如何用手里的显微镜搭荧光寿命成像技术系统

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仪器名称:荧光寿命成像显微镜FLIM
英文名称:Fluorescence lifetime Imaging Microscopy
国产/进口:进口
产地/品牌:荷兰/Lambert Instruments
型号:LIFA&
参考报价:
总点击数:839
本半年点击数:59
产品类别:
LIFA系列产品提供了高性能、高速度和用户容易操作的荧光寿命成像方案,整合并包含了宽场、共聚焦、高光谱和全反射等显微成像技术。
&& 高速荧光寿命成像,最快可达4帧/秒寿命成像
&& 提供新的非光毒性LED照明
&& 0-300纳秒寿命敏感度
&& 5皮秒RMS寿命精确度度
&& 选择高量子效率的Gen III GaAs增强器
&& 可灵活集成到特殊成像分析管道中
荧光寿命成像-荧光能量转移(FLIM-FRET)应用
相比其它FRET检测技术,FLIM-FRET有很多优势,主要表现在其检测强度和定量方面。还有一个优点是只检测供体荧光团的寿命,不需要测定受体的荧光团。因此受体荧光团发射率底,甚至可以消除,同时仍可得到高质量的FRET数据。所以FLIM-FREM方法更灵活、快捷和方便。
LIFA全系列
& &LIFAWidefield (宽场)
 LIFA Confocal Spinning disk (碟片共聚焦)
 LIFA TIRF (全反射)
 LIFA-P Phosphorescence Lifetime Imaging(磷光寿命成像)
 LIFA Hyperspectral (高光谱)
 LIFA-X Fluorescence and Phosphorescence Lifetime Imaging (荧光和磷光寿命成像)
产品链接: /china/图像增强技术
专注光学显微成像产品,应用领域涵盖生命科学、生物学、化学等。代理产品包括Prior Scientific显微镜自动平台、荧光寿命成像系统、显微镜活细胞培养箱、显微镜光源、热台、光学隔震平台、制冷CCD相机、高灵敏EMCCD相机、超快门控ICCD相机、制冷高速像增强型相机、科研sCMOS相机、红外相机等。
(106次)&&&
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仪器名称:荧光寿命成像显微镜系统LIFA
英文名称:Fluorescence lifetime imaging has never been easier
国产/进口:进口
产地/品牌:荷兰/Lambert-instrument
型号:LIFA&
参考报价:咨询电话:010-
总点击数:67
本半年点击数:25
产品类别:
With the Lambert Instruments FLIM Attachment (LIFA), you record quantitative lifetime data in a matter of seconds. It's easy to connect our FLIM camera and light source to your microscope. And our specialized software records the images, analyzes the data instantly and presents the results visually for easy interpretation.
Features:
▪IT'S FAST
Record fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM) data in a matter of seconds. Compared to alternative methods like time-correlated single photon counting (TCSPC), the LIFA is over 100 times faster.
▪IT'S EASY
Our advanced software instantly analyzes your data and presents the calculated fluorescence lifetimes visually. Recorded images are compatible with ImageJ, FIJI, Matlab and MetaMorph. Detailed statistical data can be exported to Excel worksheets.
▪IT'S COMPATIBLE
The LIFA is compatible with every fluorescence microscope with a camera output. This includes fluorescence microscopes by Leica, Nikon, Olympus, TILL and Zeiss, as well as confocal microscopes and TIRF microscopes.
