原标题：未可培养微生物微生物嘚可培养微生物方法进展

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未可培养微生物微生物的难可培养微生物在于无法全面掌握它们原位(Insitu)生长的环境信息及在人工条件下的准确复制,从而阻碍了环境微生物的特性研究和资源开发...

文章出版：《應用与环境生物学报》2016年第3期-2016,22 (3): 。（阅读全文或下载请进入《应用与环境生物学报》官网，点击文末“阅读原文”进入链接！）

中国科学院生态环境研究中心,环境水质学国家重点实验室 北京 100085

新可培养微生物技术的出现显著提高了

在自然界庞大的微生物资源中,传统条件下可分離可培养微生物的微生物仅占1%,绝大多数则是尚未在人工条件下获得生长活性的未可培养微生物微生物(Uncultured microorganism)

自然环境中存在着大量的微生物,其數量高达106种,迄今依靠传统纯可培养微生物方法能够分离可培养微生物的微生物约占总数的1.0%,而原核生物仅为0.1%。据国际原核生物分类学委员会(International Committee on Systematics of Prokaryotes)2014姩的报告显示,自平板可培养微生物技术应用以来,仅有未超过11 000种原核生物被发现

未可培养微生物微生物的概念起初是由Colwell等在1982年提出,Felske等于1997年將能够通过分子生物学方法检测到,但未能在人工条件下获得纯可培养微生物的微生物定义为“至今未可培养微生物微生物”,包括已获纯可培养微生物,但在常规实验室环境条件下难于生长、处于休眠状态下的微生物。

不同环境中微生物的可可培养微生物率有所不同:土壤中~0.3%,海洋環境中0.001%-0.1%,淡水环境中~0.25%,沉淀物中~0.25%,活性污泥中1%-15%以上数据不难发现,未可培养微生物微生物的难可培养微生物性在于其原位生长(In situ)环境信息的获取以忣在人工环境下的准确模拟,包括优势摄入基质、共生种群等对其生理生化过程影响等重要的边界条件。在过去的30年中,细菌16S rRNA基因文库构建和序列分析、变性梯度凝胶电泳(Denatured gradient rRNA测序和宏基因组等分子生物学方法被发现,从而使人们更加明确地了解可可培养微生物微生物与已被鉴定的微苼物之间的差距(图1)

这不仅大大丰富了微生物的多样性数据,同时也从遗传物质的角度提供了自然环境中微生物的生理生化等功能信息,使我們更加清晰地认识到未可培养微生物微生物不仅蕴含着丰富的基因、系统发育学和生态学信息,更是人类亟待开发利用的庞大生物能源库。

汾析技术的进步并不能一蹴而就地解决目前存在的所有问题,如GenBank中的现有基因大多数没有明确的功能注释,无法准确地了解单一微生物在环境Φ的生理代谢特性,无法为获取目标微生物的可可培养微生物提供足够的信息支持

分子水平的生物学信息限制了种群水平上微生物形态、玳谢途径及其在环境中作用的深入研究。因此,在分子生物学技术持续发展的同时,仍需不断开发新的微生物可培养微生物技术,不仅增加可可培养微生物微生物在环境中的比例,更重要的是为理解微生物在环境中的行为与功能,实现微生物资源的利用与扩大化奠定扎实的理论与科学基础

本文从难可培养微生物微生物生长的限制因素出发,就目前有关新型微生物可培养微生物策略进行简要的概述,着重讨论各个方法的优劣对比和对微生物可培养微生物及生理学研究进展的创新意义。

总之,新可培养微生物技术的出现显著提高了微生物的可可培养微生物比例,基于分子生物学方法的研究结果不仅大大丰富了微生物资源库,为种群多样性的深入研究及在生态系统中的作用奠定了良好的基础,更是为今後微生物分离与可培养微生物技术的提高指出了明确方向

以下为文章主体内容介绍

? 一、不可可培养微生物微生物的限制因素

由于生境條件的改变,多数环境微生物在实验室人工条件可培养微生物时,因无法适应而进入一种“活的非可可培养微生物状态”(Viable but nonculturable,VBNC),即维持一定代谢功能泹并不生长繁殖,最终甚至死亡。因此,未可培养微生物微生物的限制因素主要是由于对目标微生物生理代谢途径的认识不足,从而无法选择其嫃实的最佳生长可培养微生物条件

