PAS染色阳性诊断详述
PAS染色阳性症状的临床表现和初步诊断? 如何缓解和预防？
　　主要根据支气管泡灌洗物检查或经纤支镜或剖胸活检作出病理诊断。咳出的痰经80%乙醇固定，PAS染色有15%阳性的脂质。
　　诊断依据：
　　少数病例可无症状，仅X线有异常表现。呼吸功能障碍随着病情发展而加重，伴亦趋严重。　　表现是非特异性的,应与以下疾病相鉴别: ①特发性; 特发性肺间质纤维化(呼吸内科)(IPF)系指原因不明的下呼吸道的弥漫性炎症性疾病。炎症侵犯肺泡壁和临近的肺泡腔，造成肺泡间隔增厚和。肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细胞，其至小气道和小血管也可受累。其临床特点有进行性呼吸困难，Velcro罗音，进行性低氧。肺功能受损以限制性通气障碍、弥散功能障碍为主。
　　②肺泡癌; 　肺泡细胞癌：起源于支气管粘膜上皮，又称为细支气管肺泡细胞癌或，或简称肺泡癌。部位在肺野周围。在各型中，发病率低，女性比较多见。一般分化程度较高，生长较慢，癌细胞沿细支气管、肺泡管和肺泡壁生长，而不侵犯肺泡间隔。和血行转移发生较晚，但可经支气管播散到其他肺叶或侵犯胸膜。肺泡细胞癌在X线形态上有型和弥漫型两类，前者可以是单个结节或多个结节;后者形态类似。
　　③粟粒性; 　是由结核杆菌引起的一种慢性传染病。主要经呼吸道传染。全身各器官均可发生，但以肺结核最为多见。其病变特征是结核结节形成并伴有不同程度的干酪样。
　　④肺实质性疾病如、及。　　主要针对如何清除沉着于肺泡内蛋白样物质。近年来用双腔气管导管(Carlen导管)或纤支镜作一侧肺或肺叶的生理盐水灌洗，定期交替进行。近期疗效显示患者呼吸困难和肺功能均有改善，半数患者X线胸片可变清晰。远期效果则多数保持缓解状态，少数患者复发，常在6-24个月内，可再作肺灌洗。
　　肺泡蛋白沉着症(Pulmonary alveolar proteinosis，PAP)是一少见呼吸病，以肺泡及终末呼吸性细支气管内沉着大量的表面活性蛋白及脂质为特征。根据发病，可将其分为原发性PAP 与继发性PAP两类。继发性PAP的治疗原则为治疗原发病。
　　对于原发PAP，明确有效的治疗方法是支气管肺泡灌洗，即通过灌洗清除肺泡内沉着的蛋白质和脂质。其效果取决于肺灌洗量，分次单侧全肺盥洗较纤支镜盥洗效果好。然而，当患者肺功能严重损害时则无法接受这一治疗方法。其原因是盥洗一侧肺内很少有可交换的气体，结果引起甚至。
　　为克服这些不足，自1999年始试用了自己改良的全麻密闭加压给氧分侧肺盥洗术，与以往方法的差别是新方法中有2个重要的改良：1、肺盥洗时给予密闭加压给氧。向肺内灌注生理盐水至单侧肺总量后，手动挤压给氧同时保持呼气末正压5厘米水柱，使其中纯氧和肺泡内盥洗液充分混合30-60次后再回收盥洗液。2、在首次和结束前的两次盥洗液中，均在生理盐水盥洗液中加入素(1mg/L)。
　　第一个改良有三个有益作用：(1)使盥洗液与肺泡充分接触，增加盥洗效果;(2)改善氧合功能，特别适合单侧肺通气不能保持在安全范围者。因为它可以使纯氧混合在液体中，充分与肺泡接触而增加氧合。如果术中氧饱和度降低，除调整非盥洗肺的吸氧浓度和呼吸支持参数外，还应增加盥洗肺侧的给氧挤压时间。(3)在盥洗肺侧加压给氧的同时，可由于肺泡内压的升高而减少分流量和改善血氧分压。第二个改良的有益作用是在生理盐水盥洗液中加入肾上腺素后，不但有利于舒张支气管和回收盥洗液;而且有利于吸收肺泡内残留液体，减少其对呼吸功能的影响。
　　目前新方法已经应用到少数的患者，均取得了明显的效果。
