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血液中含量顶空气相色谱法测定 宁夏银川
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血液中含量顶空气相色谱法测定 宁夏银川
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0.0110.0 g/L
1.1& & GC5890FDK-300KJ5890
1.3.1& & 1.26 ml0.78931.24 ml0.803 7100 ml,,10 g/L41
1.3.2& & 101 g/L
80220200. 809090
1.5& & 20.5 ml,100 μl(1 g/L),DK-300
220 μg2 mg
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1.7&&&&& & & 10 g/L10100100010.10.01 g/L0.050.10.20.4 ml1 g/L0.10.2 ml0.1 g/L0.10.2 ml0.01 g/L0.2 ml1 g/L1.8&&&&& & GC1&
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您是否在找全血中乙醇的毛细管气相色谱快速检测法；[中文摘要]：目的建立全血样品的乙醇直接提取进样；Rapiddeterminationofdire；Abstract：ObjectiveArapid；was2.2%.ConclusionThisis；Keywords:CapillaryCGC;Di；乙醇中毒多发生于饮酒，饮酒后极少量的乙醇在胃内被；目前血醇含量的测定多为
全血中乙醇的毛细管气相色谱快速检测法
[中文摘要]：目的 建立全血样品的乙醇直接提取进样-毛细管气相色谱快速分析方法。方法
取全血样品0.50mL，准确加入二甲基亚砜（DMSO）1.00mL和2g无水硫酸钠，振摇、离心后，取上清液1μL直接进样。结果
在选定的色谱条件下，血中的乙醇能与样品中的主要干扰成分实现基线分离。在0.0~300.0mg/100mL范围内线性良好，检出限为0.2mg/100mL。标准溶液测定的相对标准偏差（
，RSD）为1.36%，将所建立的方法用于全血样品的分析，取得了较为满意的结果，加标回收率为90.9%~107.3%，样品测定的RSD为1.98%。对测定方法的不确定度进行了分析，合成不确定度为2.2%。结论
该法可应用于血中乙醇的测定，样品提取后直接进样分析，方法简单快速，适合大批量样品的快速分析。 [关键词]
毛细管气相色谱，直接进样，乙醇
Rapid determination of direct sample injection by capillary - gas chromatography
Abstract：Objective
A rapid was developed with capillary-GC. Methods After taking 0.50mL of whole blood sample and adding 1.00mL of dimethyl sulfoxide (DMSO), and 2g anhydrous sodium sulfate，the super sample solution was directly injected into GC for analysis. Results The substances of the sample can be separated from ethanol
under this GC condition.
the liner range for ethanol was 0.0～300.0 mg/100mL and the detection limit was 0.2mg/100mL. The RSD of standard solution determination
was 1.36%. The satisfactory results were obtained for whole blood samples with the proposed method. The recoveries were 90.9%~107.3% for ethanol and the RSD for the samples determination was 1.98%. The combined uncertainty was calculated and the value
was 2.2%. Conclusion This is a rapid, sensitive and simple method. It can be used for the
diagnosis of ethanol in blood.