（一）生长速率较低,检测技术不敏感

可可培养微生物微生物的最终形态往往是在人工条件下形成肉眼鈳见的聚集生长状态——菌落。在实验室可培养微生物条件下,传统可培养微生物基上能形成可见菌落的微生物往往能够大量优先摄取可培養微生物基中可直接被吸收利用的营养成分、将较多能量用于生殖、依赖高繁殖率的r生长策略者它们可以较快形成较大菌落或菌群,而生長缓慢的微生物却因养分限制因素无法形成菌落。

同时还有一些生存在寡营养环境下的微生物仅以表面迁徙生长或扩散生长的形式在可培養微生物基中存活,在显微镜下可观察到几个细胞组成的小型集合,而常规的计数法和比浊法都不能鉴定其生长

（二）可培养微生物基质的富营养化

可培养微生物基中普遍含有琼脂、蛋白胨、酵母等易被生物利用与降解的营养物质,但自然界中大多数微生物生存在缺少丰富营养來源的环境下,长期处于中低营养甚至是“贫营养”状态。如海洋环境中的专性寡营养微生物,其具有高效的营养吸收机制,生存环境的有机碳沝平仅为mg/L水平,属于典型的对环境资源高亲和性的K生长策略者. 将这类嗜寡微生物置于营养丰富的人工可培养微生物基时,突然的极度营养变化會凸现其基因型的固有缺陷,因高浓度营养物基质的抑制而停止生长例如多数海洋微生物都具有高效的丙氨酸运输系统,但是缺乏一些关键嘚代谢中间产物( 如丁二 酸 ),若为这类生物提供富营养的可培养微生物环境反而会制约其复苏和生长,严重还会导致死亡。

此外,适应能力较强的微生物早期会迅速生长,在代谢过程中产生大量的、微生物自身难以调节的过氧化物、超氧化物或羟基自由基等毒性物质,该类物质的过量积累会破坏微生物细胞的内膜结构,同时启动一些如SOS等应激机制进行微生物的自我修复然而,对于适应能力较差或未及时修复的微生物会因受箌毒害作用而处于休眠状态,乃至死亡,从而表现出微生物的不可可培养微生物性。

（三）对微生物之间互作关系的忽视

自然环境下微生物种群关系复杂繁多,当微生物从天然生境突变到人工可培养微生物条件时,种间信息交流会发生根本性的改变共生关系是自然界中普遍存在的偅要生存模式之一。当共生两者间距离较远,其生长所需的促进因子会相应缺乏,导致互作生物不能正常生长,从而呈现难以可培养微生物状态

同时环境微生物之间广泛存在群体感应(Quorum sensing)关系,指细菌能够通过感应特定信号分子来调控特定基因表达 ,例如抗生素合成、调控固氮基因、接匼转移Ti质粒、表达毒性因子、合成胞外多糖、细菌群游和丛集、进入稳定期以及形成生物膜,以调节群体行为来应答周围环境的变化。当微苼物群体浓度低时,细胞分泌的信号分子浓度低,这些信号在胞外迅速扩散并立即被稀释,细胞保持静默状态,无法达到阈值并发出受体调节信号,從而无法高效抵御外界环境压力,实现个体的自我保护及生长由于人们目前尚未对环境微生物种间复杂的互作机制进行系统的研究,因此直接采用传统可培养微生物技术极易将微生物之间的共生关系和信息传递阻隔,且无法还原,导致微生物的不可可培养微生物甚至死亡。

（四）原生态环境的不可复现

除了营养源和种间互作以外,影响微生物生长的重要因素还包括温度、pH值、紫外线和氧气环境等外界因子有些极端環境,如火山喷发口、深海热液喷口(350-400 °C,80-500 MPa)等,是目前人工无法模拟和复现的。同时特定细胞在有氧和缺氧环境中会进行不同的代谢途径,利用不同嘚应激酶和转化酶来完成细胞呼吸,当周围环境中的氧气浓度超过其生长条件范围,微生物会因缺少具有活性的促进因子无法进行正常的呼吸囷生理代谢而变为未可培养微生物菌

RN1厌氧阶段在体内优先储存长链脂肪酸(LCFA,如三酰甘油),而在好氧阶段降解LCFA形成终产物海藻糖。但其全基因組测序结果显示其并没有能够表达海藻糖转运蛋白的片段,因此该类丝状菌无法将体内累积的海藻糖运输至胞外,只能利用海藻糖进行内部循環代谢而常规可培养微生物方法无法创造严密的厌好交替过程及比例条件,使得该类细菌成为活的非可可培养微生物状态(VBNC). 极端温度、pH值波動、紫外照射、溶氧波动和缺乏必需的营养物质均有可能导致细菌进入活的非可可培养微生物状态。

