技术解析：ELISA实验设置阴性、阳性和空白对照的重要作用
ELISA检测，要求严格按照试剂说明书要求，每次试验、每块扳上都要设置以下3项对照和用途下面我司技术为您详细介绍ELISA实验设置阴性、阳性和空白对照的作用： 1．空白对照：仅用稀释液代替检测样本、用以观测最终反应的显色“本底”、并用于酶标仪消除、扣除“本底”，即：以本底为“零”读取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的吸光值（A）；或者，在计算阴性对照均值（NCx）、阳性对照均值（PCx）、样本读数的S/C.O.值时减去空白对照的本底吸光值。& 2．阴性对照（品）：所谓阴性对照（品），应当是本项检测试验中采用与待捡物（样品、人用试剂就是人的血清等）具有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素（血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反应）之间的差异。&&&&&&&&&&&&&&&&& 3．阳性对照（品）：& （1）阳性对照（品）的概念与要求：同阴性对照（品），只是采用“精选”的含有待检物质的人血清制备而成。所谓“精选”，就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试”、把含有“干扰性物质”的血清剔除、不用，以避免出现“假阳性”干扰试验结果。&& （2）阳性对照（品）设置，也可区分为两种类型与用途：& 一是阳性对照主要用于评价该项试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性。而所设的阳性对照的测量值不列入Cut off值计算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。& 二是阳性对照的设置，不仅用于评价试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性，而且计入Cut off的计算。此时的Cut off值的含义是代表该标志物在健康（正常）人群中正常值范围的上限。待检样本检测值超过该上限（Cut off）时表示有诊断意义。
@中国安防展览网AFzhan
扫一扫，官方微博互动多
微信号：AFzhan
扫一扫，安防讯息尽收眼底
全年征稿 / 资讯合作
联系邮箱：
更多相关信息
版权与免责声明
①凡本网注明"来源：中国安防展览网"的所有作品，版权均属于中国安防展览网，转载请必须注明
中国安防展览网。违反者本网将追究相关法律责任。
②企业发布的公司新闻、技术文章、资料下载等内容，如涉及侵权、违规遭投诉的，一律由发布企业
自行承担责任，本网有权删除内容并追溯责任。
③本网转载并注明自其它来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内
容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，
必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。
④如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
免费注册后，你可以
了解安防行业更多资讯
查看安防行业供求信息
凸显安防行业自身价值
想快速被买家找到吗
只需要发布一条商机，
被买家找到的机会高达
90%！还等什么？
大中型网络IPC如果出现摄像头延迟、图像时常掉线、隔几天就出现问题等一系列有关
选择和使用PoE交换机时几大注意点
住宅建筑对火灾自动报警系统的设计有哪些要求？
8招帮你延长楼宇对讲使用寿命
安通瑞达教你在不同场所怎样选择电子围栏
深圳捷顺通车牌识别功能详解
智慧家庭中的无线门禁系统解决方案
如何选择合适的无线AP?
从交换机看为什么视频会卡顿
10月28日，两年一届的北京?中国国际社会公共安全产品博览会隆重落幕。本次安博会
景阳科技：不断拓展细分 在行业中走出自己特色
为实战而生 科达猎鹰落实“机器识图”最后一公里
凯韵电子：提供给客户创造价值的服务
立林杨旭：开放心态面对市场 新“蛋糕”会更美味
红苹果：在未来发展道路上不断积极探索
质量为王服务为先 环宇通专注对讲领域不断推陈出新
引领＋创新 慧锐通以创造价值为核心稳步前行
丰润达：十年发展激流勇进不畏竞争
　　探索行业发展趋势，记录企业点滴变化。由权威媒体中国安
　　10月25-28日在北京召开的2016年中国国际社会公共安全产
中国安防展览网主办、广州市思正电子科技有限公司独家冠名的
改革&创新&共赢，中国安防展览网主办，广州市思正
将安防&智慧理念&进行到底，&2016智慧安
中国国际智慧教育展览会是中国首个专注教育信息化的专业展会