Key words: Capillary C GC; Dir E Internal standard method
乙醇中毒多发生于饮酒，饮酒后极少量的乙醇在胃内被粘膜内的乙醇脱氢酶代谢清除，而大部分留于小肠内被迅速扩散吸收至体液中。过量饮酒已被列为世界公共卫生的主要问题之一，可诱发多种疾病，如心血管疾病、消化系统疾病、精神障碍等。急性酒精中毒主要表现为神经行为的改变，导致行为异常，从而发生意外甚至犯罪，比如车祸，酒后肇事等[1]。交通事故现已成为社会的第一大公害，给人类带来重大的人员伤亡和财产损失。醉酒驾车是引起交通事故的第一大因素，引起了全社会的重视。饮酒后，大脑由于酒精的作用, 使得各项感官性能下降、注意力分散，从而造成判断和操作的失误，增加交通事故发生的危险性[2]。在交通事故责任认定时，肇事者血液中的乙醇含量是重要的判断依据，因此，如何快速准确的检测血液中乙醇含量，可以为交通事故及时公平的处理提供技术支持和保障。
目前血醇含量的测定多为气相色谱法[3,4]，大部分文献报道和公共安全行业标准（GAT/842 2009）均采用顶空气相色谱法[5-7]进行分析，因手动顶空进样，测定的影响因素甚多，为了保障实验所需的准确度和精密度，需配置自动顶空进
样装置，分析成本大大增加；另外，顶空气相色谱法需要15min的气液平衡时间，使得分析周期延长。因此，本课题拟采用样品提取后直接进样，毛细管气相色谱柱分离，以期建立一种快速简便、高效准确的分析方法，适用批量样品的测定，并对测定方法的不确定度进行了分析。
1.实验部分
1.1 主要仪器与试剂
Agilent 6890N 气相色谱仪，附氢火焰离子化检测器（美国惠普公司） Millipore超纯水发生器
Anke TCL-16B高速离心机（上海安亭科学仪器厂） 标准品
丙酮、叔丁醇（内标）、异丙醇、无水乙醇、正丙醇、异丁醇、正丁醇、异戊醇（均为色谱纯）
二甲基亚砜（溶剂，色谱纯），无水硫酸钠，超纯水 标准储备液配制
准确称取一定量的无水乙醇、正丙醇标准品，用超纯水定容，配制成10.0mg/mL标准储备液。
内标储备液配制
准确称取一定量叔丁醇标准品，用超纯水定容，配制成1.0mg/mL标准储备液
标准应用液配制
取乙醇和正丙醇标准储备液适量，用超纯水配制为浓度0，20，50，100，200，300mg/100mL标准溶液。 1.2气相色谱条件
色谱柱：Supleo DB-6(30.0m×250μm×0.25μm)；进样口温度250℃；程序升温，柱温70℃，保持4.5min，升温速率60℃/min，最终温度200℃，保持6min；检测器250℃；氮气流速为0.6mL/min；氢气流速为35 mL/min；空气流速为400mL/min；分流比10:1；进样量1μL。 1.3
标准曲线绘制
取上述标准应用液0.5ml，加入叔丁醇作为内标，1ml二甲基亚砜和2g无水硫酸钠，振荡混匀后，10000rpm离心5min后，取上清液1μL进气相色谱仪分离测定，每个浓度重复测定2次，以乙醇含量为横坐标，乙醇与叔丁醇的峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线。 1.4 样品的判定与测定
取全血样品0.50mL，加入二甲基亚砜（DMSO）1.00mL和2g无水硫酸钠，按1.3步骤振摇离心后进样分析。（内标呢？）
因死后生成乙醇的同时平行的产生正丙醇，且乙醇量一般为正丙醇20倍内，因此，在检测尸血和腐败学样本时，要判断生前饮酒还是死后生成以及确定乙醇的生前浓度，须同时测定乙醇和正丙醇含量。如血中检出乙醇而未检出正丙醇，可推定为生前饮酒；如血中同时检出乙醇和正丙醇者，乙醇含量需高于正丙醇20倍以上，可推定为生前饮酒。
2. 结果与讨论
2.1色谱分离条件的选择
根据实验室条件，本实验选用Supleo DB-6(30.0m×250μm×0.25μm) 为分
离柱，并进行了色谱条件的优化。 2.1.1 柱温的选择
柱温是影响色谱分离的重要因素之一。实验在40~100℃范围内考察了柱温对分离的影响，并在不同柱温下，对和乙醇结构近似的常见低级醇、醛和酮类如乙醛、甲醇、丙酮、异丙醇、正丙醇、异丁醇、正丁醇、异戊醇的干扰进行了研究。实验发现，与乙醇最接近的峰为异丙醇，因此以两者的分离情况作为考察指标，温度越高，乙醇与异丙醇的分离度变差，但两者峰形逐渐变好。结果表明，70℃时乙醇与异丙醇的分离度和峰形最好，其余物质亦不会产生干扰，因此实验选定柱温为70℃，但在此温度下，溶剂二甲基亚砜出峰较慢，使得测定时间延长。因此在乙醇出峰后，采用程序升温模式，加快溶剂的出峰。实验采用程序升温：柱温70℃，保持4.5min，升温速率60℃/min，达到200℃后，保持6min。在此程序升温条件下，在10min内可完成一次分析，并且其余化合物均能和乙醇得到有效分离。
2.1.2载气流速的选择