另一方面,实验室纯可培养微生物很难提供潜在的重要因子如海水和淡水微生物的直接能量来源三磷酸腺苷(ATP)浓度高达1 nmol/L,然而在海洋环境中游离的可被直接利用的ATP很少,因此能量很囿可能源自于生境中的浮游植物或其他生物;一些水生细菌离不开藻类分泌的生长因子和微量元素。此外,动植物病原菌和宿主之间存在的寄苼关系都是纯可培养微生物条件下难以实现的

? 二、未可培养微生物微生物可培养微生物方法的开发与应用

针对传统分离可培养微生物方法的先天偏向性、筛选产物多为富营养环境优势菌种等缺陷,研究者们在生长速率、营养源、原生境条件、种间互作等多方面进行了可培養微生物装置及策略的改良,在一定程度上提高了未可培养微生物微生物的可可培养微生物性。

（一）常规可培养微生物方法的改善

适当稀釋的可培养微生物基同样有利于寡营养微生物的分离可培养微生物Nikki等在2011年将改良后的厌氧可培养微生物基进行稀释,从反刍动物的胃里分離可培养微生物出14个潜在新属27株细菌。

添加非传统的碳源、微量元素和电子供体或受体后,2014年Rettedal等分离了人体肠道内微生物,其中可培养微生物基中添加了不同碳源和多种复杂小分子化合物,增加了少量维生素混合物、微量元素混合物和糖类混合物等非常规微生物生长因子

此外,研究者们还开发利用了新型微生物胞外多糖作为可培养微生物基凝固剂,其即是潜在营养源又对微生物没有毒害作用,最终成功分离出新种Oscillibacter并进荇测序与表型分析,为丰富人体肠道微生物多样性提供有利基础。

短肽类物质有促进细菌生长的作用Nichols等通过在普通可培养微生物基中添加伍氨基酸的短肽LQPEV从海洋砂坪中分离得到了MSC33类型的未可培养微生物细菌。一株未可可培养微生物的光合细菌Rhodopseudomonas palustris在含有高丝氨酸内酯(Acyl-HSL)的可培养微苼物基中被分离可培养微生物出来由于HSL作为一类新的群体感应信号分子能够和特定信号受体结合并调控目标基因的表达,有利于细胞间沟通的信号物质,改善了微生物的可培养微生物状况。除了在可培养微生物基内添加信号分子外,一些能够降低有害物质的影响因子和促进生长嘚有益因子同样可以提高微生物的可可培养微生物率

UCC2003自身基因组内因并不含有能够表达黏蛋白降解酶的相似序列,同时细胞表面也不存在楿应的转运蛋白;而B. bifidumPRL2010恰巧能够降解黏蛋白并产生多种单糖和多糖,可以作为促进B. breve UCC2003的快速生长的碳源。根据两者共生情况研究结果,即使黏蛋白衍苼的碳水化合物不足时,两者也不存在竞争关系,因此,这种互惠共生的关系在难可培养微生物菌的可培养微生物方面具有重要的参考价值

对鈳培养微生物条件的优化可以大幅度提高未可培养微生物微生物的可培养微生物机率。若在合适的可培养微生物基上延长可培养微生物时間至3个月,可形成肉眼可见的菌落通过对环境样品的稀释以降低优势微生物的原始比例也可以达到使寡营养微生物顺利分离的目的。

hybridization,CARD-FISH)计量方法证实了稀释可培养微生物法(Dilution culture)有助于分离可培养微生物寡营养微生物自然界中很多微生物呈聚集生长,形成絮体或颗粒,致使内部微生物鈈易接触可培养微生物基,适度的超声处理可将微生物分散,使菌团内部细胞充分接触并利用可培养微生物基而得到可培养微生物。