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指导意见：你好一般来说iga肾病多发于儿童和青年而且很多患者仅仅是因为有上呼吸道感染而得病并且此病复发率很高对于iga肾病患者来说需要低脂蛋白饮食要限制多磷食物喝蛋白的过量摄入;一定要禁辛辣厚腻如果忘了医生嘱咐的低脂饮食那么管住嘴巴也能防止IgA肾病加重如果你喜欢运动适当锻炼身体也可使诱发IgA肾病加重因素减弱IgA肾病应适度锻炼身体起居有节防止因熬夜、过度疲劳、剧烈运动而致体力下降患者本人应该积极消除易感和诱发因素如上呼吸道、皮肤、肠道、尿路感染根治疮疖、真菌感染儿童包皮过长者宜适时环切因此防止各种诱发因素是预防IgA肾病加重的常见注意事项
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问题分析：你好，根据你的描述，IgA肾炎现在的激素治疗，效果不是很好，又出现了浮肿的症状。意见建议：您说一个月前的激素治疗，应该是激素冲击疗法，现在又出现浮肿，应该诊断为激素不敏感性肾炎。您存在的误区是不想使用激素，激素周所周知是有很多副作用，但副作用不是每个人都会发生，如果疾病都没有治好，那以后需要进行透析等治疗，也有发生何种并发症的可能，因此，要相信医生，积极治疗。
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免疫组化和组织化学双重染色技术在组织芯片上的应用
导读：免疫组化和组织化学双重染色技术在组织芯片上的应用，【关键词】组织芯片;免疫组织化学;组织化学;染色法【中图分类号】R44618【文，1.1材料组织芯片仪一台,直径为1mm的粗针和直径，组织芯片是从组织块中挑选典型部位的组织以获得数百个圆柱状的样本,并按次序排列在一，组织芯片技术最重要的特点是:一次可以同时对多个组织块检测研究而对原来的组织材料破，此外,种类型的分子生物学分析〔4〕和组织化学双重
临床与实验病理学杂志　JClinExpPathol　
免疫组化和组织化学双重染色技术在组织芯片上的应用
赵秀兰　张诗武　刘增辉　王　欣　古　强　孙保存3
【关键词】　组织芯片;免疫组织化学;组织化学;染色法【中图分类号】　R44618　　【文献标识码】　B【文章编号】　1001
1　材料与方法
1.1　材料　组织芯片仪一台,直径为1mm的粗针和直径
为016mm细针若干。自行制备的石蜡模块。常规梯度脱
　　组织芯片是从组织块中挑选典型部位的组织以获得数百个圆柱状的样本,并按次序排列在一个新的石蜡块上,制作成HE切片,然后按研究的需要进行免疫组化及原位杂交等研究〔1,2〕。组织芯片技术最重要的特点是:一次可以同时对多个组织块检测研究而对原来的组织材料破坏很小〔3〕。此外,种类型的分子生物学分析〔4〕和组织化学双重染色,5〕
蜡、脱水试剂,抗原修复专用微波炉。1%高碘酸溶液,Schiff试剂。免疫组化试剂盒和鼠抗人CD34抗体。载玻片为购自北京中山公司的硅化玻片,75%乙醇和1%盐酸泡洗。
1.2　4个点,一
,60～65℃的烤箱h以上。使用前轻微加热,将加热后的组织芯。梯度乙醇脱水,3%H2O2灭活内源性过氧化物酶的活性,专用微波炉进行抗原热修复,采用S2P法做免疫组化染色。DAB显色,显微镜下观察,自来水终止染色,蒸馏水洗。
1.3　PAS染色　将CD34染色后的组织芯片切片直接从蒸
们在组织芯片上进行PAS组化双重染色,取得良好的效果,现介绍如下。
收稿日期:2004
14　修回日期:2004
馏水中取出,置于1%高碘酸溶液中氧化10min。高碘酸氧化后,蒸馏水冲洗2min后,再将已染CD34的组织芯片切片置于雪夫液中染色15min左右。雪夫试剂染色后,自来水分化10min以上,苏木精浅染细胞核1～2min,盐酸乙醇分化,氨水返蓝(时间适当)。乙醇梯度脱水(注意该乙醇梯度不能掺有伊红染料避免非特异性着色),二甲苯透明,中性树胶封固,处理好的盖玻片封固。雪夫试剂和高碘酸溶液为自扩增技术亦适用于石蜡切片,这也为肿瘤基因组学和分子病理学研究提供了大量重要而又宝贵的资料。同时,乙醇固定的石蜡切片可以用于LCM技术平台mRNA水平的研究,但需要进一步优化与之相适应的LCM和RT2PCR方案。
