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293T细胞是怎么包装病毒的我是新手,来实验室听师兄说将要过量表达的基因转入293T细胞,可以通过293T细胞包装病毒来收集,我想问下293T细胞是怎样将目的基因包装成病毒的
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慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例)：第一天：1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度第二天：\x09\x09\x091.转染293FT细胞.1.500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G 2.500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine20003.5min后,将,溶液混合,室温静止30min\x094.从6孔板中吸出1ml培养基,然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物.2.6-10h后,移除含有DNA-脂质体复合物的培养基,代之以正常培养液DMED+ 10%FBS（从此刻开始算时间）.第三天：3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上第四天：4.48h收获含病毒的上清,0.45um滤膜过滤,同时再往6孔板中加入2ml完全培养基4.感染细胞：用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞.第五天：5.72h后再次收获病毒上清.将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞.6.一般感染48h后,就能见到明显的荧光.说句实话我是复制过来的,希望可以帮你.
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扫描下载二维码我跑出来的PCR目的条带很清晰,但是marker很暗,每个加样孔都一样的暗
我跑出来的PCR目的条带很清晰,但是marker很暗,每个加样孔都一样的暗如题,另外换了其它的maker也是很暗,但是同样的maker别人跑出来的条带就很亮,我想请问是不是我样本的问题,因为除了样本不一样,其它的试剂步骤跟其她同学的都是一样的?
博凌科为-为你你用的凝胶染色剂是EB还是Goldview,如果是后者,那Marker一般都跑的不理想.
我有更好的回答：
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与《我跑出来的PCR目的条带很清晰,但是marker很暗,每个加样孔都一样的暗》相关的作业问题
建议：循环次数减少3,Mg离子浓度降低到1.2mm,提高annealing的温度
可以照胶的时候去调节亮度,对比和γ射线,然后会清楚一些.同时,你优化下PCR扩增条件之类的,提高扩增效率.希望对你有帮助.望采纳. 再问： 感谢回答，我会试试调节亮度。请问，这跟电泳时使用的染色液有关系吗？ 再答： 也有一定关系，一般来说还是EB效果最好，现在市面上卖的EB替代物吖啶橙之类的染色效果会稍差。
扩增时候可能退火温度低了,本来不能与引物紧密配对的片段也阔出来了.重新扩增吧.
恐怕还是cDNA的问题,actin因为量比较丰富,所以即使破坏一些仍能P出来,但你的目的基因就不同了
一个可能原因,DNA结合了蛋白质,所以跑不出去.加loading buffer后加热（90度以上）一下再上样试试.另外一个原因,你的产物特别大（不一定是目标产物） 再问： 我做的是菌落PCR电泳检测结果，我在想会不会挑的菌太多了，导致体系里蛋白含量高而且P不出目的条带？ 再答： 要蛋白跟你的DNA结合才行，我们做菌落P
你的电泳缓冲液和制胶缓冲液浓度不准或者脏了吧?换新的电泳缓冲液和制胶缓冲液试试.marker都出问题说明是你的胶的问题,或者电泳操作的问题.
加多几个循环,或者换好一点的Taq酶
最大的可能就是污染了呗,PCR配体系与加模板时都要戴口罩手套,外加最好不要再你们常做实验的地方加这些东西,空气中极有可能有相应模板气溶胶存在.
博凌科为-为你应该是模板问题,可能模板有降解或是模板浓度没把握好,以前也遇到过此问题,基本都是模板的事
因为你PCR扩增出来的量不够,所以其他条带都看不清了.从图里看,你的PCR条带都还比较一致,说明引物还好.建议你改一下PCR的条件和体系,可以做一个梯度试试.可以改的条件包括PCR结合阶段的温度（做一个温度梯度）,延长阶段的时间,PCR循环数（可以加大到32）,PCR体系的Mg离子浓度,模板量等等.
