药物,据说原代细胞培养时候可以加这个抗生素,但是对细胞可能会有一定影响
如果真是真菌感染,不建议继续培养了,因为很容易造成细胞间污染的,一旦扩散很难去除阿...
今天晚上又看了一下,细胞状态变化还是很大的。。
今天晚上滴玻片在镜下看了,但是没看到菌丝
真菌污染的话只是短期内和细胞共生,时间长了细胞一样会状态不好死掉的
而且和真菌共生的细胞做出来的实验结果你觉得有说服力吗?
嗯,照这样看来我的细胞应该是被真菌污染了,因为前几天是没事的。培养瓶里的细胞已经扔掉了,现在要从头开始做了。谢谢你,O(∩_∩)O~
我最近新买了Gibco的RPIM1640的干粉培养基,发现一直不溶,里面总是有白色絮状东西,一摇会消失,静置时又出现,很是烦人,还没找到解决办法,交流交流。
北京学而思教育科技有限公司 地址:北京市海淀区北三环甲18号中鼎大厦A座1层102室 电话:010-&&&&参见附件。&&&&
1.3 培养结果判断
&&&&培养基颜色由红色变为淡黄色判定为阳性,培养基颜色保持不变或未完全变为清亮的黄色判定为阴性,培养基变为浑浊或生有片状、絮状物的黄色判定为无效,如果条件允许应重新取样培养。
&&&&1.4 治疗方法
&&&&标本采集均要求在治疗前由医生进行,初步诊断后采用大环内酯类抗生素进行相应的治疗,并在治疗后进行证实诊断。
&&&&1.5 统计学方法
&&&&采用统计软件SPSS 17.0对实验数据进行分析,计数资料以率表示,采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义
&&&&2 结果
&&&&2.1 不同性别组MP培养阳性率比较
&&&&本组急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本MP培养阳性656例,总阳性率40.49%。男、女比较差异无统计学意义(P >0.05),结果见表1。
&&&&2.2 不同年龄组MP培养阳性率比较
&&&&不同年龄组中,3~14岁组与≤ 2岁组之间MP培养阳性率差异有统计学意义(P < 0.05),结果见表2。
3~14岁组与≤ 2岁组患者MP培养阳性比较
&&&&注:与≤ 2岁组比较,*P < 0.05
&&&&2.3 不同发病季节MP培养阳性率比较
&&&&本组资料研究发现,患儿发病率夏、秋季较冬季低,差异均有统计学意义(均P < 0.05),结果见表3。
不同发病季节MP培养阳性比较
&&&&注:与冬季比较,▲P < 0.05
&&&&3 讨论
&&&&MP是介于病毒、细菌之间的一种微生物,自然界存在广泛,儿童及婴幼儿多数易感,春冬季发病率较高,每隔3~7年会发生一次局部的流行。本病早期单纯通过临床表现不易确诊,主要靠实验室检查[5-6]。除呼吸道感染外,MP尚可通过血行播散或免疫机制引起心肌炎、肾炎、脑炎等多种肺外并发症,严重者甚至危及生命。因MP无细胞壁,所以天然耐受所有β-内酰胺类、甲氧苄啶、磺胺嘧啶等针对病菌细胞壁的抗生素,因此,快速确诊MP感染并及时有效的治疗本病至关重要[7-8]。本研究中笔者使用MP快速鉴定培养基对患者进行咽拭子的检测,在24 h内可取培养结果,在治疗后经证实诊断并进行分析。
&&&&本组资料显示,MP肺炎的发病阳性率高达40.49%,比刘宁[9]研究发现的MP肺炎阳性率19.11%~21.19%要明显增高,究其原因,一是该病发病率呈逐年上升趋势,二是本院临床严格要求在治疗前拟诊,应取标本并及时送检。