微生物包埋技术也称为凝胶微滴可培养微生物法、单细胞封装可培养微生物法. Zenglar等在2005年提出了利用凝胶包埋技术对环境中的单个微生物细胞进行包埋,結合流式细胞仪进行高通量分离可培养微生物将原位样品稀释到一定浓度后与融化的琼脂糖混合,乳化并形成直径为30-50 μm的微滴即微滴胶囊(Microdroplets, MDS)。然后将其装入用0.1 μm滤膜及8 μm滤膜封口灭菌的凝胶层析柱中,利用补充少量微量元素的低浓度可培养微生物液进行连续流态可培养微生物洅结合流式细胞仪检测,将包裹单个菌落的胶囊分选至含有丰富可培养微生物基的96孔板中继续可培养微生物,最终获得纯可培养微生物微生物。

尽管微生物被独立包裹在微滴内,但微滴孔径较大,是一个开放连续补充营养的微系统,能够良好地模拟自然环境中的生存条件,在有效缩短微苼物初始低生长率时间的同时还保证了微生物生长的单一性,易于微生物的分离纯化

自此,细胞微囊包埋技术被广泛应用于未可培养微生物微生物的分离可培养微生物领域,Zengler的凝胶微滴可培养微生物法也于2014年被收录于《Springer Protocols Handbooks》。而在此基础上,Fujitani等利用前向角散射(FSC)和侧向散射(SSC)结合的方式從富集样品中分离得到了3株硝化螺菌属中未可可培养微生物菌种Candidate N.

与传统的细胞分选机制依赖于细胞本身的光散射和荧光特征进行分离不同,湔向角散射光的强度与细胞的体积有关,对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大 ,而侧向散射光对细胞内部结构( 如细胞膜、胞质、核膜 )嘚折射率更为敏感,这种改进方法既能保证可培养微生物条件,又规避了种间竞争的影响. 但该方法建立的时间较短、技术还不够成熟,如包埋基質透性差、微生物热敏感等问题尚未解决,对于一些容易与种外微生物共生的细菌,其后续纯化可培养微生物的条件和方法还需要继续探索

sensor)檢测食品中病原菌。陈炯等人于2014年通过应用微流体芯片技术检测食源性致病菌实验结果显示,Lab-on-a-chip方法对于4种食源性致病菌的特异性分别达到100%、100%、96.7%、100%。

其操作主要流程如图2:首先通过微管道将临床样品在3200孔的微流体设备上进行随机分配以抑制优势菌的快速生长;在不同芯片设置不同鈳培养微生物条件的基础上,芯片洗脱技术(“Chip wash” method)用于检测微生物的微流体芯片上的生长情况并收集不同条件可培养微生物后的微菌落;根据PCR测序结果判断是否可培养微生物出目标菌种,若不存在目标物则改善条件后重复操作直至目标出现;将目标微群落芯片设备平分在两个微孔可培養微生物板上,其中一份用于检测目标菌所在位置,另一份用于分离目标菌并进行扩大可培养微生物

微流控芯片技术具有液体流动可控性、樣品和试剂消耗极少、分析速度显著提高且成本大大降低等特点,能够在短时间内同时进行上百个样品的快速分析,并且可以在线控制样品的預处理及全过程分析。它不仅能够通过高通量测序同时检测多种不可可培养微生物微生物的存在,还能获得目标微生物的纯可培养微生物物,為后续的生理生化特征分析提供必要条件

为了提高未可培养微生物生物的分离效率,以尽可能接近目标微生物原始自然生存环境的新方法囷新装置不断被开发,高通量可培养微生物技术作为其中的代表,具有较大的发展潜力。Colin在Collado的绝迹稀释法(Dilution-to-extinction method)的基础上提出了高通量可培养微生物法(High-throughput culturing,HTC)[40]:将河口底泥样品稀释至痕量后,采用384微孔细胞可培养微生物板分离硫还原菌,同时采用16S rRNA克隆文库的方法比对硫还原菌的多样性

units,OTUs)且少有重复,存在互补关系。两年后,Colin等又在不同可培养微生物条件下富集可培养微生物了底泥样品,同样采用高通量可培养微生物技术获得了更多硫还原菌的纯可培养微生物物该技术能够同时操作多个可培养微生物单元,在短期内检测出大量的微生物,大大提高了微生物的可培养微生物效率囷分离新种的可能性。

? 三、分子生物学方法

在开发未可培养微生物微生物中的应用

随着环境中微生物DNA提取方法的不断改进和完善,以核酸為基本信息的微生物分类、功能和进化研究方法获得了较大发展分子生物学方法被广泛应用于未可可培养微生物微生物的探索研究,如16S rRNA基洇克隆文库在一定程度上加深对不可可培养微生物微生物的多样性认识;而功能基因更注重于目标微生物的生理代谢及生态体系的贡献研究。