流速的改变对组分的保留时间、峰面积及峰形具有较大影响。流速减小，保留时间延长，峰面积增大，但峰型展宽，反之亦然。考查了0.5~2.0mL/min流速范围内考察了其对分离的影响。结果表明，流速越高，乙醇和异丙醇的分离变差。当流速大于0.6mL/min时，两者无法得到有效分离。因此，实验采用流速为0.6mL/min，以满足对异丙醇和乙醇的分离。 2.1.3进样口、检测器温度的选择
进样口和检测器温度通常采用略高于待测物质的沸点，在100℃~280℃范围内进行条件的优化，实验结果表明，进样口和检测器温度在上述温度范围内，对实验结果的影响不大。为了实现待测物进样后的瞬间汽化和降低检测器的残留，两者均取250℃。 2.1.4分流比的选择
分流比主要影响检测器的灵敏度，分流比增大，灵敏度降低，峰面积减小，峰形变好；反之，灵敏度升高，峰面积增大，峰形展宽。实验改变分流比为5:1，10:1，20:1以及采用不分流模式，最终选择分流比为10:1，在此分流比条件下，各物质能得到较好的分离和对称尖锐的峰形，灵敏度亦能满足全血样品的测定。
在上述优化的测定条件下，得到的乙醇标准图谱和全血样品图谱如图1和2。
图1 标准图谱 [ 1.叔丁醇，2.无水乙醇 3.正丙醇 4.二甲基亚砜]
Fig1 Chromatogram of the standard solution [1. tert.-butyl alcohol 2.Ethanol, 3.Propanol
图2 样品色谱图（1.叔丁醇，2.乙醇）
Fig2 Chromatogram of the sample solution [1 tert-butyl alcohol 2.ethanol ]
？？图上为何没有二甲基甲风的峰呢？
2.2提取剂的选择
血样成分复杂，基底干扰较多，如果直接进样，极易造成进样垫和衬管的污染，因此，本实验采用有机溶剂提取法进行了样品纯化。
在提取剂选择中，主要考虑了溶剂的出峰时间，毒性及经济实用性等方面。选择四氢呋喃，乙腈和二甲基亚砜作为溶剂，结果表明，四氢呋喃与叔丁醇、异丙醇及乙醇的出峰时间均较接近，且溶剂峰过大，干扰叔丁醇，异丙醇及乙醇的出峰；而乙腈在色谱分析时，与正丙醇的出峰时间接近，无法完全分离，而腐败血中通常会产生一定量的正丙醇，因此，在尸血测定时，乙腈的干扰会影响正丙醇的检出，从而影响血样的判定。实验最终采用二甲基亚砜作为溶剂，其对人体无毒无害，且出峰时间较长，不影响任何组分的定性定量分析。另外，水对毛细管柱柱效有较大影响，会造成测定精密度变差，所以在样品处理中要求脱水处理，实验采用2g无水硫酸钠作为脱水剂，取得了较为满意的效果。 2.3内标物质的选择
内标法可在一定程度上消除了操作条件（如进样量的变化、色谱条件的微小变化）的变化所引起的误差，特别是在样品前处理加入内标物，可部分补偿待测组分在样品前处理过程中的损失[8,9]。血中乙醇的测定，文献中多以叔丁醇，异丙醇和正丙醇为内标物[10,11 ]，本方法选择叔丁醇作为内标物，在选定的色谱条件下，它能和待测组分及干扰成分达到基线分离。 2.4 方法性能考察
2.4.1 线性范围和检出限
取不同浓度的标准溶液进行色谱分析，在0.0~300.0mg/100mL乙醇浓度范围线性良好（线性回归方程Y = 0.0953x－0.0459，相关系数0.9993）。根据三倍基线噪声所对应的标准物质的浓度，计算方法的检出限为0.2mg/100mL。 2.4.2 精密度实验
取混合标准应用液，进样1?L，连续测定6次，以乙醇与叔丁醇的峰面积比值的RSD考查仪器的精密度，值为1.36%。取平行样品6份，用所建立的气相色谱方法进行测定，以样品测得值的RSD考查方法的精密度，值为1.98%。 2.4.3加标回收实验
取3份不同乙醇浓度并充分混匀的血样进行加标回收试验。每份血样分装成4份平行样品，其中1份用以测定样品的本底值，其余3份加入不同浓度的标准溶液后进行测定，计算其加标回收率为90.9%~107.3%，实验结果见表1。
表1样品加标回收实验
Table 1 Results of spiked recovery tests
本底值（mg/100ml） 加标量（mg/100ml） 测得值（mg/100ml）
15.8 15.8 15.8 68.5 68.5 68.5 98.3 98.3 98.3
15 30 45 30 60 120 45 90 180
31.9 44.6 62.2 98.2 133.6 177.6 143.2 186.3 265.1
107.3 96.0 103.1 99.0 108.5 90.9 99.8 97.8 92.7
2.5 不确定度的计算
本文根据实验操作步骤，逐步计算了各项不确定度，结果如下：
相对不确定度
标准不确定分量 不确定度来源 分布 类型 包含因子
?u?C???C???u?Ax?Ax
标准物引起的不确定度 样品重复进样引起的不确定度 标准物重复进样引起的不确定度
进样器引起的不确定度
1.16 0.81 1.45 0.6
正态 正态 正态 均匀
合成标准不确定度
uc?X?Uc(rel)=X=
?u?Ax???u?A0???u?C???u?I?????2?????C??I?
