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求助求助，PCR电泳跑成这样，是什么原因呢。新手刚开始做。marker也看不出来。
求助求助，PCR电泳跑成这样，是什么原因呢。新手刚开始做。marker也看不出来。求指教！！
IMG_1252.JPG
体系是Mix12.5，引物各0.5微升，DNA模板1微升，最后定容到25微升，
反应过程我这个是94度5分钟，94度一分钟，退火温度是从56到62跑了个梯度，然后72度一分钟，35个循环，最后72度跑五分钟。
胶是2%的，电压80V非常感谢！！！
我们实验室只有一个电磁炉，我就在锅里烧些水，然后把锥形瓶放进去煮的，不知道是不是有影响？？但是应该也是完全溶解了。
这个就是对退火温度做了梯度以后出来的图，也确实好没有摸清楚条件。。。
72延伸1分钟你的片段不小吧？是不是胶浓度太高了？
maker看不清可能是胶的问题，也可能是你上样有问题，你上了多少？
OK，谢谢啦！今天再试试。。
我正在试呢，用1%和1.5%都试试，100V，但愿能有个好结果。
是BioTake的核酸染料
还真没怀疑过，我用的lifefeng的含燃料的Mix，今天再试试，不行明天借同学的再试试。
今天做的100v的，终于出结果了，是电压的问题，谢谢你啦！
谢谢，今天用的1.5%的胶，100v电压，做出来的条带很清晰:victory:
谢谢，今天减小了胶的浓度，增加了电压，条带跑的很清晰:victory:
你好，想请教一个问题：我刚做了跑胶，marker看不出来。我的胶是这样配置的：1%的琼脂糖凝胶，微波炉加热。之后加入6微升的gengreen核酸燃料。
首先我的TBE溶液时刚买的，溶解琼脂糖的时候也完全溶解了，就是那个gengreen和marker，那个放了快一年的时间，不知道是不是因为过期失效了。
具体怎么样我也不敢断定，你可以自己分析下，如果可以看见条带，只是marker 看不见，有可能是marker失效了，如果你所有条带都很模糊，就有可能是你的genegreen 失效。
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请问我全长基因跑出来之后为什么要小100bp左右呢？
我想构建一个目的基因的过表达质粒，在设计目的基因全长引物后跑PCR，结果产物的位置要比实际的小100bp左右，不知道究竟是为什么。内参条带的位置没有什么问题，偏偏是目的基因的产物要小很多。我的全长引物是根据目的基因的CDS序列进行设计的，设计完以后BLAST也没有什么问题，恰恰就是我想要的区间，就是不知为何跑出来却变样了？！求教各位高手了，谢谢！
昨天全部跑胶了，然后胶回收做上连接了，打算今天重新跑个PCR拿去测序呢！但愿是胶或者marker的问题，这可是构建质粒的关键一步啊！
关键是看有没有条带，单一与否，构建质粒，之后转化，提取，酶切，看图谱，有时候大小稍微有偏差，测序之后是没有问题的
你的意思是我这样先构建质粒，对吗？
我是跑的全长，还没有酶切呢。
全长多大呢？你使用的是不是对应的Maker啊？100bp在电泳图上应该不容易看出来的，存在这样的误差
全长804bp。条带在marker 750位置的下面，所以才感觉要小很多。
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【求助】100bp的目的基因电泳时该用多少电压？跑多久？
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这个帖子发布于9年零197天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
　　我的目的基因只有１００多ＢＰ，可ＭＡＲＫＥＲ是２０００ＢＰ的，所以ＭＡＲＫＥＲ跑好时总看不到１００ＢＰ条带，而我的目的基因跑电泳初我还能在紫外灯下看见红色条带，可１５分钟后却只有弥散的条带，而且１００ＢＰ的ＭＡＲＫＥＲ也看不见，是不是我电泳电压调高，电泳时间缩短就能看清楚呢？请各位有经验的前辈指教！先谢谢各位了！
不知道邀请谁？试试他们
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1 紫外线下DNA可以分解,所以15分钟后条带模糊和弥散是正常现象.2 要想短片段得条带清楚,必须选择合适的胶得浓度.如你得是100bp,可以用2%或者更高浓度的胶试一下,当然你的产物量不能太少了,这是前提.3 电压对条带清晰度应该有影响,但是我觉得不是最主要的.4 电泳时间短一点,条带应该会清楚一些5 可以改善EB染色时间使条带更亮一些.祝你好运!