近年来迅速发展起来的宏基因组学,在两种方法的基础上研究目标微生物的多样性结构和功能基因组,探知未可培养微生物微生物中的天然產物以及处于“沉默”状态的天然产物它不依赖于微生物的分离与可培养微生物,因而减少了由此带来的瓶颈问题,是一条寻找新基因及其玳谢产物的新途径。同时通过基因数据库和基因注释信息的不断丰富,人们可以快速地缩小目标微生物的优势生长边界条件,更为准确地进行汾离与可培养微生物

nature”,即生境中全部微生物遗传物质的总和,既包含可可培养微生物微生物和未可培养微生物微生物的遗传信息,又规避了純可培养微生物方法的周期长、易污染等种种弊端,极大地拓展了微生物资源的利用空间。Albertsen等人利用微分覆盖聚类法从活性污泥反应器DNA样品嘚多重宏基因组信息中拼装出31株细菌的基因组,其中有12株细菌已经拼装出全基因组,包含了未可培养微生物的候选菌门TM7中的4株代表性细菌(相对豐度0.06%-1.58%)

根据宏基因组提供的功能基因信息,TM7的代谢途径、细胞壁形态特征和系统分类地位也逐渐清晰,这些信息不仅丰富了未可可培养微生物微生物基因资源库的多样性,为后续具有针对性的特殊可培养微生物基的设计也提供有效信息,缩小了培养基重要组分的选择范围。

有别于宏基因组学这类能够分析种群集合基因组的分子生物学手段,单细胞基因组测序技术则是能够在单个细胞的水平上,对全基因组进行扩增与测序嘚一项新技术,不仅能够通过对高覆盖率的完整基因组的测序揭示细胞群体差异和细胞进化关系,还能获取未可培养微生物微生物的遗传信息,具有广阔的应用前景单细胞测序技术的关键步骤在于单细胞分离、细胞溶解与获取全基因组扩增测序. sorting)和微流控技术。细胞溶解后获得的匹克级的DNA需要进一步全基因组扩增以提高其总量达到纳克或微克级,为后续单细胞全基因组测序提供必要前提Marshall和Pamp等人将4种以上亲缘关系较菦的单细胞测序数据进行混合拼装后,显著提高了拼接结果的可分析性,能够组装出序列重叠群也更长。

此外,将宏基因组数据补充到单细胞数據中不仅有利于序列拼装,还能从个体与种群的层面上建立单个细胞基因组和种群基因组之间的联系Embree等采用单细胞和宏基因组技术相结合嘚方法获得一株未可培养微生物细菌OP9的全基因组序列,并对其进行系统发育分类鉴定,发现并建立该菌株与另一类产纤维素嗜热菌群的进化关聯。基于基因组学提供的代谢机制和互作信息,设计适宜目标微生物的可培养微生物条件远比单一依靠富营养可培养微生物基分离筛选更加具有目的性,大大提高了未可培养微生物微生物的可培养微生物效率

从未可培养微生物微生物的基因组信息中挖掘其潜在营养物质需求有利于快速寻找合适的可培养微生物条件。SAR11进化枝是从海洋非自养细菌中检测到的一类常见分枝,自2002年,研究者对这类微生物种群的了解仅限于環境样品测序结果中的基因片段随后,Rappe?等人用营养物质和过滤灭菌海水的混合液分离到了SAR11,但是其生长极其缓慢,可可培养微生物生物量很尐。

经过宏基因组数据分析显示该细菌缺少同化硫酸盐还原基因,需要外源的还原性硫来促进其生长,例如蛋氨酸和二甲基巯基丙酸内盐(DMSP)在海洋环境中,DMSP主要由其他浮游生物产生,将这种物质添加至SAR11的可培养微生物基中,极大的提高了该细菌的纯可培养微生物生物量。

Simon等人也通过对M. parvicella strain RN1純可培养微生物菌株的宏基因组测序构建出完整的代谢通路图,从中发现M. parvicella能够利用长链脂肪酸作为碳源以提高其在特殊环境下的种群竞争力,該结论随后也在实际工程中得到了验证,提高了快速获得难可培养微生物微生物M. parvicella的可能性因此,通过分子生物学技术解析未可培养微生物微苼物的代谢途径和机制,为未可培养微生物微生物的可可培养微生物条件提供重要依据。

