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【求助】求总AKT及磷酸化AKT抗体
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这个帖子发布于7年零244天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
求购总AKT和pAKT抗体，够WB就可以。
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您好！感谢你对丁香园的关注和支持。现将丁香通平台上供应的类似产品信息提供给您，希望对您有所帮助：AKT AKT抗体
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可选择CST公司的抗体，磷酸化抗体非常全面，性价比很高，网址是
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你是北京的么？方便的话跟我联系？我这里可以给你联系到试剂。
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谢谢楼上的，我是南京的
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即送15丁当
【转帖】测不出磷酸化的Akt，怎么回事？
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这个帖子发布于7年零109天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我能测出Akt，就是总的Akt，但是测不出磷酸化的Akt，细胞裂解时用的是RIPA裂解液，用了cocktail抑制剂，估计应该含有磷酸酶抑制剂，所以认为蛋白制备不存在问题。但是怎么回事呢？磷酸化的一直测不出来，是不是磷酸化的Akt本身含量就很低，所以测不出来啊？请高手指点！
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cocktail是没有磷酸酶抑制剂的，要另外加。还有你收的时间点和刺激剂量以及磷酸化的位点都有影响的，要全面考虑。
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对了，多问个问题，要检测磷酸化，收的样品可以冻过夜以后在做wb么？一天做完的话真的很辛苦的感觉。
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要激活,不然很难测出磷酸化
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当然可以过夜做! 问题可能的原因:
磷酸化是在短时间内存在的,我一般是加药处理半小时提取蛋白!
一抗是不是用的P-Akt的抗体,而且浓度是否正确,因为总的AKT比较好跑.
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我用的是CST的抗体，最后浓度达到1：300终于做出来了
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如何检测的
试剂 有问题吗
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我个人怀疑是诱导时间的问题，我一般abeta诱导24到48小时，但是没有测出来过。但是上游的PI3k倒是测出来了。不知道是不是诱导时间的问题，还有就是，如果测磷酸化蛋白的话，怎样摸索其表达的时间变化情况呢，是不是每隔几小时就得设一个时间点做western啊？有文献报道，abeta干预30min后就有显著性磷酸化的，不知道是否属实？
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magichunter 我能测出Akt，就是总的Akt，但是测不出磷酸化的Akt，细胞裂解时用的是RIPA裂解液，用了cocktail抑制剂，估计应该含有磷酸酶抑制剂，所以认为蛋白制备不存在问题。但是怎么回事呢？磷酸化的一直测不出来，是不是磷酸化的Akt本身含量就很低，所以测不出来啊？请高手指点！和总AKT比较，磷酸化的AKT本来就少，再加上抗体的效价，所以磷酸化的ＷＢ条带本来就很浅。同样是cell signal的抗体，我以前测的phospho的条带和total的条带在差不多的条件下（我指ＥＣＬ的曝光时间和１抗的浓度和反应时间），条带的粗度差非常大，也就是phospho的条带非常弱。我以前用了1:1000稀释１抗。因此，1.首先确定你的实验条件下，phospho确实会增加，能够被检测出来。2. 调整条件（如　提高１抗的浓度和反应时间，如　换一种封闭液　等等）３. 重新买好点的抗体
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P-AKT很容易被去磷酸化，快速收获样品是关键。我的经验表明，培养的细胞离开培养箱，在常温下，或冰上10分钟，会丧失90%以上的P-AKT。直接用WB 上样缓冲液， 或-80C 甲醇， 或9M urea杀死细胞， 可得到非常强的P-AKT条带。利用9M urea获得的样品可检测蛋白浓度。在培养箱旁边收获细胞，一次只处理一皿，可在最短的时间内得到样品。把样品放入液氮速冻，再保存于-20C或-80C，可长期保存。煮样品时，5分钟足够，不可过长。大约每煮10分钟，磷酸化水平下降50%。30分钟后，很难检测到P-AKT。
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关于丁香园&鸡磷酸化AKT蛋白(P-AKT)ELISA试剂盒价格
鸡磷酸化AKT蛋白(P-AKT)ELISA试剂盒价格
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鸡磷酸化AKT蛋白(P-AKT)ELISA(/sell/21/)盒价格：
英文名称：Chicken AKT protein (P-AKT) ELISA Kit
规格：48T/96T
用途:科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断
保存:常温,避光，防潮
运输方式：，一般为快递运输，江浙沪隔天到，外地及偏远地方三至五天时间到货
鸡磷酸化AKT蛋白(P-AKT)ELISA试剂盒价格&注意事项：
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
6. 在配制(/sell/20/)、(/sell/76/)溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产(/company/)的试剂替换试剂盒中的试剂。
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牛90kDa热休克蛋白&B1(HSP90&B1)ELISA试剂盒价格
风险防范建议：合作之前请先核验对方身份，如：传真营业执照等；涉及资金往来，建议均使用对公账户。药品资讯网保留删除上述展示信息的权利；我们欢迎您举报不实信息，共同建立诚信网上环境。Akt抗体/Akt antibody/Western/Immunofluorescence
&产品编号: AA326
&产品包装: &10次
&产品价格: 601.00元
产品简介：
交叉反应性
抗体识别位点
WB, IP, IF, F
H, M, R, C, Hm, Dro
Akt C-terminal
&&&&WB, W IP, I IF, I F, Flow cytometry.