▪OTHER FEATURES
1、Non-phototoxic illumination
2、High quantum efficiency with the optional Gen III GaAs intensifier
3、Time-lapse recording mode
4、Forster Resonance Energy Transfer (FRET) efficiency mapping
Multi-frequency acquisition for separation of multiple lifetimes
5、Polar (Phasor) plot inspection and separation of multiple lifetimes
6、Easy integration into specialized image analysis pipelines
▪COMPATIBILITY
The LIFA is compatible with several types of microscopes:
1、Widefield fluorescence microscopes
2、Confocal spinning disk fluorescence microscopes
3、Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) microscopes
4、Hyperspectral imaging system by Gooch & Housego
5、Prior filter wheels and XY stage for multi-channel acquisition
All LIFA components and the microscope hardware are shown in the illustration above
▪LIFA
Fluorescence lifetime imaging
Lifetime range: 1 - 300 nsModulation frequencies: 1 - 120 MHz
▪LIFA-P
Phosphorescence lifetime imaging
Lifetime range: 300 ns - 1 msModulation frequencies: 0 - 100 kHz
▪LIFA-X
Fluorescence and phosphorescence lifetime imaging
Lifetime range: 1 ns - 1 msModulation frequencies: 0 kHz - 120 MHz
Specifications:
▪CAMERA SPECIFICATIONS
1、Pixel resolution: 1392 x 1040 pixels
2、Spatial resolution (min.): 19 to 26* lp/mm
3、Dynamic range: 12 bit
4、Effective pixel size: 10.3 μm
4、Equivalent background input: 0.25 μlx
* 19 lp/mm for GaAs and GaAsP photocathodes. 26 lp/mm for S20 and S25 photocathodes.
▪LIFETIME SPECIFICATIONS
1、Lifetime resolution:&& 100 ps
2、Lifetime range: 0.1 ns - 1 ms
3、Framerate (max.): 2 lifetime images per second
▪COMPONENTS
The LIFA system consists of threemain components:
1、LIFA: the signal generator that synchronizes the lightsource and the camera
2、TRiCAM: an intensified CCD camera that records the lifetime images
3、Light source: high-stability modulatedMulti-LED&or&Multi-LASER
努美(北京)科技有限公司
Add:北京市石景山区石景山路乙18号万达广场C座1317室&P.C:100040
Tel: 010-
Fax: 010-977
努美(北京)科技有限公司(NMERRY)是一家集光学、精密机械、电子、计算机技术于一体的科技企业。公司以客户需求为导向,为客户创造价值的核心理念、悉您所需、为您所用,以客户对产品的功能需求为提供解决方案。我们围绕客户的需求持续创新、为合作伙伴创造最大价值。