&&&&本文调查结果表明,≤ 2岁儿童发病率高于3~14岁组,前者MP阳生率达45.95%。从发病季节来看,春冬季发病率高于夏秋季,1 620例标本中,春季送检标本阳性率45.12%,夏季32.45%,秋季33.68%,冬季44.25%,夏、秋季阳性率与冬季比较,差异均有统计学意义(均P < 0.05)。因此,春冬季节我们更应加强MP的预防,降低感染率,临床医师也应注意鉴别本病。
&&&&对于MP的检测方法,目前MP实验室诊断金标准是支原体分离培养,此外还有形态学检查、抗体检测和分子生物学方法等。分离培养在培养基上见菌落生长即可确诊,但需一周左右时间,且易受其他病菌影响,阳性率相对较低,故多数用在实验室而非在临床上推广。PCR诊断技术目前已得到较好应用,敏感性和特异性高,但其对仪器环境要求较高,仪器相对昂贵,操作繁琐,且存在一定的假阳性,依然不能满足临床快速诊断的需要[10-11]。所以,目前MP感染的实验室诊断仍然主要依靠血清学检测,主要是通过检测血清MP-IgG及IgM抗体来确诊,其操作方便,时间较短,但是采用本法检测到特异性抗体并不能确定为急性感染期,抗体多在临床症状出现后2~4周最高,且受年龄、免疫功能及个体差异等多个因素的影响,故仍不能对MP感染进行早期诊断[12]。相对于婴幼儿进行血清检测难度更大,一是不易抽取血液标本,二是其免疫系统发育未完善,部分患儿本身免疫功能存在低下,即使感染抗体产生也不足,从而影响检出率。
&&&&本研究采用的MP快速鉴定培养基是一种MP选择性的红色液体培养基,其基本原理是培养基中营养充分,MP快速生长增殖,在过程中产生H+使培养基中的pH值降低,则培养基中的指示剂变为黄色[13]。张昊[14]通过MP液体培养法和被动凝集法抗体检测应用比较发现,MP快速液体培养法阳性率为33.06%,被动凝集法抗体阳性率为38.84%,两种方法符合率为54.54%,并认为快速液体培养法具有较高的准确性。但培养基有浑浊一般应重新取样,张善弟等[15]对数例引起浑浊变色的培养基取样进行涂片革兰染色镜检,发现多为口腔内的念珠菌引起,为口腔内正常菌群,因此提示在取咽拭子时应尽量不与口腔接触,还建议在培养基中添加抗真菌制剂来避免其他菌群干扰。
&&&&综上所述,本研究采用的MP快速鉴定培养法,培养时间短,24 h即可确诊,无需特殊仪器设备,仅取咽部分泌物,不采血,操作简便,特异性强,灵敏度高,适合临床呼吸道患儿早期MP感染的诊断和筛查,MP快速鉴定培养是一种较为理想的诊断MP方法。
&&&&[参考文献]
杨维娜,荣保平,梁宝侠,等.西安地区儿童肺炎支原体感染率分析[J].现代检验医学杂志,):128.
张金蓉.小儿肺炎支原体的快速培养鉴定法[J].中国误诊学杂志,2008, 8(16):.
陈恩利.肺炎支原体检测方法的临床应用[J].国际检验医学杂志,):267-268,270.
董燕芬.肺炎支原体检测及临床应用进展[J].国际检验医学杂志,2010, 31(3):269-270.
张云娇.小儿呼吸系统感染后肺炎支原体抗体检测的作用[J].国际检验医学杂志,):923.
庞保军.肺炎支原体实验室检测方法进展及其临床应用[J].临床肺科杂志,):515.
王楠,张国成,刘芳,等.快速培养结合显微镜排除法检测肺炎支原体的研究[J].临床儿科杂志,):758-760,767.
陈远平,黎金凤.1379例儿童肺炎支原体快速培养鉴定结果分析[J].检验医学与临床,):.
刘宁.患儿肺炎支原体、衣原体诊断价值[J] ......