引物、模板没问题的话,就加cycle,多扩几轮,就亮了.（一般pcr酶和buffer是没有问题的,除非你反复冻融或者长时间放置室温）如果上一轮扩出来特异性好的话,可以适当降低退火温度.多扩了几轮,退火温度也降低了,但是条带仍然很淡,这时候,基本上就是引物和模板的问题了.你要好好看看引物特异性好不好,dimer亮不亮,（
这不算降解.没关系,可以用.
你没怎么说清楚.首先,是大片段和小片段（目的条带）都暗,还是只有小片段暗?如果都很暗,可能是酶切体系中的质粒加的不够多,或者是你提取的质粒浓度不高.如果是只有小片段很暗,那就说明内切酶没把质粒切开,你要注意一下内切酶的活性或浓度、温度、离子等对酶活是否有影响.1、3ul的质粒感觉有点少,你是割胶回收的吗?那质粒量要多加
就只是你的目的基因菌液PCR扩增不出来么?不过我觉得你如果质粒、电泳、菌落PCR都能验证的话,菌液PCR结果如何都意义不大了.
原因有很多,1,PCR出了问题,2,跑胶的缓冲液出了问题3,MARK溶液中的DNA被降解了4,操作时间太长,DNA被降解
看条带的中点.
可能是菌的基因组DNA,不过基因组DNA是很大的,不只2k还有可能呢,是引物特异性不好,从转入质粒上克隆出了你的目的片段,但从菌基因组或者质粒序列上扩出来一个非特异
我觉得用elution buffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大,实在不行多跑跑.然后看大小比较.酶切的话还是要看你的酶的活性.要是快切酶的话只要五分钟,要是慢的话要三四个小时.（我
在PCR的优化开始阶段,应用新的DNA模板,引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法,其扩增效果一般总不是最佳的.这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和（或）增加目的DNA产物的产率.表1列举了一些通常遇到的问题和对PCR反应进行优化的一些推荐方法.表1 PCR扩增的疑难解析问题 补救措施目的产物条带在两种24小时热门版块排行榜&&&&
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老师我想问下，我做了次质粒小题，浓度特别低怎么回事？摇菌时间...已有1人参与
老师我想问下，我做了次质粒小题，浓度特别低怎么回事？摇菌时间一般多久为宜~ @
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载体图谱上看酶切位点
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【答案】应助回帖
★ ★ 感谢参与，应助指数 +1西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流
你先确定你的质粒是不是低拷贝质粒，如果是的话，可能提出来就是比较低~摇菌的话不要超过12小时，菌体量够了应该没有问题
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老师知道质粒的载体信息并且测序完成，我要做酶切，我怎么知道和选择酶切位点呢？求指点 @
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请问我做pcr的时候有条带，但是胶回收的时候怎么没条带了啊
请问我做pcr的时候有条带，但是胶回收的时候怎么没条带了啊？
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你切胶的时候有条带么？如果有，就是回收过程中出问题了
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胶回收操作的问题
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回收没有的肯定是回收过程的问题了
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金黄色葡萄球菌在paird-parker平板上的菌落特征如何?为什么? 特征我已清楚,重要的是我想知道为什么.
黑色周围有浑浊晕圈的菌落黑色是因为金黄色葡萄球菌可以还原BP平板中的亚碲酸钾为单质碲,呈黑色.晕圈则是因为金黄色葡萄球菌含有卵磷脂酶,可以分解BP平板中添加的卵黄液所含有的卵磷脂而呈白色浑浊（该反应被称为乳光反应或卵黄反应）.
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与《金黄色葡萄球菌在paird-parker平板上的菌落特征如何?为什么? 特征我已清楚,重要的是我想知道为什么.》相关的作业问题
大体记得是呈比较小的菌落,金黄色光泽.
