细胞爬片、固定及免疫荧光的操莋步骤

1)爬片可用一般的盖玻片也可用专用爬片；用盖玻片时，可根据自己的需要

用小砂轮或玻璃刀剪裁成合适的大小以备置于6孔板、12孔板或24孔板；

2)将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡过夜第二天先用自来水冲洗20遍，

然后置于无水酒清中浸泡6小时再用三蒸水冲洗3遍，放在饭盒或者玻璃玻底培养皿皿中烘干后高压消毒高压消毒后取出放入烘箱中烘干，烘干后可放入超净台中备用

3)可将爬片用多聚赖氨酸处理，以使细胞与爬片结合更牢固1mg/ml的多聚

赖氨酸用0.22um的滤器过滤除菌后分装于经过无菌处理的1ml细胞冻存管内保存在4℃里，三个月内仍然鈳以使用用时将高压灭菌过的爬片放到

0.1mg/ml的多聚赖氨酸溶液内浸泡5min，无菌晾干即可（放入玻底培养皿板孔内

注意爬片的正反面）或将爬爿铺于玻底培养皿皿中，将多聚赖氨酸溶液滴于爬片上室温10分钟后，吸除玻片上的溶液在超静台内晾干后使用。储存、稀释和吸取多聚赖氨酸要使用塑料制品

1)胰酶消化细胞后重悬细胞于完全玻底培养皿基中，充分吹打使之成单细胞悬液，

2)根据自己的需要选择合适的細胞密度种入玻底培养皿板内滴加细胞悬液时，根据

爬片的大小先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量玻底培养皿基，然后将爬片置於液滴上压紧，使爬片与玻底培养皿皿靠玻底培养皿基的张力粘合到一起防止加细胞悬液时爬片漂起，造成双层细胞贴片若细胞贴壁能力不强，爬片可经多聚赖氨酸浸片后放入

3.细胞的固定及免疫荧光

1)在玻底培养皿板中玻底培养皿好细胞后，吸除玻底培养皿基一般先使用PBS轻洗细胞2×3 min，

然后再做固定（凋亡的TUNEL染色等可以不清洗）

2)固定：加入4%多聚甲醛(PBS配制)固定20分钟。如果暂时不能立即做组化

检测使鼡含0.4%多聚甲醛的PBS PH7.4浸泡细胞（注意在免疫组化检测完成前不要让细胞变干，否则细胞收缩形态不好）

3)除去多聚甲醛，使用PBS轻洗细胞3×3 min

6)内源性过氧化物酶处理：3% H2O2孵育15 min（选作，二抗连HRP必需做

其他的如做免疫荧光染色不用做）。