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中药化学成分预试验大全（2）
发表时间：日9:42:1
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执业中药师考试辅导：中药化学成分预试验大全（2）
　　氨基酸、多肽、蛋白质
（1）加热沉淀试验：加热煮沸 &混浊或沉淀 （蛋白质）+5%H2SO4（不加热）&混浊或沉淀
（2）双缩脲反应：+40%NaOH，1%CuSO4 &紫色、红色或紫红色（多肽、蛋白质）
（3）茚三酮反应：+0.2%茚三酮试液 &蓝或蓝紫色（氨基酸、多肽、蛋白质）
（4）吲哚醌反应：+吲哚醌试液 &各种颜色（氨基酸）
（5）Millon反应：+Hg，H2NO2 &红色（蛋白质分子中有酪氨酸组成）
（6）Hopkins-Cole反应：+乙醛酸，浓硫酸 &各色（蛋白质分子中有色氨酸组成）
（7）氨基酸的薄层层析检查：吸附剂&&硅胶G
展开剂&& n-BuOH，n-BuOH：HAc：H2O
显色剂&&0.25%茚三酮试液 &紫红色斑点
（1）加热或矿酸试验：取检品的水溶液1ml于试管中，加热至沸或加5％盐酸，如发生混浊或有沉淀示含有水溶性蛋白质。
（2）缩二脲试验：取检品的水溶液1ml，加10％氧化钠溶液2滴，充分摇匀，逐渐加入硫酸铜试液，随加摇匀，注意观察，如呈现紫色或紫红色示可能含有蛋白质和氨基酸。
凡蛋白质结构中含有两个或两个以上肽键（－CONH－）者均有此反应，能在碱性溶液中与Cu2+生成络合物，呈现一系列的颜色反应，二肽呈蓝色，三肽呈紫色，加肽以上呈红色，肽键越多颜色越红。
（3）茚三酮试验，取检品的水溶液1ml，加入茚三酮试液2－3滴，加热煮沸4－5分钟，待其冷却，呈现红色棕色或蓝紫色（蛋白质、胨类、肽类及氨基酸）。
氨基酸与茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被还原成仲醇，与所后成的氨及另一分子茚三酮缩合生成有蓝紫色的化合物。
①茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂，反应在1小时内稳定。试剂溶液pH值以5－7为宜，必要时可加吡啶数滴或醋酸钠调整。
②此反应非常灵敏，但有个别氨基酸不能呈紫色，而呈黄色，如脯氨酸。
（4）氨基酸薄层层析检出反应：
①吸附剂：硅胶G。
②展开剂：（1）正丁醇：水（1：1）（2）正丁醇：醋酸：水（4：1：5）
③显色剂：0.5％茚三酮丙酮溶液，喷雾后于1100烘箱放置5分钟，显蓝紫允或紫色。
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茚三酮反应：+0.2%茚三酮试液 →蓝或蓝紫色（氨基酸、多肽、蛋白质
茚三酮试验，取检品的水溶液1ml，加入茚三酮试液2－3滴，加热煮沸4－5分钟，待其冷却，呈现红色棕色或蓝紫色（蛋白质、胨类、肽类及氨基酸）。
氨基酸与茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被还原成仲醇，与所后成的氨及另一分子茚三酮缩合生成有蓝紫色的化合物。
【注】①茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂，反应在1小时内稳定。试剂溶液pH值以5－7为宜，必要时可加吡啶数滴或醋酸钠调整。 ②此反应非常灵敏，但有个别氨基酸不能呈紫色，而呈黄色，如脯氨酸。
我整理的关于茚三酮测定氨基酸显色反应的一些总结：
1.原理：除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应生成黄色物质外，所有的α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。该反应分两步进行，首先是氨基酸被氧化，产生 CO2 、NH3和醛，而水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所生成之还原型茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。此反应的适宜pH为5～7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能显示反应，因此是一种常用的氨基酸定量方法。但也有些物质对茚三酮也呈类似的阳性反应，如β-丙氨酸、氨和许多一级胺化合物等。所以定性或定量测定中，应严防干扰物存在。
2.试液的配制：KCN－乙二醇甲醚－茚三酮溶液：称取1.25g重结晶茚三酮溶于25ml经重蒸馏的乙二醇甲醚中使成5%溶液。将2.5ml10mmol/L KCN溶液用乙二醇甲醚溶液稀释至125ml充分混合。然后将125mlKCN—乙二醇甲醚溶与25ml茚三酮－乙二醇甲醚溶液相混合，置试剂瓶待用，正常情况下应为浅黄色。
乙二醇甲醚(CH3OCH2CH2OH, methyl cellusolve)的处理：将5g硫酸亚铁加在500g乙二醇甲醚中，振摇1─2小时。过滤除去硫酸亚铁（若滤液混浊没有关系），再在蒸馏瓶中蒸馏，收集沸点121─125℃部分，此时应为透明无色液体。KCN－乙二醇甲醚－茚三酮溶液配制后必须隔夜才能应用。配制后1星期内稳定，若超过1星期则灵敏度降低，不宜作定量。
茚三酮重结晶：即使AR级的茚三酮，由于保管不当，常带微红色，配成溶液后也带红色，影响比色测定，故需重结晶一次方可应用。5g茚三酮溶于15ml热蒸馏水中，加入0.25g活性炭，轻轻摇动，若溶液太稠不易操作，可酌量加水5─10ml，30分钟后用滤纸过滤，滤液放冰箱中过液，次晨即见微黄色结晶出现，过滤，再以1ml冷水洗涤结晶，置于干燥器中干燥，最后装入棕色试剂瓶中保存。
从原理上就可以看出还原型茚三酮是反应过程中生成的，所以我想也就不必非要在配液时候用还原型茚三酮了，而且还原型茚三酮在常态下能否稳定存在还是个问题，也就是说你不一定能找到还原型的茚三酮试剂。
关于显色剂的不同浓度我想可能是考虑了紫外检测器的置信区间，即0.3-0.7范围内的数值比较准确，你配制的显色剂与反应液作用后吸光度应该在此范围内，否则应该降低显色剂的浓度，以使吸光度落在紫外置信区间内。
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关于茚三酮和赖氨酸
茚三酮检验氨基酸的α氨基是呈蓝紫色...请问将赖氨酸的ε-氨基与茚三酮反应情况如何？显什么颜色？
是么...多谢了...因为我看见的书上面说氨基酸的α氨基显色时有脱羧反应...侧链氨基肯定不会有脱羧反应...所以才搞不清楚
这个反应的紫色或者蓝色产物多半是脱羧，脱去烷基的。。。肯定反应是发生了。。
脱去CO2，RCHO。。为什么会觉得侧脸氨基不会脱羧？
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