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我做的是半定量，我的產物長度是85bp，剛開始跑的時候也是很容易跑散，后來嘗試跑膠的時間以及電壓作了些調整，結果跑出來的條帶就不會很彌散。我用的是2%的膠，緩沖液是TAE，或者你可以改用TBE緩沖液來試試。因為TAE的緩沖能力比較差，你不防可以一試。我試了一下效果不錯。下面附上電泳圖。我模比例的圖，內標是291bp。
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下面是118v 10min 后照的片，發現Marker沒有跑開
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下面是118v 13min后的圖，Marker跑開了
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118v 16min后的圖發現目的條帶開始散了
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118v 13min 用的是TBE緩沖液跑的圖
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118v 13minTAE緩沖液跑的圖，跑这張圖主要是為了跟上面TBE緩沖液作個比較
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谢谢acomer和zjyouyouy的建议，我用的是TAE液，但琼脂糖是国产的，MAKER的100bp也从来都看不清楚，胶的背景也没你们图那么清晰，不知道什么原因？请问EB染色不就是缓冲液冷却后加入2。5微升后混匀倒入胶板上，怎么改善EB染色时间呢？谢谢指教！
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我们同学也有跑100bp左右的基因片段，他用的是4%的胶，缓冲液是TAE，100V，跑50min，效果非常好，用的是宝生物20bp的marker。EB染色不用等到冷却，70度左右就可以，用枪头沾一下EB在胶液里涮涮就可以。
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13条maker带都很清楚
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请教acomer和zjyouyouy，我做组织的RT，我的PCR产物电泳出来这样的结果（引物是β-actin），条带很弱，不知道怎么办了。指导我的博士说是RNA提取的问题，即没有提出RNA，欲哭无泪啊，花了那么多心血收集标本。。。。。
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如题，下面是电泳图片。
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个人认为：原因很有可能是RNA产物的浓度过低
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电压随便50~120V都没关系的。我一般用2%的胶，跑15~40分钟。结果都很清楚的。胶用的是大治的，据说是西班牙，国内分装的。还有就是EB我们实验室都是定量加的，如15ml的胶大概加0.6~0.9ul之间都可以。加多了，背景太亮也会影响你最后的拍照。一般情况下，100bp的片段扩散不会太快的。还有就是做胶一定要做好，这关系这电泳的质量。楼上的电泳图很模糊不清嘛！重跑一次，曝光时间长一点。个人认为，你可以重新跑一次RNA，看看RNA有没有问题。
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丁香园准中级站友
你提取rna和做好cdna后不定量吗？
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首先要用好的胶（BBI级别的），尽量用新胶。
你的目的片段比较小，也就是说和DLBP是一样，因此胶的浓度应该大一点（2％以上）
还有就是跑胶效果和楼主描述的恰好相反：电压越小，时间越久，条带的效果越好，因此可以降低电压多跑一会，比如75伏电压，45分钟。
我们实验室做RAPD就是如此，需要将目的条带分离清楚，他们尽量用小的电压，延长跑胶的时间。
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DNA琼脂糖凝胶电泳为什么会是这样的,250bp的SRY基因,每次跑完都没有条带,Marker还好,
书生大爷·郏h
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请把紫外灯下的图片传上来看看如果是PCR扩增产物的话,说明PCR的条件不好,条带没有批出来.第二张,MARKER跑的也不好
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