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///文章正文
真菌感染是由什么引起的
养生之道网导读:真菌感染是由什么引起的呢?真菌感染引起的疾病称为真菌病,发病率很高,那么你们知道真菌感染是由什么引起的吗?接下来小编为你介绍真菌感染是由什么引起的。
真菌感染是由什么引起的1、真菌感染引起的一般称为真菌病,发病率最高的和皮肤癣菌病由人体正常菌群的真菌引起,感染可区分为:表面感染,皮肤感染,皮下组织感染,深部感染和条件性感染。2、真菌属于植物界,真菌门。它没有根、茎、叶的结构,因而不能利用无机物进行光合作用,只能营寄生生活或腐生生活。除少数单细胞类群外,真菌大多有分支或不分支的菌丝体,能进行有性或无性繁殖。3、真菌适宜于在潮湿、温暖的环境繁殖;在有氧、温度合适、且有一定湿度的条件下,空气中飘散的真菌增多。所以真菌变态反应的发生,也有地区性和季节性的特征。一般在夏季,特别是霉雨季节,真菌变态反应的发病增多。但是它的地区性和季节性特征不像花粉症那样明确。真菌感染的诊断检查1、详询有无外伤史及手术史,受伤时间、场所,受伤后的处理,发病时间、病情发展经过,有无预防接种史;对女性患者,应详询分娩或史;如为,应询问分娩史及脐带处理的情况。2、检查受伤部位、创口情况,创口周围有无痉挛及抽动,特别注意腹直肌是否强直。3、观察患者有无牙关紧闭、阵发性抽搐、痉笑、角弓反张,全身强直及阵发性痉挛,特别注意呼吸道是否通畅,有无喉头痉挛。皮肤真菌感染的治疗1、除头癣和甲癣外,大多数真菌感染症状都较轻微,常用抗真菌霜剂治疗。很多疗效较好的抗真菌霜剂可不需处方在药店购买。2、一般霜剂每天涂敷两次,治疗持续到皮损消退后7~10天。如果霜剂停用太快,感染并未消除,皮疹又会复发。3、抗真菌霜剂要在使用几天后才显效,其间可用皮质类固醇霜剂缓解瘙痒和疼痛。4、严重的或顽固性感染,可用灰黄霉素治疗几个月,有时同时用抗真菌霜剂。口服灰黄霉素很有效,但可引起副作用,如、胃、光敏、水肿和减少等。5、保持感染部位清洁、干燥有助于抑制真菌繁殖,促进皮肤愈合。感染处应经常用肥皂和水清洗,擦干后扑撒滑石粉。避免使用含粉的粉剂,因为它能促进真菌生长。真菌的菌落特征1、在自然基质或人工培养基上由一段(或一丛)菌丝或一个(或一堆)孢子发展而成的菌丝体的整体称菌落。霉菌的菌落和放线菌一样也是由分枝状菌丝组成。2、有的霉菌菌落生长则有一定的局限性,直径1-2cm或更小。菌落表面常呈现出肉眼可见的不同结构和色泽特征,这是因为霉菌形成的孢子有不同形状、构造和颜色,有的水溶性色素可分泌到培养基中,使菌落背面呈现不同颜色;一般处于菌落中心的菌丝菌龄较大,位于边缘的则较年幼。菌落具有“霉味”。3、但各种霉菌,在同一培养基上的菌落形状、颜色等相对稳定。故菌落特征也是鉴定霉菌的重要依据之一。如何预防1、保持皮肤清洁和干燥。经常用清洗头发,擦拭皮肤。然后彻底干燥。2、在接触土壤,宠物,账单或钱币等物品后适当。3、避免与其他人共享梳子或刷子等东西,也不要与人混用毛巾,帽子和衣服。4、彻底清洗衣服和毛巾,尽可能防止真菌传播感染。5、及时更换潮湿的衣服。这一点也同样适用于游泳衣,尤其是在公共水池中游泳更应该注意。真菌感染的症状1、股癣出现周围地区作为一个环状的红色皮疹。它是在形式小,痛苦,非常痒的水泡。2、脚气出现发痒,脚趾之间的鳞片状皮疹。可能有轻度刺激或皮肤开裂和脱皮。皮肤变得酸痛,容易受到细菌感染。3、头皮癣是高度传染性和儿童的鳞屑,头皮发痒补丁的形式。4、指甲癣影响趾甲,使指甲显得呆板和增厚。指甲感染的一部分可能会散架从指甲休息。5、通常发生在人体皮肤皱褶和尿布区等潮湿和温暖的地区。浅表皮肤念珠菌感染出现一个红色的扁平皮疹,有齿痕,尖锐的边缘。
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