乙醇沉淀法回收微量DNA效率的研究--《湖北大学学报(自然科学版)》1991年03期
乙醇沉淀法回收微量DNA效率的研究
【摘要】：本文研究了浓度、温度、时间和携带DNA等因素对乙醇沉淀法回收微量DNA效率的影响。结果表明:1.回收效率与DNA浓度呈正相关。2.添加携带DNA能提高低浓度DNA的回收效率,浓度越低,增加比例越大.3.超低温(-70℃)、长时间(12h)冷冻处理,对回收效率无明显影响,在室温(+20℃)或低温(-20℃)下放置2～30min同样可获得较高的回收率。
【作者单位】：
【关键词】：
【正文快照】：
在很长一段时间里,一般都认为乙醇沉淀法回收DNA需经超低温(一70C)长时间(12～24h)冷冻处理“-刁。但是也有人发现这些条件对沉淀DNA并不一定是必需的[‘-SJ。近年来,在作质粒的小量抽提时,我们甚至不作低温冷冻,在室温下加沉淀剂后就直接离心,也得到了很理想的结果。这种方
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【引证文献】
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京公网安备75号dna的沉淀是否看得见在抽提DNA时,有一步是用无水乙醇沉淀DNA,沉淀出来的DNA是否看得见?那些看得见的沉淀是什么?
其实,纯净的DNA沉淀和质粒沉淀是很难观察到的,因为他们成透明色,乙醇沉淀的接近乳白色的是蛋白沉淀,不过,一般情况下,这些不会影响后续操作
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看的见 可以称之为DNA晶体吧
可以看得见的！我上周刚刚做完这个试验的。是一种淡黄色、粘稠的、略带红色血丝的一团物质。其中大部分是DNA，小部分是蛋白质等杂质。
大于500ng就能看到了楼上的绝大多数是蛋白，经过酚氯仿抽提以后无水乙醇沉淀 12000rpm离心得到的白色物质就是DNA，干了以后半透明呈现鼻涕状。
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关于胶回收后乙醇沉淀纯化的问题
我用胶回收试剂盒回收到产物后，用nanodrop测浓度和纯度，浓度在20纳克每微升，测出来的纯度也很低，因为下游实验是4个2000bp的片段进行重组pcr和同源重组到载体上，怕纯度会影响到实验成功率，所以想用乙醇沉淀法纯化浓缩一下。方法是1/10的pH5.2 3M的醋酸钠和3倍体积冷无水乙醇在-20沉淀30分钟，然后4度离心20分钟，倒上清，加75%乙醇摇匀，静置2分钟，4度离心20分钟，再倒上清，通风橱干燥至无乙醇气味，加dd溶解。问题来了:测结果显示有的浓度没有变化，有的甚至是负值。想请教各位什么原因，另外在两次离心倒上清的时候，根本没有沉淀，所谓倒上清就是把EP管里的溶液全倒了而已，大概能留下5、6微升在底部。请问这个操作有问题吗？另外各位大大有什么更好的纯化方法也请不吝赐教。谢谢！
请问怎么倒上清才不会把DNA倒出去呢？因为离心过后根本5看不见有任何东西啊
可能是DNA 太少了，沉淀后能看见一点沉淀在管壁或者底部。用枪吸
好的，我试试
好的 我试试蒸发浓缩，谢谢了！
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随时随地聊科研乙醇沉淀蛋白质有哪些注意事项但我不是做实验，这是老师出的一道题。
这就是五变参数：蛋白质含量,离子强度,溶液pH值,乙醇浓度,溶液温度.1.蛋白质含量,愈高,共沉多；反之,分离愈彻底.当然有度.溶液太稀了,成本高.2.离子强度：这与介电强度有关.3.溶液pH值：调到目标蛋白等电点周围.4.乙醇浓度：一般来说乙醇浓度多少,与目标蛋白的分子量有关：比如8%,可沉淀纤维蛋白原,20%可沉淀球蛋白,40%可沉淀白蛋白等等,当然,乙醇浓度与溶液pH值配合使用.加入乙醇不能过快,防止局部过浓.要边加边摇动. 否则,共沉多!或者局部变性.5.溶液温度：必须低温,乙醇反应是个放热反应,如果温度高,可引起蛋白质变性,不可逆的变形.这五变参数,要综合,动态的调整,可达到精确分离蛋白质的作用.
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我只听说过乙醇沉淀DNA啊
乙醇必须是冷的，4摄氏度 1天
1 保持低温，防止变性。在冰上做，试剂要预冷。2 加入乙醇不能过快，防止局部过浓。要边加边摇动。
这是一个很简单的实验！
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