【图文】仪器分析课件第16章 高效液相色谱法_百度文库
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仪器分析课件第16章 高效液相色谱法
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液相色谱图中溶剂有异常峰
最近用了一个方法去测产品中有关物质的情况，色谱条件：
醋酸盐溶液（pH=8.0）的配制：0.7708g（0.01mol）醋酸铵,用水溶解稀释至1000ml,用氨水调pH到8.0
流动相A:乙腈：醋酸盐（pH=8.0）/25：75
流动相B:乙腈：醋酸盐（pH=8.0）/60：40
色谱柱：C8(5&m，4.6×250mm)&&流速：1.5ml/min& &波长：280nm
梯度：Time(min)& & & & A%& & & & B%
0& & & & 100& & & & 0
18& & & & 100& & & & 0
23& & & & 50& & & & 50
30& & & & 50& & & & 50
32& & & & 100& & & & 0
40& & & & 100& & & & 0
用流动相B作为溶剂，进了一针，色谱图如下：
在25min到32min之间有干扰峰，按理说，应该没有的。为什么呢？各位大哥大姐又遇到这种情况的吗？
tupian.JPG
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液相色谱常见问题及处理方法
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【讨论】液相色谱系统适用性和溶液稳定性
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中国药典规定：液相色谱系统适用性中，重复性应符合规定（对照品溶液连续进样5次，峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%），之后的样品检测过程中，定期进样对照品溶液，计算峰面积RSD，不超过2.0%的情况下，结果可以使用，当超过2.0%之后，需要重新平衡系统，进行检测。另外，在方法验证中，又要求验证溶液稳定性，即对照品溶液和供试品溶液室温保存，在一段时间内应稳定，操作方法是取对照品溶液和供试品溶液，在液相系统中连续进样，当峰面积RSD不大于2.0%时，说明溶液在此时间段内稳定。把上述两个要求放一块来看，当峰面积RSD大于2.0时，是系统适用性不合适，还是溶液稳定性差？
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一般来说，如果因为溶液不稳定导致RSD超出范围，是能看出峰面积变化趋势的，如一直增大或减小；如果是因为系统适用性差导致RSD超出范围，则峰面积应该是忽大忽小，一般这可能由于进样器的精密度差造成的。
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样品的稳定性在方法验证时已经做过并确定。系统适用性除了在方法验证时，在日常检验时也要考察。两个要求并不矛盾。
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是这样的，系统适用性是每次检测样品时都要做的，只有在系统适用性符合要求的情况下才能开始样品检测，做溶液稳定性的时候也要先做系统适用性，合格后在运行稳定性溶液，确定稳定时间
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溶液稳定性要看降解趋势。系统适应性不通过原因更多。2.0%只是接受标准。
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楼上说的是有关物质溶液稳定性，看降解趋势比较明显。我说的是含量测定溶液稳定性。在做溶液稳定性之前，先做系统适用性，即连进5针对照品溶液1，系统适用性判定合格，再另配对照品溶液2进行溶液稳定性试验，考察溶液稳定性，在这期间，还需要每隔一段时间再进一针对照品溶液1，以来证明系统适用性符合要求。你们是这样做的吗？
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ltl_01 楼上说的是有关物质溶液稳定性，看降解趋势比较明显。我说的是含量测定溶液稳定性。在做溶液稳定性之前，先做系统适用性，即连进5针对照品溶液1，系统适用性判定合格，再另配对照品溶液2进行溶液稳定性试验，考察溶液稳定性，在这期间，还需要每隔一段时间再进一针对照品溶液1，以来证明系统适用性符合要求。你们是这样做的吗？如果有时最好的，目前国内好像没有强制实施。我们公司有这样的做法，在序列最后加一针对照品，和之前的对照品一起算RSD。当然这个都是基于溶液稳定的状态。