努美主要制造产品:积分球、光谱测量系统、均匀光源、光学平台、定制光学平台等光电仪器元件。
努美主要代理产品:Hyspex(高光谱成像)、TELOPS(高光谱成像)、Voxtelopto(高灵敏度探测器)、DECTRIS(X-Ray探测器)、labsphere(进口金分球系统)、Crystaler(激光器)、QIOPTIQ(激光器)、COHERENT(激光器)、OPHIR(激光测量)、Otsuka(超快光纤光谱仪)、SVC(地物光谱仪)、HORIBAJobinYvon(JY光谱仪)、McPherson(紫外光谱仪)、Avantes(光纤光谱仪)、lambertinstruments(荧光成像系统、ICCD)、D&Pinstruments(红外光谱辐射计)、InfraTec(红外热像仪)、SBIR(黑体)、ISDC(黑体)、TMC(光学平台)、Meilitz(光学平台)、Spectrogon(红外滤光片)、Semrock(荧光滤光片)、ASAHI-SPECTRA(紫外滤光片)、Ross(光学镜片)、BARR(滤光片)、SIGMAKOKI(光机械)等光电仪器元件。
公司本着&精诚致业、诚信为本、追求卓越&的宗旨,崇尚&人文情怀&的管理思想,追求服务、诚信、专业的经营理念,博众之长、补己之短使公司更加完善。我们以专业和创新的理念,在高校、科研、企业都拥有丰富的项目实施经验,已完成全国多个项目。为客户提供高质量的产品和优质的售后服务。
努美科技希望国内外同仁共携手合作,为推动行业发展和个人价值不断努力奋斗,迎接美好明天。
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中国生物器材网 电话:021-荧光显微成像在生物分析中的应用
发布时间:[ 16:00:21]
论文摘自山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南 250014
摘 要 荧光显微镜与荧光光谱仪耦合系统可获取显微荧光成像及微区荧光光谱、荧光寿命的测定信息,广泛应用于细胞、组织中蛋白质的结构功能分析,核酸的识别检测,金属离子、自由基的定量测定,以及纳米生物探针的研制等生物分析研究的热点领域。
1 引 言荧光显微镜在生物学和医学领域已得到了广泛应用,是观测细胞形态、结构和生命现象的有力工具。荧光显微镜作为一种必不可少的分析手段,常用于定性观察细胞内部荧光物质的空间分布和强度分布,得到细胞的荧光图像,研究细胞的结构。然而荧光显微镜不能定量给出图像发光的强度数值,无法研究细胞图像发光强度变化不大或荧光物质空间分布变化细微的生理过程。因此,随着生物医学的飞速发展,迫切需要有更高灵敏度,操作更快捷,功能更加完备的仪器来满足生物学和医学研究发展的要求。荧光显微镜与荧光光谱仪耦合而成的系统仪器能够获取显微荧光成像及微区荧光强度、荧光寿命的测定信息。选择荧光探针对被标记物进行特异性标记,荧光探针的亮度即荧光强度可反映被标记物相对含量的多少。荧光显微镜对图像采集后,荧光光谱仪可测量图像的荧光强度,对获取的图像进行荧光强度的定量,为全面分析和研究细胞内部结构提供更加详尽的数据信息。
2 荧光显微镜与荧光光谱仪耦合系统及特点应用单臂光纤连接荧光显微镜与荧光光谱仪,实现荧光光谱测量和细胞实时成像二维信号的同时采集。以高频脉冲激光器作为激发光源激发显微镜下样品,使之发射出可见范围内的波长,呈现荧光映像。用荧光显微镜的物镜收集信号,通过单臂光纤将耦合好的荧光信号从荧光显微镜传导至荧光光谱仪,记录荧光发射光谱。电感耦合相机(charged coupled device,CCD)摄像系统作为光电传感器用于显微镜图像获取技术采集细胞图像,并将图像信号转换成电信号输入计算机进行数据读取及图像处理,获取微区荧光光谱扫描谱图的详细信息,并对图像进行采集、曝光调整、多色彩空间的影像编辑、预定义的影像设置、自动调焦、自动后处理加工调整,获得色彩鲜艳、清晰度高的影像。应用光纤耦合荧光光谱仪与荧光显微镜,配合荧光图像扫描显微荧光光谱及进行微区荧光寿命的测定(超高时间分辨率,可得到复合物中不同组分的荧光寿命),优化升级了作为单一仪器的功能。红敏光电倍增管(PMT)和红外PMT 切换使用满足超宽光谱范围探测(200 ~1700 nm),适合从紫外到近红外波段荧光光谱的特性研究,为生物体系中近红外荧光探针的开发应用研究提供了有力的支持。
3 生物分析中的应用荧光探针是设计用来进行生物标本特定区域内定位或对特定刺激反应的荧光团,可以高度敏感性和选择性的检测复杂生物分子及活细胞中的特定成分。相对于常规荧光检测而言,在近红外光区,生物基体光吸收或荧光强度很小,且致密介质(如组织)的光散射明显降低,激发光的穿透性更强,因而自发荧光的背景干扰显著降低。荧光探针由于其特殊的光物理和光化学特性而具有灵敏度高、动态响应范围宽的优点,且其测定条件适宜生命体的生理环境而被广泛地应用于生命科学研究领域。设计近红外荧光探针引入组织和细胞,富集在组织和细胞的特定成分中,在荧光显微镜下不仅可观察固定的细胞、组织切片,还可对活细胞的结构、生物大分子等进行实时观察和检测,配合荧光光谱仪获取荧光图像的量化信息。因此,荧光显微镜与荧光光谱仪耦合系统在生物分析领域中将具有广泛的应用前景。
