【图文】2019届一轮复习人教版 限制酶的选择及目的基因的检测与鉴定 课件_百度文库
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2019届一轮复习人教版 限制酶的选择及目的基因的检测与鉴定 课件
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你可能喜欢基因工程中用限制酶切割质粒和目的基因用一种限制酶和两种限制酶是否都可以?各有何优缺点?
问题描述：
基因工程中用限制酶切割质粒和目的基因用一种限制酶和两种限制酶是否都可以?各有何优缺点?在高二生物试题中有题答案提示用两种限制酶切割可以防止环化.但其他习题却提示用一种限制酶.寻求具体答案.
问题解答：
最后是两种酶,但我们在工作实践中也常有用一种酶的时候,确实存在易环化的问题,不过后面不是还要挑克隆吗,还要鉴定,那时挑到正确的就可以了.
我来回答：
剩余:2000字
必须!缝合的时候需要一样的末端
当然最好是同种酶,最好是产生同样的粘性末端. 再问： 有没有用两种限制酶的情况？ 再答： 有啊，两端用两种酶，这样更特异。
好处有两点：1 可以有效的避免载体质粒自连,提高重组质粒的比例.2 可以控制插入片段的的方向.因为单酶切的话插入的方向是随机的,而双酶切片段的插入方向是一定的.
不是吧,黏性末端是4个吧.什麽是切割末端……切割末端=黏性末端=2倍的切割点吧.
处理质粒是为了把已经连到质粒上的基因切下来,然后释放出质粒上的粘性末端.而用同样的限制酶切目的基因,这样就会在目的基因两端切出粘性末端,这样,就可以把载体和目的基因连到一起,形成新的需要的质粒了.
因为要获得一个目的基因,需将此目的基因两边多余的脱氧核苷酸切除掉,因此有两个切口,又DNA分子是双链的,所以有4个磷酸二酯键被切.
不是同一种是同种用A和B限制酶切割载体,用C和D切目的基因要求A=C或D,B=D或C,这是教科书的意思你的理解是A=B=C=D
具有相同的粘性末端的两条DNA链在连接酶的作用下相连.只有一种酶切时,切出的粘性末端相同,让目的基因和质粒相连接即可,但是由于是混合,连接的结果不尽相同.DNA连接酶将目的基因和质粒粘性末端的3-5磷酸二酯键连接起来,碱基之间的氢键自动连接.是两个目的基因都连接上么?那个应该有前提的,有了前提根据题设直接算就好了,和数
因为质粒可以进入受体细胞与其细胞核同步进行DNA复制并进行表达,质粒可以重复使用!
是的,必须的.因为同种限制酶的碱基序列相同,目的基因与运载体重组后必须用同种限制酶,它们的碱基序列才会相同.
“两条目的基因的1处粘性末端不也可以链接吗?”,当然存在这种可能性.但用两种限制性内切酶切割最主要的目的是防止载体切割后的自连,几率不但大,而且可以产生克隆,大量的自连会影响挑选重组的克隆.
不可能用限制酶从基因组中获得目的基因.首先目的基因在基因组中的拷贝数一般都很少,多数只有一个.一大管基因组中只有一丁点目的基因.其次限制酶的识别序列太短,难以保证除了目的基因以外庞大的基因组中没有其他可以识别的位点.所以都是先通过PCR的方法把目的基因扩增,然后连接到比基因组小得多且酶切位点已知的质粒上,再用限制性酶切
不对,因为太绝对!一般情况下是用同一种限制性内切酶,这样暴露同样的黏性末端,然后用DNA连接酶进行连接.但是也存在不同的限制性内切酶切割形成相同的黏性末端.
启动子和终止子 再问： 为什么不能填合适的酶切位点？ 再答： 可以答相同的限制性内切酶位点再问： 坏了...没写相同啊，写合适不可以吗？ 再答： 不可以，相同才能保证二者的结合再问： 555，那谢谢你啦~
你说的情况均有可能,与目的基因重组后,导入受体细胞,通过培养受体细胞表现出的性状再进行筛选. 再问： 确定？你是生物老师？O(∩_∩)O~ 再答： 是的。
切割的目的是将载体和目的基因进行连接用同一种限制酶切后产生的dna片段 切口处相同能够连接 再问： A.切割目的基因与切割运载体（如质粒）时必需用同种限制酶 B.切割目的基因或运载体时一般只用一种限制酶 这两个选哪个？ 再答： 选B 因为连接只需要切口相同即可连接到一起， 同种限制酶切最好；但很多不同的限制酶也能产生相
同种限制酶切割同样碱基序列,但切割的目的基因仅俩端切割位点碱基序列相同,中间的基因排列不一定相同,同样质粒被切割的片段,也是仅俩端切割位点碱基排列相同,总而言之,目的基因有一定长度中间是所需要的.
同种限制酶切出的粘性末端是互补的,质粒经切割后会露出粘性末端,目的基因经同种限制酶切割后也会露出粘性末端,两个粘性末端会发生碱基互补配对,在DNA连接酶的作用下目的基因就和质粒连接在一起,形成重组质粒.
问题很乱.只能猜着回答了,目前实验室使用的大肠杆菌都是被基因工程改造了的,是内切酶、重组酶缺失的,所以自身不能重组、也不会剪切DNA.
也许感兴趣的知识问什么用两种限制酶切割目的基因与质粒可以避免其自身连接【生物吧】_百度贴吧
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问什么用两种限制酶切割目的基因与质粒可以避免其自身连接收藏
比如，如果一个目的基因左右两端分别有EcoRI和SmaI的切割位点，那么酶切后的产物就应该是这样但是这样的话目的基因自身仍然是可以相互连接的啊，这是为什么
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然后连接的时候就不会发生自身环化啊～
自身不可以连接啊，末端都不一样。。。
我要是现在可以画，就画给你看，黏末端，两头都不一样
自身环化是因为切口切开后，序列仍旧可以重新被DNA连接酶连接，但是如果是两种酶切序列不同，相当于产生了缺口，只有目的基因才能被DNA连接酶连接上去，得到的重组质粒比例大易筛选
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关于基因工程中限制酶的切割问题切割质粒和目的基因必须用同种限制酶吗,若两种限制酶切出的粘性末端可互补配对可以吗若目的基因两端用不同的限制酶切割,那质粒上应该怎么切
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不一定,例如BamHI酶的切点为G↓GATC C,BglⅡ的切点为A ↓ GATC T,他们的粘性末端可以拼C CTAG↑ G T CTAG ↑ A接,互补序列为-GATC-.
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基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC
悬赏：0&答案豆
提问人：匿名网友
发布时间：
基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-。根据图示判断下列操作正确的是[&&&&]A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
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1根据基因工程的有关知识，回答下列问题：&(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_______和______。(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是_________。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和_____DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是________，产物是__________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用__________技术。(5)基因工程中除质粒外，__________和__________也可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_____________。2(选做题)根据基因工程的有关知识，回答下列问题：&(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_______和______。(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是_________。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和_____DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是________，产物是__________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用__________技术。(5)基因工程中除质粒外，__________和__________也可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_____________。3下列属于基因运载体所必须具有的条件是①具有某些标志基因 ②具有环状的DNA 分子 ③能够在宿主细胞内复制 ④具有多种限制性内切酶[&&&&]A．①③B．②④C．①②D．③④4限制性核酸内切酶主要是从______________中分离纯化出来的，每种限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中____________________断开。以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：其中的(2)能和________(填序号)在_____________的作用下连接成_______________。
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