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Re:求教，dgge和银染的问题
各位高手，我通过扩土壤微生物的16s V3区的片段，跑DGGE，来分析微生物多样性，最近扩的PCR产物也挺好的，但我把9管25ul体系的产物合并，冷冻干燥后喜事成25ul跑dgge，染色的结果，条带还是很模糊！因为没拍照，暂时没有图片传上来我是想问问大家，你们跑DGGE的时候一般点多少UL的样？我看有的朋友好象只点几UL的样就能跑了，可我点那么多还是很模糊，是不是染色的时候有问题？具体是：固定液：180ml水+20ml冰醋酸1小时
双蒸水洗两次：2min一次
染色液：150ul甲醛+0.2g硝酸银+200ml水 45min
显色液：150ul甲醛+6g碳酸钠+10mg/ml的硫代硫酸钠40ul+200ml水显色的结果还是很模糊，很淡，而且显色的时间也够长了，请高手分析一下到底是怎么回事？谢谢啊，我梯度为30%~65%我没做过银染，但是就两个问题发表一点看法：1、上样量多少？――没有一定的说法，这和你样本的多样性有关，如果样本中具有很高的微生物多样性，那么需要较多的上样量；如果样本单一，所需的上样量就很少――电泳前要前对自己的样本有个大概的估计。2、条带模糊，除了电泳等多方面的原因，还可能是 由于上样量过多，这时可以减少一点上样量试试。我的银染配方和过程与你不一样,需要的话pm我.下面是我的一张染色图
screen.width-333)this.width=screen.width-333" width=640 height=478 title="Click to view full Image7-8-30.jpg (1392 X 1040)" border=0 align=absmiddle>你可以看看你的显影液是不是出现了问题，我曾经做的时候，因为无水碳酸钠出现了质量的问题，导致凝胶染色结果发白或黄，十分不清楚谢谢大家，我做的土壤，隐约能看到条带还是不少的，只是始终不能清晰的染出来，ygyyyj 这位朋友，我怎么和你联系啊？我把我的邮箱写出来，麻烦您有空时把银染方法发给我，谢谢啊flowerainia这个朋友，我每次染色都能隐约看到条带，给人的感觉就是如果量再大一点，或者银染时间久一点，就能染清晰了，可事实是我加长银染到1小时，量再加大好几管，还是不清晰，麻烦您能告诉我您一般上多少ul未浓缩的样么？我做过E.coli扩出来的单一条带的对照，能染的很清晰的，而且只染3分钟对照就出来了，但样品的条带一般都要把胶染的发黄时才显出来senseil wrote:flowerainia这个朋友，我每次染色都能隐约看到条带，给人的感觉就是如果量再大一点，或者银染时间久一点，就能染清晰了，可事实是我加长银染到1小时，量再加大好几管，还是不清晰，麻烦您能告诉我您一般上多少ul未浓缩的样么？我做过E.coli扩出来的单一条带的对照，能染的很清晰的，而且只染3分钟对照就出来了，但样品的条带一般都要把胶染的发黄时才显出来在做环境样本时，我一般上10－20ul未处理的PCR产物，根据泳道的宽度而定。在单一菌株情况下，一般3－5ul就可以了。weiwei23202 wrote:你可以看看你的显影液是不是出现了问题，我曾经做的时候，因为无水碳酸钠出现了质量的问题，导致凝胶染色结果发白或黄，十分不清楚我每次染色都会把胶染黄,我可以看看你染色的图片吗?谢谢!!我现在染出来的胶,背景还是很深,怎么办啊?药品都换过一批了,和pcr的产物关系大吗?我的产物应该还是可以的,但是染的时候泳道染的很黑
（缩略图，点击图片链接看原图）希望大家帮帮忙,只有把胶染深的情况下才能把条带染出来，很郁闷有人在吗?求救啊这么暗的条带，要染这么久，应该还是PCR产物不够吧，能不能上个PCR产物的电泳图？我的银染方法是：固定液:10％乙醇,0.5%乙酸,固定10-15 min,不要倒掉,回收银染液:10％乙醇,0.5%乙酸,硝酸银0.2%, 染色10min,ddw迅速洗涤3次,每次不超过15s,显影:3%氢氧化钠,甲醛0.5%,摇至条带清晰.后加入固定液终止反应5min,水洗干净,就可以保存了.和你的方法比较:你的染色时间过长,染色后水洗时间过短,导致硝酸银在胶上大量残留,当然就导致背景太深.我的方法速度很快,效果也很不错,你可以试一下.当然最关键的是要保证pcr产物的质量和DGGE胶的质量.senseil wrote:具体是：固定液：180ml水+20ml冰醋酸1小时
双蒸水洗两次：2min一次
染色液：150ul甲醛+0.2g硝酸银+200ml水 45min