1　BonnerRF,Emmert2BuckMR,ColeK,etal.Lasercapturemi2crodissection:Molecularanalysisoftissue.Science,1～3.
2　王振宁,马　琳,徐惠绵,等.激光捕获显微切割细胞的全基因组DNA扩增.中华病理学杂志,～8.
3　王振宁,徐惠绵,张　学,陈峻青.激光捕获显微切割技术的原理
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No)作者单位:天津医科大学病理学教研室　300070
作者简介:赵秀兰(1960-),女,高级实验师。Tel:,E2
孙保存(1950-),教授,博士生导师,中华肿瘤学会常委,3通讯作者,主要研究肿瘤病理学及消化系统疾病
经过40个循环的PCR反应可以分别扩增出558bp和227
bp令人满意的GAPDH基因cDNA片段,且具有良好的可重
复性。70%乙醇对RNA的影响不甚明显,以其为固定剂的石蜡切片中也分别扩增出相应的GAPDH基因cDNA片段,只是所得PCR产物量明显低于冷冻切片组。提示采用乙醇固定的石蜡切片进行mRNA水平研究应尽可能增加所捕获细胞的数量并通过巢式PCR等分析以提高检测的敏感度。
最近有文献报道可从福尔马林固定石蜡包埋的组织中提取总RNA并进行相应的RT2PCR扩增[4],但本研究未能扩增出GAPDH基因的cDNA片段。究其原因:①福尔马林是强交联剂,对RNA结构有较强的破坏作用,也使RNA的提取十分困难;②LCM技术分离目的细胞的数量毕竟有限,所得RNA的量也就更加微乎其微;③TRIzol试剂一步法提取总RNA也许不是针对福尔马林固定的石蜡切片的最佳方案,需优化RNA提取方法。
总之,本研究结果显示冷冻切片是LCM技术及后续
DNA、RNA分析最佳的材料来源。LCM技术结合全基因组
和应用.国外医学?遗传学分册,～3.
4　LewisF,MaughanNJ,SmithV,etal.Unlockingthearchive2geneexpressioninparaffin2embeddedtissue.JPathol,～71.
?484?临床与实验病理学杂志　JClinExpPathol　
的免疫组化有时不能提供充分的信息,有时可能因染色质量控制等原因造成误差。随着免疫组织化学技术的普及,双重染色的应用也必将日益增多,但该双染技术操作较复杂,难以获得满意结果。我们通过在实践中摸索,已形成了一套比较完整的双染操作方法。我们认为,在双重染色操作中,需注意以下情况:(1)高碘酸氧化时间应视周围环境温度而定,周围环境温度低,适当延长氧化时间,反之周围环境温度高,适当缩短氧化时间。此步骤是PAS染色的关键步骤,氧化程度的好坏直接决定组织能否着色;(2)雪夫试剂染色时间的长短取决于雪夫试剂配置时间的长短和周围环境的温度。雪夫试剂配置时间短,SO2浓度高,染色时间适当缩短,此外,周围环境温度高,染色时间也需要适当缩短,反之则需要适当延长。此步染色时间的掌握也比较重要,染色时间过长,,　KJ,BubendorfL,KallioniemiA,etal.Tissuemicroarrayforhige2throughoutmolecularprofilingoftumorspecimens.Nat
行配制,经对胃黏液腺癌染色,所有黏液处均染成樱桃红色,证实试剂质量可靠。
使用硅化玻片作为组织芯片载玻片后进行的免疫组化染色和组织化学染色结果显示:在392点阵的组织芯片上进行组织化学和免疫组织化学双重染色,几乎未见点阵的脱落和缺失,点阵形状保持完整,没有点阵的移位。CD34免疫组化染色结果显示所有毛细血管和小血管的内皮细胞均染成棕黄色。PAS染色结果显示血管基底膜和肿瘤细胞的胞质分泌PAS阳性物质,染成樱桃红色,肿瘤基质也染成樱桃红色(图1)
2　HoosA,UristMJ,StojadinovicA,etal.Validationoftissuemi2croarraysforimmunohistichemicalprofilingofcancer.AmJPathol,5～51.
3　RimmDL,CampRL,CharetteLA,etal.Amplificationoftissue
byconstructionoftissuemicroarrays.ExpMolPathol,～64.
