高中生物单克隆抗体的制备过程
高中生物单克隆抗体的制备过程
学习啦【高三生物】 编辑：文娟
　　考试是检测学生学习效果的重要手段和方法，考前需要做好各方面的知识储备。下面是学习啦小编为大家整理的高中生物单克隆抗体的相关知识点，希望对大家有所帮助!
　　一、区别单克隆抗体和多克隆抗体
　　多克隆抗体：抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。
　　当病原体入侵人体，能够刺激机体免疫系统产生大量的多种抗体，那么这一堆抗体就是多克隆的。
　　单克隆抗体(MAb)：是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术，起源于1975年，由G.K&Ohler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。
　　此类抗体是专一的，或者说是同一种蛋白质，因此是单克隆的。
　　二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤
　　(1)抗原制备;
　　(2)免疫动物;
　　(3)免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备;
　　(4)细胞融合;
　　(5)杂交瘤细胞的选择培养;
　　(6)杂交瘤细胞的筛选;
　　(7)杂交瘤细胞的克隆化;
　　(8)单克隆抗体的检定;
　　(9)分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立;
　　(10)单克隆抗体的大量制备。
　　三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的具体过程
　　1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。
　　2、细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。
　　3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。
　　4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。
　　5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
　　(1)体内诱生法 取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。
　　(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。近年来，各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。
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高考生物知识点
植物的组织培养
绩优堂高考知识点植物的组织培养
共计26道相关试题精选知识点题
【正确答案】
(1)生长素和细胞分裂素
抗原 抗体杂交
(2)脱毒率越高，成苗率越低
【答案详解】
(1)离体的植物组织必须在植物激素的作用下才能经脱分化形成愈伤组织，然后经再分化形成具有根、茎、叶的植物体。检测病毒的蛋白质要用抗原 抗体杂交法。(2)据表可知，茎尖越小脱毒率越高，成苗率越低，当茎尖大小为 时脱毒率和成苗率相对都较高。
【正确答案】
(1)植物细胞具有全能性
脱分化、再分化
离体植物激素(生长素和细胞分裂素) (2)人工种子
可以保持优良品种的遗传特性，生产上也不受季节的限制
(3)植物的茎尖、根尖还没有来得及被病毒侵染，利用植物的茎尖和根尖进行植物组织培养可以培育无病毒植株
【答案详解】
植物组织培养技术的原理是植物细胞具有全能性，植物组织培养技术主要包括两个步骤，分别是脱分化和再分化，所采用的材料必须是处于离体状态，而且需要提供一定的营养和植物激素。人工种子的优点是可以保持优良品种的遗传特性，生产上也不受季节的限制。利用植物组织培养技术生产脱毒苗的原因是植物的茎尖和根尖属于刚刚产生的组织．没有被病毒侵染，可以利用这部分组织培育无病毒植株。
【正确答案】
基因的选择性表达
(4)醋酸洋红法
焙花青铬矾法
【正确答案】
(1)不必添加
脱分化和再分化
(3)酒精和氯化汞
(4)酒精灯火焰
【答案详解】
(1)菊花茎段自身能合成植物激素，因此培养基中不必添加植物激素，培养基配制完毕后需进行高压蒸汽灭菌。(2)外植体的选择直接关系到实验的成败，因此应选择容易被诱导脱分化和再分化的菊花嫩枝作为外植体。(3)为防止微生物污染，菊花茎段在接种前要用适当浓度的酒精和氯化汞溶液进行表面消毒。(4)为避免接种前、接种中污染外植体以及接种后污染环境，因此接种前，工作台要用体积分数为 的酒精擦拭一遍，接种过程中所有的接种操作部必须在酒精灯火焰旁进行，并且每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。(5)外植体在培养过程中要保持无菌环境，控制好温度，并给予适当光照。
A.外植体可以来自于植物的任何细胞
B.培养应在无菌条件下进行
C.以花粉作为外植体可得到单倍体植株
D.不同阶段的培养基中细胞分裂素和生长素的比例不同