2016广州国际智能家居&智能硬件展览会【全智展】
2017中国（广州）国际商业智能防盗系统及智能柜、存储柜展览会
2017第二届广州国际智能家居展览会
2017中国（杭州）国际社会公共安全产品与技术博览会 上传我的文档
 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
ELISA设置阴性、阳性、空白对照涉及实验结果有效性评价
下载积分：1500
内容提示：ELISA设置阴性、阳性、空白对照涉及实验结果有效性评价，阴性对照和阳性对照，阴性阳性是什么意思，rpr阴性tppa阳性，阳性对照，怀孕是阴性还是阳性，阴性对照，阴性和阳性是什么意思，阳性水草和阴性水草，阳性和阴性的区别
文档格式：DOC|
浏览次数：14|
上传日期： 13:57:01|
文档星级：
该用户还上传了这些文档
ELISA设置阴性、阳性、空白对照涉及实验结果有效性评价
官方公共微信ELISA实验设置阴性、阳性和空白对照的作用_ELISA_中生网
&>&&>&&>&ELISA实验设置阴性、阳性和空白对照的作用
一．ELISA试验有效性与三项对照 什么是“有效性”（Validity）？要获得准确的检测结果“有效性”评价，就会关系到：为什么要设置“阴性、阳性和空白”等不可缺少的三项对照？要用什么样的物质担当“阴性、阳性和空白对照（品）”？这“三项对照”如何设置、需要设置几个孔位？获得的测定值如何“认可、取舍与计算”？随后，又如何依照阳性对照均值（PCx）与阴性对照均值（NCx）的差值（P-N，或N-P）大小做出“试验结果有效性”的最终裁决呢？…等等，这一连串的问题，在国外“正规”品牌的ELISA试剂《使用说明书》中都有明细和详尽的说明。既有理论要点提示，又有具体细致的举例解说。很可惜，在90年前后，国内兴起ELISA检测热潮之际，在一片“国外试剂说明书太详细、太复杂、不容易看明白、…”等等“一片埋冤”声中，正好迎合国内商家的“意愿”。从此以后，国产ELISA试剂的说明书，越来越简单。这其中商家就有两个“好处”：好处之一，用A4、或B5，甚至比B5还要小的一张纸，代替国际试剂的好几页的“使用说明书”（等同于一份“操作手册”），每年就可节省一大笔印刷成本费；好处之二，如同国际试剂说明书上向用户交待的各种表明本试剂质量有关的详尽内容，国产试剂的所谓“说明书”上统统可以“删除、回避、拒绝”向用户通报和承诺。我90年前后收集的&美&雅培、&法&巴斯德、&荷&阿克苏等相关试剂的原文说明书，几经搬动全都处理，很是可惜。近日，杭州检疫局朋友送了一份生物梅里埃中国有限公司的中文版《人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）使用说明书》。对照阅读之下，深深感到这才是一份真正意义上的《使用说明书》呀！在我下文提到的若干“概念、问题”，从中都可以找到答案。我现在参照我本人1993年的《肝炎ELISA试剂质量与检测结果有效性评价》会议讲稿相关内容，就“三项对照与检测结果有效性”表示如下认识和讨论。 二．三项对照要求与用途 ELISA检测，按照试剂说明书要求，每次试验、每块扳上都要设置以下3项对照和用途：&& 1．空白对照：仅用稀释液代替检测样本、用以观测最终反应的显色“本底”、并用于酶标仪消除、扣除“本底”，即：以本底为“零”读取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的吸光值（A）；或者，在计算阴性对照均值（NCx）、阳性对照均值（PCx）、样本读数的S/C.O.值时减去空白对照的本底吸光值。早年的酶标仪无自动扣除空白对照孔读数功能，这种酶标议现已淘汰不用了，写上这段话的意思是补充说明设置空白对照的用途。空白孔具体如何读取读数，则依照说明书操作。例如，生物梅里埃中国有限公司的中文版《人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）使用说明书》上提示：以空气读空白（不放板架和板条），在450nm（单波长）、或450nm和620―700mn（底物是TMB）参考波长进行读数。& 2．阴性对照（品）：& （1）阴性对照（品）的概念与要求：所谓阴性对照（品），应当是本项检测试验中采用与待捡物（样品、人用试剂就是人的血清等）具有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素（血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反应）之间的差异。因此，用动物血清或其制品（如牛血清白蛋白等）代替阴性人血清作为对照品，从理论和实践上都是不可取的，弊端甚多，无须细述。注意：据我所知，国产ELISA试剂中，有的厂牌是用动物血清制品稀释配置、或与部分人血清混合配置的；其二，阴性对照读数，并非是“越低越好”。