显色液：150ul甲醛+6g碳酸钠+10mg/ml的硫代硫酸钠40ul+200ml水显色的结果还是很模糊，很淡，而且显色的时间也够长了，请高手分析一下到底是怎么回事？谢谢啊，我梯度为30%~65%ironicsjq wrote:这么暗的条带，要染这么久，应该还是PCR产物不够吧，能不能上个PCR产物的电泳图？我的银染方法是：固定液:10％乙醇,0.5%乙酸,固定10-15 min,不要倒掉,回收银染液:10％乙醇,0.5%乙酸,硝酸银0.2%, 染色10min,ddw迅速洗涤3次,每次不超过15s,显影:3%氢氧化钠,甲醛0.5%,摇至条带清晰.后加入固定液终止反应5min,水洗干净,就可以保存了.和你的方法比较:你的染色时间过长,染色后水洗时间过短,导致硝酸银在胶上大量残留,当然就导致背景太深.我的方法速度很快,效果也很不错,你可以试一下.当然最关键的是要保证pcr产物的质量和DGGE胶的质量.我的染色方法与你差不多，但是在DDW漂洗的时候我反而漂洗的久一些，之后加入显影液后，摇的时间不用很长条带就显现出来了。此外，银染的时间个人感觉与温度有很大的关系哦，温度低的时候我一般染色7分钟，夏天我只染5分钟，个人觉得效果还OK。欢迎大家继续交流！互相学习吧！ironicsjq wrote:这么暗的条带，要染这么久，应该还是PCR产物不够吧，能不能上个PCR产物的电泳图？我的银染方法是：固定液:10％乙醇,0.5%乙酸,固定10-15 min,不要倒掉,回收银染液:10％乙醇,0.5%乙酸,硝酸银0.2%, 染色10min,ddw迅速洗涤3次,每次不超过15s,显影:3%氢氧化钠,甲醛0.5%,摇至条带清晰.后加入固定液终止反应5min,水洗干净,就可以保存了.和你的方法比较:你的染色时间过长,染色后水洗时间过短,导致硝酸银在胶上大量残留,当然就导致背景太深.我的方法速度很快,效果也很不错,你可以试一下.当然最关键的是要保证pcr产物的质量和DGGE胶的质量.ironicsjq,请问你染的胶颜色是否发黄?如何能让胶不变黄呢?谢谢!!看来同样的DGGE银染，不同实验室差别很大啊。。。我作过银染，和你的程序一样，据我经验，硫代硫酸钠水溶液不稳定，我们一般都是直接丢一小粒硫代硫酸钠固体；也有可能是你ＰＣＲ产物问题，为排除这个可能性，可以把ＰＣＲ产物先在琼脂糖电泳检测，如果有条带，ＰＣＲ产物一般没问题，我作过银染，和你的程序一样，据我经验，硫代硫酸钠水溶液不稳定，我们一般都是直接丢一小粒硫代硫酸钠固体；也有可能是你ＰＣＲ产物问题，为排除这个可能性，可以把ＰＣＲ产物先在琼脂糖电泳检测，如果有条带，ＰＣＲ产物一般没问题，
您的位置： &&
??????????hihoCOder新手（Java）求教，一直RE！！！
大家好，新手求教个问题，我的程序提交上以后总是报RE，找了好久，都不知道怎么回事，烦请各位给看看，哪里写的不对？先谢谢了
import java.util.*;
public class Main {
public static void main(String[] args) {
// TODO Auto-generated method stub
Scanner input = new Scanner(System.in);
int n = input.nextInt();
int m = input.nextInt();
Scanner strInput = new Scanner(System.in);
String str[] = new String[n];
for (int i = 0; i & str. i++) {
str[i] = strInput.nextLine();
Queue&String& strQueue = new LinkedList&String&();
for (int i = 0; i & i++) {
if (strQueue.contains(str[i])) {
System.out.println("Cache");
strQueue.remove(str[i]);
strQueue.add(str[i]);
System.out.println("Internet");
if (strQueue.size() == m) {
strQueue.remove();
strQueue.add(str[i]);
for (int i = 0; i & str. i++) {
System.out.println("Internet");
1 answer(s)
你为什么要同时打开两个Scanner(System.in)，只用一个就好了。。。在我这边的机器上，两个Scanner跑不出样例，去掉一个Scanner就好了。
另外，你这个代码就算不RE也会TLE，LinkedList查找的时间复杂度是O(N) 的。
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佣兵, 积分 323, 距离下一级还需 427 积分
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请问这张卡使用的时候，人物是完全重置成初始状态重新调整，还是说进去后，是我现在的人物造型，可以进行微调？？
其实我就是想微调下，大部分还是不做改动。如果这张卡要重新设计人的话，那我就要考虑考虑能不能捏回原来的样子了…………500腌呢…….
