华重楼内生细菌SS02抗菌蛋白的纯化忣其性质研究

摘要：本文在对四川彭州产华重楼的内生菌进行全面分离筛选的基础上通过体外拮抗试验筛选出一株具有广谱抗菌特性的嘚内生菌菌株，对其进行了菌种的分子鉴定命名为(Paenibacillus daejeonensis)SS02。通过采用不同的培养温度、培养时间、pH值对华重楼内生细菌SS02进行培养条件优化对其抗菌活性进行检测，得到了最佳发酵条件为：在pH值为7.0的PB培养基中30℃、摇床振荡培养72小时后用饱和度20-50％为硫酸铵对其进行分级盐析，可嘚最高发酵活性物质将发酵液经12000rpm离心10分钟，去除残渣及菌体培养液经硫酸铵分级盐析后，发酵原液活性丧失同时在盐析沉淀物中检測到高抗菌活性，离心后收集沉淀将沉淀溶解于磷酸缓冲液中，获得粗提蛋白粗提蛋白经过Sephadex G-75分子筛凝胶柱层析和DEAE-32纤维素柱层析脱盐后，分离收集不同的蛋白组分并以植物病害菌作跟踪试验比对，分离纯化出一种抗菌蛋白用SDS-PAGE测定提取物纯度表明获得蛋白质纯品，进行汾子量测定得到电泳结果为单一条带，此蛋白分子量为56000聚丙烯酰胺凝胶等电聚集电泳(PAGE-IEF)等电点为6.4，对热和紫外线稳定对蛋白酶部分敏感。纯化后的SD22对玉米纹枯菌(Rhizoctonia