4　HorvathL,HenshallS.Theapplicationoftissuemicroarraystocan2cerresearch.Pathology,～9.
5　孙保存,张诗武,赵秀兰,等.组织芯片制备过程中的体会与注
意事项.临床与实验病理学杂志,):658～9.6　韩瑞刚,张建中,黄英武,等.肺癌石蜡包埋组织及新鲜标本组织芯片制备方法学探讨.临床与实验病理学杂志,):
7　杨　军,王康敏,苏宝山,等.组织芯片技术在原位杂交中的应用.临床与实验病理学杂志,):344.
图1　CD34免疫组化和PAS组化双重染色:免疫组化染色显示毛细血管内皮细胞呈棕黄色,组化PAS染色呈樱桃红色
组织芯片作为科学研究的一项重要技术手段以其明显的优点越来越受到科研人员的关注,在组织芯片上进行双重染色拓宽了组织芯片技术的应用范围[6,7],同时有助于及时、正确地做出病理诊断。在病理科日常的工作中,时常会遇到一些难以明确诊断的病例,此时免疫组化染色结果可以提示病变组织的来源,并有助与其它疾病的鉴别。但是单一
?简　　讯?
《临床技术操作规范?病理学分册》正式发行
　　中华医学会编著的《临床技术操作规范?病理学分册》,已由人民军医出版社出版发行。该分册是受国家卫生部委托,由中华医学会病理学分会组织编写的关于医院病理科的权威性技术操作规范。全书2517万字,分4章。第1章,总则,共10条。分别阐述:(1)制定该规范的目的及法律依据;(2)医院病理科和承担医院病理科任务的医学院校病理学教研室的主要临床任务;(3)病理学诊断的定义及意义;(4)病理学诊断报告书的意义及签发者的资质;(5)病理学检查是临床科室与病理科之间的特殊会诊形式,会诊双方医师均应认真履行各自的义务和承担相应的责任;(6)病理学检查申请单的意义及填写人的资质;(7)临床医师在保证申请单内容的真实性及送检标本的一致性、所送检材的病变代表性和可检性中的义务;(8)患方在提供信息及自送检材真实性、完整性及可检性中的义务;(9)病理科在加强科室建设、管理、质控以提高优质服务中的作用;(10)病理科工作人员的义务和责任。第2章,病理学检查常规,共7节。分别对普通活检、手术中快速活检、细胞学检查、尸检、病理资料管理、病理学会诊、病理科基本设施做了详细的规定。第3章,病理学基本技术操作,分别对组织学常规制片技术、细胞学技术、尸检技术、病理标本的取材等提供了规范性规定。以上3章为必须执行的内容。第4章,病理学相关技术操作,包括特殊染色、免疫组化、电镜检查、图像分析、流式细胞分析、PCR、细胞和分子遗传学及病理学摄影等技术,该部分属指导性规范。
包含总结汇报、行业论文、高中教育、高等教育、出国留学、表格模板、外语学习、初中教育、教学研究、经管营销、IT计算机、农林牧渔以及免疫组化和组织化学双重染色技术在组织芯片上的应用等内容。
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(pulmonary alveolar proteinosis，简称PAP)，又称Rosen-Castle-man-Liebow。以和腔内充满PAS染色阳性，来自肺的富物质为其特征。好发于青中年，男性发病约3倍于女性。病因未明，可能与(如、缺损、等)有关。粉尘尤以接触的动物可引起PAP，故认为可能是对某些刺激物的非特异反应，导致肺泡分解，产生PAS阳性蛋白质。
病因未明，推测与几方面因素有关：如大量粉尘吸入(铝，等)，机体免疫功能下降(尤其婴幼儿)，，酗酒，等。而对于感染，有时很难确认是原发致病因素还是继发于。例如，卡氏肺孢子虫，组织胞浆菌感染等均发现有内高蛋白沉着。