?????Ax??A0?
2.6 实际样品的检测
三亿文库包含各类专业文献、文学作品欣赏、生活休闲娱乐、专业论文、高等教育、行业资料、幼儿教育、小学教育、外语学习资料、直接进样GC测定血中乙醇03等内容。　
　面积测定仪、原子吸 收光谱仪、高纯气体分析设备、二甲醚分析设备、顶空进样器...(GC5890T 气相色谱仪) 血液中酒精分析色谱仪 目前,酒后驾车现象及因酒后驾车... 　血液中酒精分析仪型号:GC-5890F 产品简介: 血液中酒精含量检测专用色谱仪是一...顶空进样器是将液体或固体样品中的挥发性成分直接导入相色谱仪进行定性、 定量... 　血液中乙醇含量的色谱法测定_韩语学习_外语学习_教育专区。血液中乙醇含量的色谱...1 材料与方法 1.1 仪器和试剂 俊齐 gc2002 气相色谱仪;顶空自动进样器(hs... 　血液中酒精检测的方法_化学_自然科学_专业资料。顶空GC定量分析的最早应用就是...(FID), 填充及毛细进样系统,程 序升温,智能后开门 AHS-6890A 型顶空进样... 　可直接接驳 HP5890 微型单丝热导检测器、 氢火焰...☆ 可同时安装两种进样系统:填充柱、毛细管分流/不...◆GC5890 气相色谱仪系列 血液中乙醇分析(GC5890F ... 　二、血液中乙醇检测仪分析范围:顶空气相色谱法定性、定量检测血醇含量是唯一司法...GC5890F KJ5890 专用酒柱 HGT-300 DK300A 自动顶空进样器 手动压盖器 顶... 　GC-L6 型气相色谱仪与顶空进样器连接在一起配套使用,检测血液中酒精含量是按照中 华人民共和国公共安全行业标准 GA/T842-2009 中规定分析要求、分析条件,能快速... 　血液中酒精检测仪器配置: 仪器设备 仪器名称 GC5890F 气相色谱仪 分析仪器 DK300A 自动 顶空进样器 色谱工作站 样品制备 专用配件 及消耗品 专用色谱 柱 顶空... 　气相色谱检测血液中的乙醇(含谱图) 气相色谱检测血液中的乙醇(含谱图) GC5890...5、可同时安装三种进样系统:填充柱、毛细管分流/不分流进样系统(具有隔膜清扫...内标—标准曲线气相色谱法测定血液中的乙醇含量--《贵州科学》2016年01期
内标—标准曲线气相色谱法测定血液中的乙醇含量
【摘要】：目的:建立内标—标准曲线法定量测定血液中的乙醇含量的气相色谱方法,并与SF/Z JD0进行比较。方法:用移液管量取0.20 m L血样及1.00 m L 40.0μg/m L叔丁醇内标工作液加入2.0 m L塑料离心管中,混合均匀,离心后将清液通过0.45μm的无机滤膜过滤后装入2.0 m L进样瓶中密封,应用自动进样器进样,采用ZB-624柱分离样品中的乙醇和叔丁醇,然后采用内标—曲线法定量分析血液中的乙醇含量。结果:内标—标准曲线法定量分析血液中的乙醇含量,乙醇的加标回收率在97.6%~101.0%,相对标准偏差小于2.0%,且重现性好。结论:该法分析血液中的乙醇含量能满足检测工作要求,相较顶空进样—气相色谱法更简单,难度也更小。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R96;O657.71【正文快照】：
根据近年世界卫生组织交通事故调查显示,道路交通事故中大约有50%~60%与酒后驾车有关,酒后驾车造成了重大的人员伤亡和财产损失。随着国家对酒驾打击力度的加大,酒驾的司法鉴定工作越来越重要。怎样能够更简单,快捷,准确的测定血液中乙醇含量是司法鉴定工作者们所面临的问题。
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顶空气相色谱法测定血液中乙醇含量的探索