&&&&H, M, R, C, Hm, Dro, drosophila.
&&&&本Akt抗体(Akt&antibody)为进口分装，用人工合成的小鼠Akt羧基端(carboxy-terminal)的一段多
肽进行适当修饰后免疫rabbit，然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度抗体。
&&&&本Akt抗体识别的是总Akt(total&Akt)，可以检测内源性的Akt1、Akt2和Akt3，未发现和其它激酶有交叉反应。
&&&&Akt又称PKB或Rac，在细胞存活和凋亡中起重要作用。胰岛素等生长和存活因子都可以激活Akt信号
途径。Akt的Ser473可以被PDK1磷酸化。PI3&Kinase-Akt信号途径是一条经典的信号途径，LY294002等PI3 kinase的抑制剂抑制PI3 kinase时，通常就会抑制Akt激活。
&&&&配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测时的一抗稀释。
&&&&建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)：
&&&&本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测10次。
包装清单：
Western一抗稀释液
保存条件：
&&&&Akt抗体-20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
注意事项：
&&&&对于本抗体，Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜，如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。
&&&&在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10
次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
&&&&回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混
浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
&&&&为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1.Western检测：
&&A.按照1:1000用碧云天提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
&&B.把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白
&&C.回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
&&D.按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网
2.免疫染色：
&&&可以使用碧云天生产的稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作
&&&可以参考如下网页：
3.其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
& 相关产品请点击如下按钮：
使用本产品的文献：
1. Zhong W, Zou G, Gu J, Zhang J.
&&&Diabetes Res Clin Pract. ):38-45. Epub 2010 Apr 15.
2. Zhang DG, Li WZ, Wang GF, Su Y, Zeng J, Zhang C, Zeng XX, Chen XX, Xu YX, Li KS
&& Virol J. 2010 Jul 23;7:170.
3. Zhong W, Zou G, Gu J, Zhang J
&& Diabetes Res Clin Pract. ):38-45. Epub 2010 Apr 15.
4. Yang J, Wang S, Zhao G, Sun B.
&& J Exp Clin Cancer Res. 2011 May 7;30:51.
5. Zhang R, Shi H, Chen Z, Wu Q, Ren F, Huang H.
&& J Exp Clin Cancer Res. 2011 Sep 16;30:83
6. Ruan SQ, Wang ZH, Wang SW, Fu ZX, Xu KL, Li DB, Zhang SZ
&& Biochem Biophys Res Commun. 2012 Apr 6;420(2):385-90.
7. Gong C, Liao H, Wang J, Lin Y, Qi J, Qin L, Tian LQ, Guo FJ.
&& Asian Pac J Cancer Prev. ):3103-7.
8. Wang Xj, Wei Dl, Song Zg, Jiao Hc, Lin H.
&& PLoS One. ):e36663. doi: 10.1371/journal.pone.0036663. Epub 2012 May 18.
9. Zhang L, Ding W, Sun H, Zhou Q, Huang J, Li X, Xie Y, Chen J.
&& Food Chem Toxicol. ):2591-7. doi: 10.1016/j.fct..
&& Epub 2012 Jun 1.
10.Zhang ZP, Liang GJ, Zhang XF, Zhang GL, Chao HH, Li L, Sun XF, Min LJ, Pan QJ, Shi QH,
&& Sun QY, De Felici M, Shen W.
&& PLoS One. ):e41771. doi: 10.1371/journal.pone.0041771. Epub 2012 Jul 24.
11.Chen T, Hao J, He J, Zhang J, Li Y, Liu R, Li L.
&& Food Chem. 2013 Jun 1;138(2-3):1034-41. doi: 10.1016/j.foodchem..
&& Epub 2012 Dec 5.}