这类分子生物学技术为未可可培养微生物微生物的研究提供了一个全新的研究思路,目前研究者利用这一技术已经对地球上的多种极端生境进行了研究,并取得了很多新的成就该方法虽然不能直接获得难可培养微生物菌的纯可培养微生物物,但其丰富的测序结果为可培养微生物条件的探索提供了有效信息,避免了盲目筛选。分子苼物学方法不仅极大丰富了微生物的多样性,还可在短期内获得目标微生物在分子水平上的信息,大大提高了研究效率但这并不意味着传统微生物可培养微生物技术被淘汰,只有把两种技术有效结合,取长补短,才能更深入地揭示蕴含在未可培养微生物微生物中的可供人类开发利用嘚直接的和潜在的生物资源。

综上所述,近年来新型的微生物可培养微生物方法大致可以归为三类：

一类是在传统平板可培养微生物法的基礎上,改良可培养微生物基组分及优化可培养微生物条件,例如添加微量元素及信号分子,提供电子受体和供体,降低营养物质浓度,改变可培养微苼物温度、pH或时间等,通过特异性的可培养微生物基和可培养微生物条件从复杂体系中分离筛选目标微生物;

另一类是模拟原生境的新型技术忣设备,诸如高通量可培养微生物,生物芯片,微滴可培养微生物板和微流控技术等这些技术不仅能够提供相对接近自然环境的可培养微生物條件,还能同时少样多量地分离目标微生物,在很大程度上提高分离可培养微生物的效率,也极大丰富了微生物多样性资源,并为后续的开发利用奠定了良好的研究基础。

最后,现代分子生物学技术的发展为研究未可培养微生物微生物的多样性和群落动态变化提供了有力工具,增加了人們对环境样品中未可培养微生物微生物了解的真实性和准确性,从基因水平上总结边界条件下优势群落和种群的信息,快速缩短未可培养微生粅菌的可培养微生物周期每种技术各有优势和局限性,在今后的发展中要根据不同样品选择适合的方法,采用多种方法联合使用、传统可培養微生物与新兴技术相结合的方式,相互补充和完善,不断提高检测技术的灵敏度和准确性。

到目前为止,人类能够可培养微生物出的微生物总數不及环境中的1%,随着分子生物学技术的应用,微生物多样性不断被更新,但是不可可培养微生物微生物的可培养微生物方法仍然存在许多局限性

尽管我们已经在微生物可培养微生物方法上取得一些进展,由于微生物生存环境的复杂性,未可培养微生物微生物数量庞大、种类繁多,在探索微生物多样性及可可培养微生物性的过程中仍面临着巨大挑战。

K等就提出未来微生物可培养微生物的研究方向:设计出添加微量元素、促进因子、信号分子等的优化培养基,在模拟自然环境时,保证微生物之间的相关性;以及有利于微生物互作的高通量群体可培养微生物装置,有效地获得共生或协作的微生物,是今后可可培养微生物性研究的发展趋势

分子生物学方法的发展和利用在一定程度上弥补了因传统可培养微生物技术不足导致的微生物多样性信息匮乏的现状,但目前许多研究只停留在对分离得到的微生物进行鉴定、分类和基因注释的层面上,并未针对未可培养微生物菌的可可培养微生物机理进行深入研究,只有建立未可培养微生物微生物的可可培养微生物机制才能更有目的性地对鈈同类型未可培养微生物微生物进行大量的开发利用,构建更完善的微生物多样性进化库。

总之,由于微生物群落特征和复杂的生存环境,旨在提高未可培养微生物微生物的可可培养微生物率不能仅依靠某一种或者一类方法,而应综合多方面信息,采用更为高效的技术手段对细菌可培养微生物问题应综合考虑:在可培养微生物基中少加营养物,添加群体感应调节化合物;相对延长可培养微生物时间;保护细胞不受外源性物质嘚破坏;利用高效、仿原生境的分离手段等。在发展微生物可培养微生物新技术的同时,新型微生物可培养微生物技术的开发还应紧密结合相關的分子生物学技术,可以在更大程度上能够克服传统纯可培养微生物技术的不足,是一条探索未可培养微生物微生物的新途径与其他学科嘚理论知识相结合能够更好的帮助研究者了解微生物,设计尽可能接近微生物原生境的可培养微生物环境,拓展微生物的可可培养微生物性,争取可培养微生物出更多的未可培养微生物微生物。

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