作者：李周儒于常州蔡红星 【摘要】 目的建立检测血液中乙醇含量简便、准确的方法。方法以叔丁醇作为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器对样品进行检测，与平行操作的乙醇标准品比较，用内标法以乙醇对内标物的峰面积比进行定量。结果色谱图上目标峰与内标峰分离完全
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作者：李周儒于常州蔡红星 【摘要】　　目的建立检测血液中乙醇含量简便、准确的方法。方法以叔丁醇作为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器对样品进行检测，与平行操作的乙醇标准品比较，用内标法以乙醇对内标物的峰面积比进行定量。结果色谱图上目标峰与内标峰分离完全，在0.01～10.0g/L范围内标准工作曲线线性关系良好。结论顶空气相色谱法测定血液中乙醇含量快速灵敏，能准确定量。该方法可用于实际检测分析。 【关键词】气相色谱顶空法血液乙醇含量测定 　　血液中乙醇浓度的高低,是判定一个人清醒程度的重要指标。目前国内大多采用国标法测定,即重铬酸钾氧化硫酸亚铁铵滴定法。该法花费时间长,条件不易控制。由于血液中含有各种蛋白质和胶状物质，比较黏稠,因此不能采用直接气相色谱法测定。本实验采用顶空气相色谱法，通过对待检血样进行适当处理和色谱条件的摸索，从而对实验方法有所改进。 　　1材料和方法 　　1.1主要仪器TP2100气相色谱仪，配有火焰离子化检测器和色谱数据工作站。 　　1.2试剂空白抗凝血，无水乙醇(分析纯)，叔丁醇（分析纯，内标物）。 　　1.3试剂配置 　　1.3.1乙醇标准储备液、叔丁醇标准储备液用移液器分别准确吸取无水乙醇1.26ml（相对密度0.7893）、叔丁醇1.24ml（相对密度0.8037）于100ml容量瓶中,用重蒸水稀释至刻度,混匀，分别得浓度为10g/L的乙醇标准储备液、叔丁醇标准储备液。置4℃冰箱保存（可保存1年）。
　　1.3.2乙醇标准工作液、叔丁醇标准工作液分别吸取一定量的乙醇标准储备液和叔丁醇标准储备液，用重蒸水稀释10倍，分别得浓度为1g/L的乙醇标准工作液和叔丁醇标准工作液。 　　1.4色谱条件色谱柱HayesEPQ2M×2mm，柱温120℃，检测室温度250℃，气化室温度250℃，载气（N2）流速0.020～0.035L/min，燃气和空气流速根据仪器条件选定。 　　1.5样品制备精确吸取2份待测全血0.5ml，分别加入样品瓶中,加100μl(1g/L)叔丁醇标准工作液作为内标，用密封钳加封铝帽，密封好瓶塞,混匀，置60℃恒温水浴箱内，水浴15min。 　　另取空白全血2份，根据待测血液中乙醇含量的多少（目测乙醇峰面积的大小），添加相应的乙醇标准工作液（20μg～2mg），内标液按上述方法平行操作，作为已知对照。 　　1.6样品检测用2ml注射器分别吸取检材、已知对照瓶内液面上的气体约1.5ml，注入气相色谱仪中，每个试样进样2次；并注入乙醇标准工作液。 　　1.7标准曲线的制作将10g/L的乙醇标准储备液用重蒸水分别稀释10、100、1000倍，得浓度分别为1、0.1、0.01g/L的乙醇标准液，然后分别取0.05、0.1、0.2、0.4ml的1g/L乙醇标准液，0.1、0.2ml的0.1g/L乙醇标准液，0.1、0.2ml的0.01g/L乙醇标准液，同时加入0.2ml的1g/L叔丁醇标准工作液做内标，检测后制作标准工作曲线。见表1。
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