NCx值接近0.00X水平，这是假象！试想一下，真正采用“阴性人血清”的阴性对照品，NCx值会如此之低吗？举个例子，雅培乙肝六项EIA试剂的NCx值，分别为：0.010（HBsAg）、0.027（抗―HBs）、0.035（HBeAg）、1.083（抗―HBe）、1.065（抗―HBc）、0.045（抗HBc-IgM）。生物梅里埃的HIV试剂NCx是0.091。辨别试剂NCx值是否合理的一个很简单的方法，只要对比大量阴性样本的实际读数就“一目了然”啦！& 一个题外插曲：表明ELISA试剂内在质量的一个重要统计标志，就是要看：阴性样本的的上限不应当大于、必须小于C.O.I.=1.00；反之，阳性样本的的下限不可小于、应当大于C.O.I.=1.00！早年我用SPSS软件输出阿克苏HIV和国产甲、乙试剂检测600例左右的健康人体检血清的三幅直方图，可以表明阴性样本的不同分布特征，颇有意思。&&& 我为什么要如此细说NCx呢？因为NCx值在Cut&off值计算中是相当举足轻重的（详后）。&（2）阴性对照（品）分为两类& 一是代表受检人血清中并不含有、或方法学灵敏度未能检出的待检物的基准水平，并且是结果判断值（Cut&off）计算式中决定“是”（阳性）、或“否”（阴性）的唯一可变值。阴性对照值高，导致假阴性；反之，导致假阳性。如：HBsAg、HBeAg、抗―HBc等。二是阴性对照设置，在方法学上要求加入指示性定量标准品，如中和剂HBeAg，定量HBcAg等，用以检测抗―HBe、抗―HBc。或者，选取代表平均水平的正常人血清用作阴性对照，如检测抗―HBc&IgM。此类Cut&off&值计算时，多数均包括阴性和阳性对照值2个可变值。&&&&&&&&&&&&&&&& 3．阳性对照（品）：& （1）阳性对照（品）的概念与要求：同阴性对照（品），只是采用“精选”的含有待检物质的人血清制备而成。所谓“精选”，就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试”、把含有“干扰性物质”的血清剔除、不用，以避免出现“假阳性”干扰试验结果。&& （2）阳性对照（品）设置，也可区分为两种类型与用途：& 一是阳性对照主要用于评价该项试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性。而所设的阳性对照的测量值不列入Cut&off值计算、但是不可不做。如HBsAg、抗―HBs、HBeAg等。& 二是阳性对照的设置，不仅用于评价试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性，而且计入Cut&off的计算。此时的Cut&off值的含义是代表该标志物在健康（正常）人群中正常值范围的上限。待检样本检测值超过该上限（Cut&off）时表示有诊断意义。例如抗―HBe、抗―HBc、抗―HBc&IgM等。
读完“ELISA实验设置阴性、阳性和空白对照的作用”您的评价是：
上一篇：下一篇：
热门ELISA文章 12345678910
ELISA最新文章
&&中生网-提供生物软件免费下载，生物实验Protocol，生物网址导航。版权所有。
Copyright& All Rights Reserved.&&室内质控论坛-ELISA阴性、阳性、空白对照设置_中华文本库
第2页/共5页
ELISA检验结果有效性与统计控制图讨论—01
2的上限不应当大于、必须小于C.O.I.=1.00；反之，阳性样本的[Xbar+/-3s]的下限不可小于、应当大于
C.O.I.=1.00！早年我用SPSS软件输出阿克苏HIV和国产甲、乙试剂检测600例左右的健康人体检血清的三幅直方图（附图3—1），可以表明阴性样本的不同分布特征，颇有意思。
我为什么要如此细说NCx呢？因为NCx值在Cut off值计算中是相当举足轻重的（详后）。
（2）阴性对照（品）分为两类
一是代表受检人血清中并不含有、或方法学灵敏度未能检出的待检物的基准水平，并且是结果判断值（Cut off）计算式中决定“是”（阳性）、或“否”（阴性）的唯一可变值。阴性对照值高，导致假阴性；反之，导致假阳性。如：HBsAg、HBeAg、抗—HBc等。
二是阴性对照设置，在方法学上要求加入指示性定量标准品，如中和剂HBeAg，定量HBcAg等，用以检测抗—HBe、抗—HBc。或者，选取代表平均水平的正常人血清用作阴性对照，如检测抗—HBc IgM。此类Cut off 值计算时，多数均包括阴性和阳性对照值2个可变值。
3．阳性对照（品）：
（1）阳性对照（品）的概念与要求：同阴性对照（品），只是采用“精选”的含有待检物质的人血清制备而成。所谓“精选”，就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试”、把含有“干扰性物质”的血清剔除、不用，以避免出现“假阳性”干扰试验结果。
