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【求助】生物素和亲和素结合后如何分离却不影响生物素标记分子？急！
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这个帖子发布于6年零167天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教各位大侠：1、PCR反应体系中有生物素标记的引物，扩增产物中生物素被标记没？2、生物素标记分子与亲和素结合后，如何将其分离但是不影响标记分子自身？有资料说可用盐酸胍，不知道可以不？
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Dynal网站上有下面的方法：Release of Immobilized Biotinylated Molecules:The biotin-streptavidin bond is broken by harsh conditions. 5 mins incubation at 65°C or 2mins at 90°C in 10 mM EDTA pH 8.2 with 95% formamide will typically dissociate &96% of immobilized biotinylated DNA. It has also been reported that the biotin-streptavidin interaction can be broken by a short incubation in non-ionic water at a temperature above 70°C.下面是一篇参考文献：Holmberg A, Blomstergren A, Nord O, et al. The biotin-streptavidin interaction can be reversibly broken using water at elevated temperatures. ELECTROPHORESIS. ):501-510.AbstractThe biotin-streptavidin system is the strongest noncovalent biological interaction known, having a dissociation constant, Kd, in the order of 4×10-14 M. The strength and specificity of the interaction has led it to be one of the most widely used affinity pairs in molecular, immunological, and cellular assays. However, it has previously been impossible to re-use any streptavidin solid support, since the conditions needed to break the interaction with biotin has led to the denaturation of the streptavidin. Here, we show that a short incubation in nonionic aqueous solutions at temperatures above 70°C can efficiently break the interaction without denaturing the streptavidin tetramer. Both biotin and the streptavidin remain active after dissociation and both molecules can therefore be re-used. The efficiency of the regeneration allowed solid supports with streptavidin to be used many times, here exemplified with the multiple re-use of streptavidin beads used for sample preparation prior to automated DNA sequencing. The results suggest that streptavidin regeneration can be introduced as an improvement in existing methods and assays based on the streptavidin system as well as emerging solid phase applications in fields, such as microfluidics and nanotechnology.
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如果实验成功的话，分享一下，我可能也要做这方面的实验，谢谢
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我查到一篇中文文献（1991年，病毒学杂志），[生物素-亲和素结合作用是不可逆的，只有在高温（120°C，15min）下才能在盐溶液中完全解离，另外，在6 M盐酸胍中也可解离].此外，生物素标记引物，经pcr扩增后，pcr产物中有没有生物素标记？在什么条件下能使标记的生物素解离？谢谢！
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既然不可逆怎么还可以解离？许多化学反应都是可逆的，并且这里还没有发生化学反应。中文文献就不要看了，基本没有什么价值。引物是生物素标记的，以标记引物延伸得到的产物含有生物素标记。生物素和亲和素解离的方法在前面的回复中有，不过没有亲自做过，你可以试试。
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【求助】生物素标记蛋白
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这个帖子发布于9年零149天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
生物素标记蛋白原理？是不是只结合赖氨算的氨基啊？望各位指教？？
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给大家点资料参考一下！生物素（biontin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244．31kD．生物素分子有两个环状结构（图 11-1），其中Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要郎部位；II环为噻吩环，Ｃ２上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的惟一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素①标记蛋白质氨基的活化生物素 ②标记蛋白质醛基的活化生物素 ③标记蛋白质巯基的活化生物素1.标记蛋白质氨基的活化生物素
此种活化生物素的制备方法是将生物素与Ｎ－羟基丁二酰胺在碳二亚胺的作用下进行缩和，生成生物索素Ｎ－羟基丁二酰亚胺酯（biotiny-N-hydroxy-succinimide，BNHS）。BNHS分子酯健中的-C=O基团可与蛋白质分于中赖氨酸的氨基形成肽键，从而使蛋白质标记上生物素。若蛋白质含赖氨酸残基多，且等电点PI＞6时，标记效果好。因此，BNHS适用于对抗体和中性或偏碱性抗原的生物素标记。2.标记蛋白质醛基的活化生物素
用于此类标记的活化生物素有两种：生物衰酰肼（biotin hydrazine，BHZ）和肼化生物胞素（biocyin hydrazine，BCHZ）。BHZ是水合肼（hydraine hydrate）与生物素的合成物，主要用于偏酸性糖蛋白的生物素标记。也可在BHZ侧链上添加一个赖氨酸基团作为连结臂，减少标记后的空间位阻，使活化后的生物素能更好地与亲和素结合。
生物胞素（biocytin）是生物素通过-C=O基与赖氨酸的ε－氨基连接而成的化合物，它与无水肼反应后形成的肼化物即为肼化生物胞素（biocytin hydrazine，BCHZ）。BCHZ除可与蛋白质的醛基结合外，它还与BNHS相同，能与蛋白质的氨基结合，因此其适用范围较BHZ宽。3.标记蛋白质巯基的活化生物素
３-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素[3-（N-maleimido-propiny）-biocytin，MPB]是能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素试剂。它是用氯化生物胞素与3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-N-BNHS在二甲基甲酰胺（DMF）溶液中反应后制得的。:)
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生物信息培训班推荐( ）生物素标记一抗问题(一抗,生物素标记,二抗,生物素) - 免疫实验 - 生物秀
标题: ( ）生物素标记一抗问题(一抗,生物素标记,二抗,生物素)
摘要: [( ）生物素标记一抗问题(一抗,生物素标记,二抗,生物素)] 我做血管的石蜡切片Fibronectin 免疫组化染色,一抗Rabbit polyclonal to Fibronectin (Biotin),编号ab6584,ABCAM公司的 自身带了生物素,也就是不用加二抗 但效果不佳 其说明书上 Compatible Secondaries for Fibronectin antibody ab2892
Goat polyclonal to mouse 关键词:[一抗 生物素标记 二抗 生物素 免疫组化 石蜡切片 血管]……
我做血管的石蜡切片Fibronectin 免疫组化染色,一抗Rabbit polyclonal to Fibronectin (Biotin),编号ab6584,ABCAM公司的.自身带了素,也就是不用加二抗.但效果不佳.其说明书上 Compatible Secondaries for Fibronectin antibody ab2892
Goat polyclonal to mouse (AP) + rabbit (HRP) IgG double stain - predil ab6564
Goat polyclonal to Rabbit IgG H&L (Cy5) ab6717
Goat polyclonal to Rabbit IgG H&L (FITC) ab6720
Goat polyclonal to Rabbit IgG H&L (biotin)现在搞不明白了,可不可以加二抗呢?有何影响呢?
回复“自身带了素”，,也就是生物素标记的，由于其标记部位在Fc端，会影响的连接。
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【求助】有谁用过生物素标记的流式抗体及链霉亲和素标记的荧光素吗
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问题已关闭悬赏丁当:2
在BD的流式抗体中有直接标记荧光素的，例如CD3-FITC，但是也有生物素标记的CD3与链霉亲和素标记的FITC配套使用，请问CD3在细胞表面属于高表达的抗原，为什么还要用生物素-链霉亲和素来进行级联放大呢？另外，采用直接标记的抗体可以同时检测几种CD分子，但是生物素标记的抗体一次反应是不是只能检测一种CD分子？这样它的优势在哪里？多谢！
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不光是放大用途。可以降低非特异的信号，另外这样的二抗也降低抗体使用成本，便于实验室构建多层次的抗体使用方案。这就和那些使用各种荧光二抗是一样的。
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谢谢kcno，可是这样就不能在一个样品管中同时检测两种或以上的表面分子，只能单独检测每种表面分子，这与普通抗体同时检测几种分子结果一致吗？
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