虽然启动因素尚不明确，但基本上同意发病过程为所致。即由于机体内、素作用引起的。到目前为止，研究较多的有肺泡活力，动物实验证明巨噬细胞吞噬粉尘后其活力明显下降，而病员灌洗液中的巨噬细胞内颗粒可使正常活力下降，经支气管肺泡灌洗治疗后，其肺泡巨噬细胞活力可上升。而研究未发现Ⅱ型细胞生成增加，全身脂也无异常。因此目前一般认为本病与清除能力下降有关。
主要根据肺泡灌洗物检查或经纤支镜或剖胸活检作出诊断。咳出的痰经80%固定，PAS染色有15%阳性的。
诊断依据：
少数病例可无，仅有异常表现。功能障碍随着病情发展而加重，伴亦趋严重。
表现是非特异性的,应与以下相鉴别: ①特发性; 特发性肺间质纤维化()(IPF)系指原因不明的下的弥漫性性疾病。炎症侵犯壁和临近的肺泡腔，造成肺泡间隔增厚和。肺泡和，其至小气道和也可受累。其临床特点有进行性，Velcro，进行性。肺功能受损以限制性通气障碍、弥散为主。
②; 　：起源于粘膜，又称为肺泡癌或，或简称肺泡癌。部位在周围。在各型中，低，女性比较多见。一般程度较高，生长较慢，沿细支气管、和肺泡壁生长，而不侵犯肺泡间隔。和血行转移发生较晚，但可经支气管播散到其他或侵犯。肺泡细胞癌在形态上有结节型和弥漫型两类，前者可以是单个或多个结节;后者形态类似。
③粟粒性; 　是由引起的一种。主要经。全身各器官均可发生，但以肺结核最为多见。其病变特征是形成并伴有不同程度的。
④肺实质性疾病如、及。
主要根据支气管肺泡灌洗物检查或经纤支镜或剖胸活检作出诊断。咳出的痰经80%固定，PAS染色有15%阳性的。
诊断依据：
少数病例可无，仅X线有异常表现。功能障碍随着病情发展而加重，呼吸困难伴亦趋严重。
主要针对如何清除沉着于内样物质。近年来用双腔(Carlen)或纤支镜作一侧肺或的灌洗，定期交替进行。近期疗效显示患者和肺功能均有改善，半数患者胸片可变清晰。远期效果则多数保持缓解状态，少数患者复发，常在6-24个月内，可再作肺灌洗。
(Pulmonary alveolar proteinosis，PAP)是一少见，以肺泡及终末内沉着大量的表面活性蛋白及为特征。根据发病，可将其分为PAP 与PAP两类。继发性PAP的治疗原则为治疗原发病。
对于原发PAP，明确有效的治疗方法是肺泡灌洗，即通过灌洗清除肺泡内沉着的和脂质。其效果取决于肺灌洗量，分次单侧全肺盥洗较纤支镜盥洗效果好。然而，当患者肺功能严重损害时则无法接受这一治疗方法。其原因是盥洗一侧肺内很少有可交换的气体，结果引起甚至。
为克服这些不足，自1999年始试用了自己改良的全麻密闭加压给氧分侧肺盥洗术，与以往方法的差别是新方法中有2个重要的改良：1、肺盥洗时给予密闭加压给氧。向肺内灌注生理盐水至单侧后，手动挤压给氧同时保持5厘米水柱，使其中纯氧和肺泡内盥洗液充分混合30-60次后再回收盥洗液。2、在首次和结束前的两次盥洗液中，均在生理盐水盥洗液中加入(1mg/L)。
第一个改良有三个有益作用：(1)使盥洗液与肺泡充分接触，增加盥洗效果;(2)改善氧合功能，特别适合单侧不能保持在者。因为它可以使纯氧混合在液体中，充分与肺泡接触而增加氧合。如果术中降低，除调整非盥洗肺的吸氧浓度和支持参数外，还应增加盥洗肺侧的给氧挤压时间。(3)在盥洗肺侧加压给氧的同时，可由于肺泡内压的升高而减少分流量和改善氧分压。第二个改良的有益作用是在生理盐水盥洗液中加入肾上腺素后，不但有利于支气管和回收盥洗液;而且有利于吸收肺泡内残留液体，减少其对呼吸功能的影响。
目前新方法已经应用到少数的患者，均取得了明显的效果。
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