【正确答案】
【命题立意】
本题考查植物组织培养的原理和条件等基础知识，难度中等。
【解题思路】
外植体一般选用植物幼嫩的体细胞，不是任何细胞，如受精卵细胞；培养要在无菌的条件下进行，避免杂菌的污染；花粉中含有雄配子，经过植物的组织培养，可以发育为单倍体植株；脱分化和再分化时要控制细胞分裂素和生长素的比例，比例大时生芽，比例小时生根。
【正确答案】
答案 （1）生长旺盛
醋酸洋红法（2）细胞分裂素和生长素（3）酚红
（4）胚状体
培养基中激素的种类及其浓度配比（5）18～22
每天12小时光照
【答案详解】
解析& &&（1）植物组织培养法获取菊花植株时选用的材料一般是生长旺盛的嫩枝。月季的花药培养中选择单核期的花药离体培养，成功率最高，确定花粉发育期最常用的方法是醋酸洋红法。（2）在培养花粉的培养基中要加入细胞分裂素和生长素。（3）在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某几种细菌后，如果 升高，指示剂将变红，可知道其中含有能够分解尿素的细菌。（4）月季的花药培养与菊花的嫩枝组织培养不同，从植株产生的途径来说，花粉植株的产生一般有两种途径：一是花粉通过胚状体阶段发育为植株；另一种是花粉在诱导培养基上，先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。这两种发育途径的差别主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。
【正确答案】
答案&Ⅰ．稀释涂布平板&&&&梯度稀释&&&&恒温培养&&&&单个细菌Ⅱ．脱分化、再分化（全答给分）& &&细胞分裂素、生长素（全答给分）&&&&无菌操作（或无菌技术）& &&培养基（或培养器具）
【答案详解】
解析&&&&Ⅰ．微生物接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。后者则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，然后进行恒温培养。菌落是在固体培养基上由单个细菌繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。Ⅱ．植物组织培养中 表示脱分化， 表示再分化，题图实验添加的关键激素是细胞分裂素、生长素，二者浓度的配比调节分化过程。该实验成功的关键是无菌操作，要对外植体、超净工作台等消毒，对培养基（或培养器具）等灭菌。
【正确答案】
(1)细胞分化程度低，容易诱导形成
细胞的脱分化(2)生长起始较快
快速生长时间较长
产量较高(3)①灭菌、冷却
③ 重量和生物碱含量乘积的平均值最大
【正确答案】
(1)脱分化(2)蔗糖浓度下降， 降低
调节渗透压(3)秋水仙素(低温)
经加倍到 的细胞处于有丝分裂后期
经加倍到 的细胞处于有丝分裂中期(4)①③④
【正确答案】
(1)& &&&不完全显性(2) 种皮白色∶种皮浅色∶种皮黑色 (3)液体悬浮&细胞壁(4)种皮浅色∶种皮黑色 (5)基因文库&种间(或远缘)
A.①②两过程均需要植物激素来诱导细胞脱分化
B.与④过程相比，③过程可能会产生二倍体再生植株
C.图中三种途径中，利用花粉培养筛选低芥酸植株（HHGG）的效率最高
D.F1减数分裂时，H基因所在的染色体会与G基因所在染色体发生联会
【正确答案】
【命题立意】
本题考查杂交育种、单倍体育种、植物组织培养和减数分裂的有关知识，属于考纲理解层次。难度中等。
【解题思路】
①②均是脱分化过程，需要生长素和细胞分裂素的诱导；③④均是再分化过程，根据题意，花粉含有单个染色体组，花药有含单个染色体组的花粉(n)和含两个染色体组的花药壁(2n)两个组分，因此，由花粉发育形成的只能是单倍体植株，由花药发育形成的可能有单倍体和二倍体植株；与杂交育种相比较，利用花粉培养筛选低芥酸植株(HHGG)是单倍体育种的方法，这种方法育种时间短，而且与用花药培养比较，不需要筛选除去③过程产生的二倍体植株，因此，利用花粉培养筛选低芥酸植株的效率最高；
减数分裂时，进行联会的是同源染色体，即H基因所在的染色体与h基因所在的染色体联会，G基因所在的染色体与g基因所在的染色体联会，而H基因所在的染色体与G基因所在的染色体不是同源染色体。因此，减数分裂时不会出现联会。
【正确答案】
(1)脱分化(或去分化)& 再分化(2)琼脂& 低& 高压蒸汽灭菌(3)70％& 果胶酶(4)防止有机溶剂的挥发
【命题立意】
本题考查植物组织培养、微生物的实验室培养、植物有效成分的提取等，属识记层次。难度较小。
【解题思路】
(1)图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的脱分化和再分化过程。(2)培养基中常用的凝固剂是琼脂；培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值低时，有利于芽的分化；对培养基彻底灭菌，应采用高压蒸汽灭菌法。(3)用体积分数为70％的酒精为外植体消毒；常用果胶酶和纤维素酶将愈伤组织分离成单个细胞。(4)为防止加热时有机溶剂挥发，提取辣椒素的过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置。
A.组织培养&&
B.细胞杂交&&
C.显微注射&&