&蛋白质结构和功能分析及核酸的识别检测
生物体内细胞的生理状态受内部和外部因素的影响,可通过基因表达和后续的蛋白质表达表现出来。因此,蛋白质的结构与功能研究是认识生命过程的关键。活细胞内蛋白质的显微荧光成像分析是生物显微技术的一个重要方面。Dawn 等成功设计合成了活细胞中定点标记N 端为半胱氨酸蛋白质的一系列荧光分子探针。这种荧光分子探针利用生理条件下含硫代酸酯的小分子可有效穿过细胞膜与 N 端为半胱氨酸的蛋白质进行化学选择性反应产生荧光,跟踪检测蛋白质的功能及相互作用。利用荧光显微镜观察了探针标记细胞的显微荧光成像,根据荧光光谱确定探针的发射波长处于近红外波段,适用于活细胞中蛋白质的荧光成像分析检测。
生命活动离不开酶的催化作用,机体内的物质代谢在酶的催化下有条不紊地进行。酶是由活细胞合成的,是能够对特异底物起高效催化作用的蛋白质。基于荧光的酶分析方法随着酶荧光探针的开发得以广泛应用,荧光显微镜常用于检测荧光酶细胞化学的作用。为了研究某些细胞内的生理过程,经常将荧光共振能量转移(FRET)与荧光显微技术结合起来。Mupam 等就通过荧光显微镜、CCD 和荧光光谱仪来进行完整细胞中 FRET 发生的定位,将细胞内的理化反应研究提高到细胞器的水平。Chi-wang等利用 FRET 工作原理设计的荧光探针包括一个对已知蛋白激酶特异性识别的底物结构域,一个与磷酸化丝氨酸底物结构相结合的磷酸化识别结构域。当底物结构被磷酸化后,分子内部就会发生磷酸化识别结构域与其结合而引起的内部折叠,探针两端两个荧光蛋白相互靠近就会发生能量转移。荧光光谱提供分子发生磷酸化前后的荧光强度变化,荧光显微镜获得 FRET 成像反映供体蛋白与受体蛋白之间的相互作用,做到活细胞内定时、定量、定位地观测蛋白激酶活性变化。
核酸是生命的信息物质,对蛋白质的合成、细胞分裂和复制以及生物遗传起着重要作用。荧光探针技术具备方法简便,灵敏度高等优点,结合荧光显微镜应用于核酸的定量分析、结构及作用机理的研究日益广泛。分子信标作为敏感、特异的核酸探针,通过空间结构改变决定发射荧光特性,实现活细胞中核酸的定位信息采集及定量检测,利用分子信标技术可以对生物大分子在活体内的代谢等动态过程进行跟踪分析。Santangelo 等设计了一对与待测目标 mRNA 序列互补的新型分子信标,制成脂质体使之摄入细胞,与目标 mRNA 杂化时产生 FRET,较之单一分子信标有效抑制了主动错误信息的检出,灵敏定量检测目标 mRNA。应用显微注射法注入活体细胞获取荧光显微成像,检测荧光强度实时反映活体 RNA 的代谢转移过程。(更多信息请访问官网)
广州市精谱徕电子科技有限责任公司荧光寿命成像原理及应用_
荧光寿命成像原理及应用
&&&寿命是指分子受到光脉冲激发后返回基态之前在激发平均停留的时间,处于激发态的荧光分子在从激发到基态的过程中发射荧光释放能量。荧光寿命取决于荧光分子所处的微环境,通过对样品荧光寿命的测量和成像可以定量获取样品的功能信息。
&&& 荧光寿命成像技术有两种:时间域和频率域。
&&& (1)时域FLIM:需要脉冲光源,所以一般在双光子的系统上比较常见FLIM(荧光寿命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy简称FLIM),理由一是激光是脉冲的,二是买双光子的老师一般也搭配一个FLIM。如果是在单光子系统上的话,就需要买可见光波段的pulsed laser了。光路调节也是一个问题,提供的厂家一般是Becker&Hickl,和PicoQuant,德国公司。这个方法比较流行,也有很多系统。
&&& (2)频域FLIM:需要一个相位调制的光源,有用LED调制的,荷兰的Lambert-Instrument就有这样一套产品,是在wide-field的荧光显微镜上搭的,也有在共聚焦上的。
&&& FLIM对很多研究都有帮助,只是在生物领域的影响力不大,都是一些物理背景的科研人员在做。觉得用FLIM-FRET的方法得出结果,比单纯intensity FRET拿到的数据可靠得多。
&&& 以下为荧光寿命成像FLIM的应用:
&&& 1)细胞体自身荧光寿命分析;
&&& 2)自身荧光相对荧光标记的有效区分;
&&& 3)具有相同频谱性质的不同荧光标记的区分;
&&& 4)活细胞内水介质的PH值测量;
&&& 5)局部氧气浓度测量;
&&& 6)活细胞内钙浓度测量;
&&& 7)时间分辨Forster共振能量转移(FRET):纳米级尺度上的远程测量,环境敏感的FRET探针定量测量。}

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