現在ツンドラ進行中
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是 现在的人物造型，可以进行微调
佣兵, 积分 323, 距离下一级还需 427 积分
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哦哦哦哦，感谢
那我就能放心的买了-v-
做游戏的苦逼伪文艺青年
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用了4张了。。。准备第5张了。。
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下面是引用传说的黑骑士于 17:09发表的:
用了4张了。。。准备第5张了。。 我也用了两张才捏成我头像的样子
現在ツンドラ進行中
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等出了公主头，去买第二张，顺便把胸部改小一点
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这游戏比例很怪 胸部小了 腿短
想要腿长的话 胸部就是木兰飞弹的感觉
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to find out more about this error.主题 : 求教一个项目难题的思路！！！！
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求教一个项目难题的思路！！！！&&&
首先说声谢谢，呵呵， 直接上需求 
项目：《面向用户的身高测量》需求：1） 通过新建一个用户来实现该用户下数据的存储  。                （新建的用户包括用户基本信息什么的）2） 进入选中的用户进行身高测量并纪录测量数据 。                 （分为早上和睡觉前两种身高）3） 某一个用户的数据可以根据早上和睡觉前两种进行分类  。（通过一个segmentcontrol关联两种测量分类）4） 可以删除某一次结果，如果删除一个用户，那么这个用户的所有数据全部删除。 （这里就是楼主遇到的问题，因为数据库是分开建的，不知道删除用户时候该用户下的数据会不会被删除）我现在思路有点混乱我建了一个用户的数据库  一个测量结果的数据库但是不知道怎么把这两个数据库联系到一起看完需求的朋友，大家可以发言交流下自己的思路 （谈谈框架搭设和数据库，主要是数据库），也欢迎大家把自己遇到的项目技术难题拿出来互相交流学习，呵呵。好人一生平安！
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hi manwell well
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一个用户表，一个测量结果表删除时根据用户id，删除测量表中此用户的所有测量信息，一条删除sql语句应该就可以搞定了
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引用 引用第3楼jimney于 10:57发表的&&:一个用户表，一个测量结果表删除时根据用户id，删除测量表中此用户的所有测量信息，一条删除sql语句应该就可以搞定了 那么请问阁下1）我的测量表是要写一个放数据的key还是两个key呢（就是早上和睡前的两种）2）我感觉用户表和测量结果表是两个没联系的表根据id删除一个用户只是删除了当前用户   和另外一个表联系不上 这一点很纠结
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回 4楼(king8) 的帖子
to 1:早上跟睡前，用一个布尔型或者整形字段（0-早上 1-晚上）都可以表示啊to 2:这两个表怎么会没有联系的呢记录一条测量数据的基本包含字段：用户id、哪个时候、测量高度 用户基本信息：用户id（唯一，如学号编号）、姓名、年龄。。。用户id不就是这两个表关系么，这个就同学生信息表和选修课程表的关系一样。lz应当再温习一下数据库操作的基本知识。
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回 6楼(jimney) 的帖子
恩&&好的&&谢谢前辈指点那如果我们要测量的（早，中，晚）三次呢bool显然不行了，我定义一个varchar类型的Time，可以解决测量三次的问题吗
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Re:回 6楼(jimney) 的帖子
引用 引用第7楼king8于 13:35发表的 回 6楼(jimney) 的帖子 :恩  好的  谢谢前辈指点那如果我们要测量的（早，中，晚）三次呢bool显然不行了，我定义一个varchar类型的Time，可以解决测量三次的问题吗
举个例子 直接弄个varchar，里面放早 中 晚。 比如字段是xxoo id&&xxoo&& 1&& 早id&&xxoo2&&中id&&xxoo3&& 晚id&&xxoo20 中id是你放身高数据的表的id， 自动的。建议楼主先去去看看数据入门吧
http://dev.cocounion.com/能吃能喝能睡
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好的&&多谢了以前确实不懂数据库现在项目要直接用表示压力很大
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