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ltl_01 楼上说的是有关物质溶液稳定性，看降解趋势比较明显。我说的是含量测定溶液稳定性。在做溶液稳定性之前，先做系统适用性，即连进5针对照品溶液1，系统适用性判定合格，再另配对照品溶液2进行溶液稳定性试验，考察溶液稳定性，在这期间，还需要每隔一段时间再进一针对照品溶液1，以来证明系统适用性符合要求。你们是这样做的吗？我觉得这种情况在稳定性试验中因该判为是溶液稳定性问题吧，在样品检测中如果没超过稳定时间，就是系统问题 我们做溶液稳定性的时候，没有在进对照品溶液1，就是直接以溶液2作为稳定性判定标准 ，一般来说只要仪器不出问题，在溶液稳定时间内，溶液1的RSD不会有问题的。
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wangzunchen edited on
yaoshenghua 如果有时最好的，目前国内好像没有强制实施。我们公司有这样的做法，在序列最后加一针对照品，和之前的对照品一起算RSD。当然这个都是基于溶液稳定的状态。 试验序列中间还得进一针对照1吧，这好像是国外这么要求的。我们公司都不这么操作，太复杂了。
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我一直以为配第二个对照品是为了考察样品配置是否准确的，刚明白原来是为了考察溶液稳定性。
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hehewang 我一直以为配第二个对照品是为了考察样品配置是否准确的，刚明白原来是为了考察溶液稳定性。。。。吓到我了。。。配制第二个对照品怎么可能是为了溶液稳定性。。太颠覆了。。
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ltl_01 楼上说的是有关物质溶液稳定性，看降解趋势比较明显。我说的是含量测定溶液稳定性。在做溶液稳定性之前，先做系统适用性，即连进5针对照品溶液1，系统适用性判定合格，再另配对照品溶液2进行溶液稳定性试验，考察溶液稳定性，在这期间，还需要每隔一段时间再进一针对照品溶液1，以来证明系统适用性符合要求。你们是这样做的吗？你认为配对照2是考察溶液的稳定性吗？其实我们是两份对照同时配制，用两份对照的进样来考察系统适用性同时考察操作的准确性。一般分析时间不长时，不在中间再进对照考察系统，只在分析结束前再进一针对照计算回收以考察系统。系统不稳定或者分析时间长或者样品不易洗脱（样品量很大时）时才在分析中间进对照以考察系统。要注意的是，如果溶剂是有机溶媒，最后一针回收往往不符合要求，这种结果并不说明一定是系统不符合要求了，重配一份对照往往就能做出满意的含量。
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楼上各位，麻烦看清楚了再回答。我说的是“在做溶液稳定性之前，先做系统适用性”，我当然知道含量测定，两份对照品溶液的作用。我的问题你们回答了吗
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溶液稳定性项出问题就是溶液稳定性有问题，系统适应性出问题就是系统适应性有问题
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ltl_01 楼上各位，麻烦看清楚了再回答。我说的是“在做溶液稳定性之前，先做系统适用性”，我当然知道含量测定，两份对照品溶液的作用。我的问题你们回答了吗 溶液稳定性方法开发阶段就要考虑，正式数据一般在分析方法验证时候做。进样前肯定要先考察系统适应性能不能通过了？
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一般来说，如果因为溶液不稳定导致RSD超出范围，是能看出峰面积变化趋势的，如一直增大或减小；如果是因为系统适用性差导致RSD超出范围，则峰面积应该是忽大忽小，一般这可能由于进样器的精密度差造成的。
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刚开始真被楼主的问题给蒙住了。首先，系统使用性的评价是用对照的RSD来评价的。如楼主所说，第一份对照进样五次以及包括前五次在内和随行对照一起算的RSD不大于2.0，证明系统适用性是合格的。其次，溶液稳定性的评价是用含量的百分比来变化来评价的。即使最低要求，含量变化也不能大于2个百分点。由此可以看出，如果在同一个序列中，那么含量的变化范围肯定比系统使用性的范围窄一倍。所以你提出的问题根本就是一个不可能存在的问题。举个例子，用对照1既考察系统适用性，又考察溶液稳定性，当你的RSD等于1的时候，所有进样分析的对照含量变化的最大与最小值相差已经等于2了。当然，你用的是前五针的平均值来计算的接下来的随行对照的含量，所以并不代表你的含量变化值等于2，但由此可以看出，率先不合格的，永远是含量的变化。
