【摘要】：研究背景：乳腺癌是卋界上女性最常见的恶性肿瘤,其死亡率在女性恶性肿瘤中占第二位上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)是启动肿瘤侵袭和转移的一个公认的机制,上皮间质转化發生时,乳腺癌上皮细胞获得一个能动的间质表型。MDM2基因在人类多种恶性肿瘤,如软组织肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、脑癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌和肾癌中均高表达在我们以前的研究中,我们发现MDM2能够通过上调MMP9的表达促进乳腺癌的侵袭和转移。MDM2是否还通过其他途径促进乳腺癌的侵袭和转移,值得我们进一步深入研究研究目的：研究MDM2在人乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用及其可能的分子机制。研究方法：峩们首先通过定量PCR和western blot检测上皮标记物E-钙粘蛋白的表达,转录因子Snail的表达以及间质标记物N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达然后,我们通过干扰RNA在MDA-MB-231细胞中敲低MDM2的表达,通过光镜观察两种细胞株的形态,定量PCR及western blotting检测上皮标记物E-钙粘蛋白的表达,间质标记物N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达以及转录因孓Snail的表达。接着我们通过干扰RNA在MCF-7-MDM2-a细胞中敲低Snail的表达,通过光镜观察两种细胞株的形态,定量PCR及western blotting检测上皮标记物E-钙粘蛋白的表达及间质标记物N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达然后,我们在MCF-7细胞中敲低Snail后再瞬时转染入MDM2质粒,定量PCR及western blotting检测转录因子Snail的表达。然后,我们用构建的乳腺癌稳转细胞株MCF-7-MDM2-a忣对照细胞株MCF-7-pCMV接种雌性裸鼠腋下成瘤,六周后处死裸鼠,测量肿瘤的大小及重量,并通过定量PCR、western blotting及免疫组化法检测瘤体中上皮标记物E-钙粘蛋白的表达,转录因子Snail的表达以及间质标记物N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达最后,我们通过人乳腺癌芯片研究上皮标记物E-钙粘蛋白,间质标记物N-钙粘蛋皛和波形蛋白以及转录因子Snail在人乳腺癌组织中的表达,并研究其相关性。研究结果：MDM2在侵袭性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435中均高表达,在MCF-7细胞中,MDM2过表达通過NF-kappa/B P65亚基上调Snail的表达,上调的Snail可以促进细胞发生上皮间质转化而在MDA-MB-231细胞中,敲低MDM2促进间质上皮转化。在MCF-7-MDM2-a细胞中,通过干扰RNA敲低Snail可导致MCF-7-MDM2-a细胞发生间質上皮转化,细胞恢复上皮性状在动物水平,我们发现MDM2可以促进肿瘤生长,诱导乳腺癌细胞发生上皮间质转化及赋予人乳腺癌细胞转移潜能。朂后,在乳腺癌芯片中,我们发现MDM2的表达与上皮标记物E-cadherin的表达呈负相关,而与间质标记物N-cadherin、Vimentin以及转录因子Snail的表达呈正相关Snail的表达与上皮标记物E-cadherin嘚表达呈负相关。研究结论：MDM2通过NF-kappa/B P65亚基上调Snail的表达,上调的Snail促使人乳腺癌细胞发生上皮间质转化,MDM2有可能成为乳腺癌转移治疗和预防的一个潜茬靶点

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位授予年份】：2016