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【求助】直接用5×的loading buffer上样会影响Western 结果吗？
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这个帖子发布于7年零145天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
如题。谢谢。
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答案是很可能会，为什么，因为5×的loading buffer很稠，浓度比较高，而一般上样需要5×的loading buffer 2-4ul不等，尤其是新手，很难保证上样量的准确，很可能粘在枪头上的液体比你吸出来的还要多，而打出来的可能又要丢失一部分，一来二去，这样就会造成上样量的不准确，那么在跑胶的时候，各条带酒不会那么整齐，难以成为一条直线，那么就会对后来的压片结果产生影响，可以说，western结果的漂亮与否，用一句话来总结，就是：细节决定成败！对于这事，我的处理方法是将5×的loading buffer按照3：1的比例，用PBS稀释，稍微稀释过的loading buffer上样量就会均匀、准确，希望对你有所帮助，祝顺利！
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答案是很可能会，为什么，因为5×的loading buffer很稠，浓度比较高，而一般上样需要5×的loading buffer 2-4ul不等，尤其是新手，很难保证上样量的准确，很可能粘在枪头上的液体比你吸出来的还要多，而打出来的可能又要丢失一部分，一来二去，这样就会造成上样量的不准确，那么在跑胶的时候，各条带酒不会那么整齐，难以成为一条直线，那么就会对后来的压片结果产生影响，可以说，western结果的漂亮与否，用一句话来总结，就是：细节决定成败！对于这事，我的处理方法是将5×的loading buffer按照3：1的比例，用PBS稀释，稍微稀释过的loading buffer上样量就会均匀、准确，希望对你有所帮助，祝顺利！
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以前偶喜欢用2*的
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二楼太专业了，讲的也很漂亮。理论上100%正确呀。不过，根据俺的经验，没有什么影响，放心就是。如果结果出来后感觉不完美，再做一遍就是。不必天天上升的理论完美的高度。不然天天实验不累死人啊。
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谢谢，说得很透彻。
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楼主，没有关系的。关于5*黏稠的问题，楼主可以将其充分化掉以后，倾斜ep管，将loading buffer斜斜倒出，流到管子口的时候，就可以用枪头准确的吸取了。本人用碧云天的loading buffer。其他的应该也差不多吧
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loading buffer应该用自己配的没问题吧
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cntspy loading buffer应该用自己配的没问题吧没问题，自己配的既省钱，用起来也不怕废
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请问你们用的loadingbuffer碧云天的5x的再从冰箱拿出之后要到37度温育吗？还是从冰箱拿出直接使用？
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5×loading buffer在用之前最好温育一下，然后震荡混匀（主要是里面的SDS经常会沉淀出来）离心，而且使用的时间长了还应该补加2-巯基乙醇。
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谢谢楼主及时的回答！
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bo 答案是很可能会，为什么，因为5×的loading buffer很稠，浓度比较高，而一般上样需要5×的loading buffer 2-4ul不等，尤其是新手，很难保证上样量的准确，很可能粘在枪头上的液体比你吸出来的还要多，而打出来的可能又要丢失一部分，一来二去，这样就会造成上样量的不准确，那么在跑胶的时候，各条带酒不会那么整齐，难以成为一条直线，那么就会对后来的压片结果产生影响，可以说，western结果的漂亮与否，用一句话来总结，就是：细节决定成败！对于这事，我的处理方法是将5×的loading buffer按照3：1的比例，用PBS稀释，稍微稀释过的loading buffer上样量就会均匀、准确，希望对你有所帮助，祝顺利！用之前加热一下即可，不必如你所说的PBS稀释
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【求助】10×loading buffer 的配制方法
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这个帖子发布于8年零37天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
10×loading buffer 怎么配啊？
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DNA电泳用的6*loading buffer : 30mM EDTA, 36% Glycerol, 0.05%
Xylene Cyanol FF,
0.05% Bromophenol Blue
RNA电泳用的10*loading buffer : 10mM EDTA, 50% Glycerol, 0.25%
Xylene Cyanol FF,
0.25% Bromophenol Blue
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有没有不同意见的啊？没有那个加SDS的吗？
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用量不多的话，买现成的吧.
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用量不多的话，真的应该买现成的何况有很多公司，你买它的酶都会送一管loading buffer，这都够你日常使用了。
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就是用量大，所以就想自己配啊
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LZ问得是这个配方吗？——这是我在网上搜到的，一个研究生博客中写的，所以要谢谢她吧。10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量0.2％溴酚蓝
20mg0.2％二甲苯青FF
20mg200 mmol/L EDTA
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)0.1％SDS
100ul 10％ SDS50％甘油
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呵呵，非常感谢，要得就是这个啊
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50X蛋白酶液是什么意思，是指浓度还是循环次数，谢谢
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关于丁香园2×protein loading buffer怎么制成5×protein loading buffer？ - 实验交流 - 生物秀
标题: 2×protein loading buffer怎么制成5×protein loading buffer？
摘要: [2×protein loading buffer怎么制成5×protein loading buffer？] 我们实验室有2×Laemmli Sample Buffer，但是跑胶发现条带很淡，想用5×loading buffer 处理样品，应该怎么做？ 关键词:[跑胶 条带]……
我们实验室有2×Laemmli Sample Buffer，但是跑胶发现条带很淡，想用5×loading buffer 处理样品，应该怎么做？
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电话：021-组份浓度：
250mM -HCl（pH6.8）
10％（W/V）
0.5％（W/V） BPB
50％（V/V） 甘油
5％（W/V） β-巯基乙醇
配制量：& && &&&5mL
配制方法：
1.量取下列试剂，置于10mL塑料中。
1M -HCl 　1.25mL
BPB　 25mg
甘油 　2.5mL
2.加入去离子水溶解后定容至5mL。
3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。
4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右
[5×SDS-PAGE Loading Buffer配制方法]相关内容
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[5×SDS-PAGE Loading Buffer配制方法]延伸阅读
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等你回答的问题：5*loading buffer 配置方法请教！ - 实验交流 - 生物秀
标题: 5*loading buffer 配置方法请教！
摘要: [5*loading buffer 配置方法请教！] 我们实验室的配方如下，求具体配置过程：50%的甘油10%的sds250mml L
tris hcl ph 6 80 5% bpb使用前加2-ME是不是加的顺序和最后配置成功有关？
除了甘油我把别的都先混匀了（配50ml的）但颜色是酒红色的……………… 加了甘油没改变，稀释成1*的也没变色…………就不敢用了……
这个是什么情况…………
另，大家配的时候甘油怎么定量的呢？
给个方法参考下？ 关键词:[甘油 变色]……
我们实验室的配方如下，求具体配置过程：50%的甘油10%的sds250mml/L
tris hcl ph 6.80.5% bpb使用前加2-ME是不是加的顺序和最后配置成功有关？
除了甘油我把别的都先混匀了（配50ml的）但颜色是酒红色的……………… 加了甘油没改变，稀释成1*的也没变色…………就不敢用了……
这个是什么情况…………
另，大家配的时候甘油怎么定量的呢？
给个方法参考下？谢谢！！！
从颜色来看问题有点大溴酚蓝在pH6.8的时候肯定是蓝紫色的，是否pH值不对？或者溴酚蓝未充分溶解？溴酚蓝有问题？逐一排查吧
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