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引物设计时候,关于△G方面的用Primer5设计引物时,遇到引物二聚体,交叉二聚体、发卡结构,错配等方面,△G有选择的范围吗?大概在什么范围内比较好?而且一般,△G的数值前面都有个“—”号,是放出能量的意思吗?选择时候只考虑绝对值吗?本人菜鸟一枚,
°妆雪雪81cE
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△G值是指DNA 双链形成所需的自由能,它反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性,△G值越大,则双链越稳定.实验表明,待扩区域自由能（△G°）小于58.6l kJ/mol时,扩增往往不能成功.其实这些因素确实是需要考虑的,实验表明,待扩区域自由能（△G°）小于58.6l kJ/mol时,扩增往往不能成功.但都是预测性的,也不用过分注意,有些引物设计的时候无法避免有二聚体,但是我们可以优化PCR的反应条件,基本都可以扩增出目的基因的.
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求翻译：μ L
正向和反向引物混合物（各 10 μ mol·L-1），0.2 μ L Taq DNA 聚合酶（5 U· μ L-1），2
μ L cDNA 第一链合成产物，是什么意思？
正向和反向引物混合物（各 10 μ mol·L-1），0.2 μ L Taq DNA 聚合酶（5 U· μ L-1），2
μ L cDNA 第一链合成产物，
问题补充：
a mixture of μ l forward and reverse primers (each 10 μ mol · l-1), 0.2 μ L Taq DNA polymerase (5 u · μ L-1), the μ L cDNA first strand synthesis product,
uL forward and reverse primer mixture (10 umol · L - 1) and 0.2 uL Taq DNA U polymerase (5 · uL - 1), 2- uL cDNA the first synthetic product link.
mu L forward and directs the mixture reverse (each 10 mu mol · L-1), 0.2 mu L Taq DNA polymerase (5 U · mu L-1), 2 mu L cDNA first chain synthetic product,
Μ l mixture of forward and reverse primers (10 μ mol · L-1), 0.2 μg l Taq DNA polymerase (5 u · MU L-1), the first chain 2 μ l cDNA synthesis product
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生工引物怎么稀释?用的是生工合成的引物,该怎么稀释啊?我们之前稀释的好像有问题~
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你的引物合成报告单上肯定有每OD含有的DNA的量的.一般来说,如果你定的引物是1OD的话,直接加入每OD×10倍的水,就可以得到100uM的DNA溶液.举个例子,比如你的引物是5nmol/OD的,那么加入50μL的水,可以得到100uM的DNA溶液.
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根据他们标的摩尔数稀释成50pM，你要是怀疑有问题，稀释后点样看一下，50pM应该是能看得到的。
是不是你问题写错了呀？
怎么叫生工合成的引物呢？
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我想向你请教一下PCR的问题引物的浓度一般是终浓度0.2uM。把引物稀释成10uM的，加1微升到50ul体系里头。最后用水补齐到50ul。引物的终浓度是0.2uM，怎样才能稀释到10uM？50ul的体系是什么意思？
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引物合成一般有一样随引物一起发出的引物合成单上，上面会有详细的说明，至于50微升体系是指你所有要加的试剂加起来是50微升，其中Buffer的工作浓度为1乘，另外也可以用20微升体系等进行PCR。一般你所购买的PCR试剂盒都应该有详细的说明。
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