【正确答案】
【命题立意】
本题考查对植物组织培养概念的识记。难度较小。
【解题思路】
培育脱毒苗是利用植物茎尖、根尖等无病毒组织，进行组织培养成脱毒苗的过程。
【正确答案】
(1)大量元素& 微量元素& 细胞分裂素(2)IAA浓度& 再生丛芽外植体的比率(m)和再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)& 0～0.5mg·
(3)1(4)6-BA
【命题立意】
本题考查植物激素及组织培养的相关知识，属于考纲识记层次。难度较小。
【解题思路】
(1)根据植物的需求量，无机盐元素可以分为大量元素和微量元素，6-BA属于细胞分裂素类的生长调节剂。(2)根据实验目的和实验步骤中的数据，可以看出，不同处理中6-BA的浓度不变，IAA的浓度是自变量，菊花再生丛芽外植体的比率(m)和外植体上的丛芽平均数(n)是因变量；由图表数据中可以看出IAA的浓度范围是0～0.5mg·
。(3)再生丛芽的外植体数乘外植体上丛芽平均数即为丛芽总数，所以最少的是1号培养基。(4)诱导试管苗生根需要生长素用量和细胞分裂素用量的比值比较高，所以培养基中不需要加6-BA。
【易错点拨】
当生长素浓度大于细胞分裂素时，有利于再分化形成根；当细胞分裂素浓度大于生长素浓度时，有利于再分化形成芽。
【正确答案】
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Agrisera植物激素抗体-Agrisera植物抗体系列
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【简单介绍】
植物激素抗体-Agrisera植物抗体系列
【详细说明】
植物激素抗体-Agrisera植物抗体系列植物激素（Planthormone）是植物体内合成的对植物生长发育有显著作用的几类微量有机物质，包括生长素（Auxin）、赤霉素（GA）、细胞分裂素（CTK）、脱落酸（ABA）、茉莉酸、激动素和乙烯（ETH）等。它们都是些简单的小分子有机化合物，但它们的生理效应却复杂多样。应用免疫学技术如放射免疫分析（RIA）和酶联吸附免疫分析（ELISA）可以对植物激素进行含量测定以及激素的植物组织定位。但是由于植物激素分子较小，在制备相应的植物激素抗体时，不像植物体内的一些大分子物质如PEP羧化酶、ACC合成酶等那样经过纯化注入到动物体内即可引起免疫反应产生相应的抗体。相反，由于植物激素分子量较小，注入动物体内后不能引起免疫反应，缺乏免疫原性。因此在制备植物激素抗体时，需要将小分子物质连接到大分子物质，如牛血清血蛋白上后，再注入动物体内便能够引起免疫反应，产生相应的抗体。瑞典Agrisera 公司成立于1980年，以致力于研发高品质的稀有单克隆及多克隆抗体，闻名于业界。由于其抗体主要涉及植物蛋白，因此Agrisera作为植物抗体品牌在全球具有较高的知名度。针对植物激素的定量、定位等免疫学方案，Agrisera为您准备了几十种植物激素抗体产品。优良的实验结果依赖高特异性和灵敏度的抗体。北京西美杰科技有限公司携手Agrisera公司为国内广大植物学科研工作者带来全面、优质的植物激素抗体，满足您各种植物免疫学实验的需要。
产品说明（点击查看说明书）
rabbit polyclonal to BSA-conjugated abscisic acid（ABA）
rabbit polyclonal to BSA-conjugated synthetic IAA
sheep polyclonal to salicylate
rabbit polyclonal BSA-conjugated&N6-benzyladenosine
rabbit polyclonal purified BSA-conjugated&N6-isopentenyladenosine
rabbit polyclonal purified&BSA-conjugated cis-zeatin riboside
rabbit polyclonal&BSA-conjugated trans-zeatin riboside
rabbit polyclonal BSA-conjugated dihydrozeatin riboside
rabbit polyclonal BSA-conjugated kinetin
rabbit polyclonal&purified&BSA-conjugated&meta-topolin
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Agrisera的植物抗体种类齐全，从模式植物的拟兰芥到水稻、大豆等，都有相应的种属特异性抗体供应；而从抗体种类来看，除了光合作用（叶绿体），呼吸作用（线粒体）等相关蛋白外，蛋白酶、植物病理及发育相关抗体也备受瞩目。作为Agrisera的中国区域代理，西美杰为您提供最专业和全面的植物免疫学产品及实验解决方案。北京西美杰科技有限公司携手Agrisera公司，为国内广大植物学科研工作者带来涵盖多个植物物种、满足不同科研需求的植物抗体，希望能帮助国内植物科学研究更上一层楼。如果您对上述植物蛋白抗体感兴趣，请致电010-9/到西美杰科技有限公司垂询相关产品资料。
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