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小结一下：一、系统适用性1、含量检测时通常的做法：对照品溶液1连进5针，对照品溶液2连进2针，当对照品溶液1的5针峰面积RSD在2%以内，且对照品溶液2的2针峰面积均在对照品溶液1的5针峰面积平均值的98~102%之间，系统适用性满足要求，可进行含量检测；通常会在检测完成时，再进一针对照品溶液1，对照品溶液1的6针峰面积RSD应在2%以内。2、有关物质检测时的做法：系统适用性溶液1针，根据标准要求（如理论板数、分离度、信噪比等要求），如满足，可进行有关物质检测。 3、系统适用性不达标的情况，这个比较复杂，通常是仪器性能下降、色谱柱性能下降、流动相配错等，需通过OOS调查找出原因，并进行相应的解决。二、溶液稳定性：1、在进行分析方法开发时进行，根据API性质，选择合适的溶剂作为稀释剂，通常对照品溶液和供试品溶液的稳定性在较短时间内都是比较稳定的（如8小时或24小时内）；2、如溶液不稳定，则在进样时，峰面积会有一定的变化趋势，如含量供试品溶液主峰面积在持续下降，有关物质供试品溶液杂质含量在持续上升。此时可以采取的手段有两个：2.1更换稀释剂，选择API在其中稳定性更好的稀释剂；2.2实际检测中，立即进样或现配现用，同时在标准中明确规定。3、含量对照品溶液，通常还需要考察日间稳定性，方法为对照品溶液1在室温或冰箱中冷冻密闭保存，在第n天取出，另配对照品溶液2标定对照品溶液1含量，如在98~102%之间，说明对照品溶液在第n天稳定。
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蓝色字部分是我的理解，欢迎讨论一、系统适用性1、含量检测时通常的做法：对照品溶液1连进5针，对照品溶液2连进2针，当对照品溶液1的5针峰面积RSD在2%以内，且对照品溶液2的2针峰面积均在对照品溶液1的5针峰面积平均值的98~102%之间，系统适用性满足要求，可进行含量检测；通常会在检测完成时，再进一针对照品溶液1，对照品溶液1的6针峰面积RSD应在2%以内。——————————————————————————————————————————————个人理解：对照品1连续进样5针，RSD应不大于2.0%，证明系统适用性符合要求。F1=C1/A1对照品2进样2针，F2=C2/A2，F1/F2=98.0%~102.0%，证明试验过程的准确度另随行进对照品1，这里有讨论【分享】色谱进样顺序 - 分析技术讨论版 -丁香园论坛——————————————————————————————————————————————2、有关物质检测时的做法：系统适用性溶液1针，根据标准要求（如理论板数、分离度、信噪比等要求），如满足，可进行有关物质检测。有关物质中的系统适用性，需要随行进样吗？——————————————————————————————————————————————3、系统适用性不达标的情况，这个比较复杂，通常是仪器性能下降、色谱柱性能下降、流动相配错等，需通过OOS调查找出原因，并进行相应的解决。因为没在正儿八经的QC实验室学习过，所以对偏差一直不了解。比如流动相配错，这类很容易看出来的问题，也需要OOS？这个耗时是不是太长了——————————————————————————————————————————————二、溶液稳定性：1、在进行分析方法开发时进行，根据API性质，选择合适的溶剂作为稀释剂，通常对照品溶液和供试品溶液的稳定性在较短时间内都是比较稳定的（如8小时或24小时内）；2、如溶液不稳定，则在进样时，峰面积会有一定的变化趋势，如含量供试品溶液主峰面积在持续下降，有关物质供试品溶液杂质含量在持续上升（实际过程中也会有下降的）。此时可以采取的手段有两个：2.1更换稀释剂，选择API在其中稳定性更好的稀释剂；2.2实际检测中，立即进样或现配现用，同时在标准中明确规定。2.3低温保存，需要验证3、含量对照品溶液，通常还需要考察日间稳定性，方法为对照品溶液1在室温或冰箱中冷冻密闭保存，在第n天取出，另配对照品溶液2标定对照品溶液1含量，如在98~102%之间，说明对照品溶液在第n天稳定。这里是否也应配制对照品1进5针，配制对照品2进2针，这样来计算呢4、有关物质系统适用性溶液，需要用到峰面积的，同含量对照品处理。如仅仅指示分离度，可考虑在放置一段时间后，与新配制的系统适用性溶液同时进样，考察二者之间的参数差异。如仍可起到分离度指示作用，也可以使用。
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关于丁香园高效液相色谱法测定中标准溶液的溶剂与样品溶剂不同会造成保留时间不同吗_百度知道}