（2）阳性对照（品）设置，也可区分为两种类型与用途：
一是阳性对照主要用于评价该项试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性。而所设的阳性对照的测量值不列入Cut off值计算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。
二是阳性对照的设置，不仅用于评价试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性，而且计入Cut off的计算。此时的Cut off值的含义是代表该标志物在健康（正常）人群中正常值范围的上限。待检样本检测值超过该上限（Cut off）时表示有诊断意义。例如抗—HBe、抗—HBc、抗—HBc IgM等。
三．阴性与阳性对照平均值计算与判断
1．阴性对照平均值NCx有效性计算判断举例：
（1）第一类NCx计算与评价：以HBsAg为例
Ⅰ. 设置3孔的NCx计算：NCx=（0.011+0.010+0.090/3=0.010
Ⅱ. 任一个NC值应≤0.100至≥－0.010；
Ⅲ. 各NC值也应介于≥0.5×NCx至≤1.5×NCx之间。此时各孔的NC值均处于NCx±0.006范围内，其中遇有一孔NC值偏离该范围时，则弃去该NC值，再计算NCx。如有2孔NC值超出该范围时，本次试验应予复试。
Ⅳ. 不同厂牌对NCx的具体要求略有不同，但总的原则几为一致，如[法]巴斯德HBsAg EIA Kit。
（2）第二类NCx计算与评价：可包括抗—HBc、抗—HBe。以抗—HBc、抗—HBe为例：
Ⅰ. 取3孔阴性对照A值的平均值：
NCx=（1.027+0.989+1.278）/3=1.065
NCx=（1.169+1.088+0.993）/3=1.083；
请各位注意：这2个NCx是不是很接近1.00呀？也就是说，十分接近C.O.I.（S/C.O.，或A/C.O.）
第2页/共5页
寻找更多 ""双抗体夹心法实验报告为何要设计空白组和阴性对照组-技术文章-上海沪鼎生物科技有限公司
<img id="zhantai_logo" src=/1/843402.jpg alt=上海沪鼎生物科技有限公司 onload="120<=this.width?this.width=120:this.90
上海沪鼎生物科技有限公司
大鼠elisa试剂盒,小鼠elisa试剂盒,试剂盒价格,进口标准品,标准品价格
&您所在位置：首页 &
& 双抗体夹心法实验报告为何要设计空白组和阴性对照组
请输入产品关键字：
上海沪鼎生物科技有限公司
地址：上海市松江区新桥工业园区16号306室
邮编：201612
联系人：钱经理
电话：400-832--31071传真：86-021-手机：,留言：个性化：
双抗体夹心法实验报告为何要设计空白组和阴性对照组
&&&&&& 双抗体夹心法是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。&&&&& 这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位，因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用，而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之类的抗原测定。我们用在霍乱肠毒素的测定。HbSAg及HbS的测定。&&&&& & 在昨天上午上班没多久钱经理在&QQ在线&上看到了这样一个问题：双抗体夹心法实验报告为什么要设计空白组和阴性对照组？钱经理马上为这位客户解决了这个问题：&&&&& 设计空白组和阴性对照组是为了保证通过双抗夹心法检测到的信号确实是来自于目标目标蛋白。空白组，只加缓冲液，看板子或者是液体有没有引入背景，如果有一些，可以用样品信号值减去空白组的值，算出具体的信号值。&&&& &阴性对照，则是不加样品，其他都和样品组一样，这样的话，如果有信号，肯定是非特异反应引起的。&&&&& 有了这些对照就可以看出来样品的检测是否正确了。&&&&& 上海沪鼎承诺无论您是否购买我司的产品，只要您向我们提出了您的疑虑我们都会以最真诚的态度为您解决难题。
中国化工仪器网 设计制作，未经允许翻录必究.Copyright(C)
, All rights reserved.
以上信息由企业自行提供，信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责，中国化工仪器网对此不承担任何保证责任。
温馨提示：为规避购买风险，建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。
扫一扫访问手机站}