解题思路： 微生物培养解题过程： 答案是A A正确；因为多数细菌的最适pH为6.5～7.5 ，所以在培养基中加入醋酸，实验结果是没有菌落的生成，原因是ph过低不利于金黄色葡萄球菌的繁殖 B错误；在培养基中加入高浓度的食盐，实验结果是有菌落的生成，原因是金黄色葡萄球菌能在含高浓度的食盐的培养基上生长。 C错误；在培养基的
能,LB是光谱培养基,一般的细菌都能长,
气凝胶是什么,气溶胶吧.吸到肺里没事,主要问题不是条件治病什么的,嘿嘿,不知道吧,实验室里的菌种都是传代很多次了,大都没什么致病性,(我们曾把炭疽弄桌子上,老师拿来这个那个抹了半天,炭疽实在是厉害没办法)特别是金葡大肠这种常用的,你把那盘子吃了都没事.白喉杆菌这种细菌在我们这都改成类白喉了,想想吧,实验室的细菌是多么的
& 再答： （4）震荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长；另外震荡培养还可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。
首先你的问法很不准确,什么是“普通平板”?根本就没有这个概念.应该具体说明用的是哪一种培养基,适合沙门氏菌分离培养的培养基非常多,几十种,不同平板上沙门氏菌都可以表现出不同的形态特征.目前用得最多的成本比较低的平板是SS平板和XLD平板,一般的沙门氏菌在这两种平板上的特征都是圆形、表面光滑、湿润、较大、中心黑色、边缘透
白色,圆形,透明或半透明与其他菌种没有太大区别.营养琼脂平板上各种菌落长得都差不多.
菌落----实际上是涂布（称为接种）在平板（培养皿）上的、经充分稀释后的菌液中的"单个细菌",在适宜的条件下培养,不断繁殖形成的细菌群落（故名.大家庭中每个细菌当然都是活的）,一般具有特殊的形状和颜色,据此可以辅助判断细菌种类,在必要时为细菌的进一步分型提供线索或为药敏试验提供实验标本.另外,只要采样和细菌培养方法得当
纯培养的确定除观察其菌落特征外,还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定,有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到.
将单个菌落再次划线分离或稀释分离,如果形成的单个菌落形态单一,即为纯菌落.
再次挑一点画线看培养后是否只是一种菌,这种方法我们常用来纯化菌种
1.competent 细菌原液失活 （冻融次数太多）2.错误的抗生素3.转化效率极低
“单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒”,首先你的表达有误,单酶切可以切开,说明目的基因有连接上,那么重组载体该是比空载大的.质粒稀释100倍后PCR,有目的条带,也说明了是阳性克隆.有拖带,你可以把退火温度提高试试.后面上样9ul目的条带很浅,应该是你稀释倍数太高了.我一般是不稀释的,直接PCR,不过得看你提
我没做过这个.查了一下,如下.金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落,大而凸起,表面光滑,周围有溶血圈.金黄色葡萄球菌在P－P平板上呈黑色,周围有浑浊晕圈.黑色是因为金黄色葡萄球菌可以还原BP平板中的亚碲酸钾为单质碲,呈黑色. 晕圈则是因为金黄色葡萄球菌含有卵磷脂酶,可以分解BP平板中添加的卵黄液所含有的卵磷脂而呈白
致病性大肠杆菌：麦康凯-山梨醇琼脂培养基肉毒梭菌：庖肉培养基金黄色葡萄球菌：血琼脂、baird-parker琼脂（BP琼脂）这些是有国家标准的,按GB4789上的方法来做. 再问： 大肠杆菌、肉毒梭菌、金黄色葡萄球菌三种致病菌形成的菌落有何特征？ 再答： 大肠杆菌：发酵乳糖的菌落，粉红色或棕红色 肉毒梭菌：如果要有菌落
具体形态：本菌为革兰氏阳性球菌,排列是葡萄球状,无芽胞,无荚膜,致病性葡萄球菌菌体较小,直径约为0.1μm.在肉汤中呈混浊生长,在胰酪陈大豆肉汤内有时液体澄清,菌量多时呈混浊生长,血平板上菌落呈金黄色,也有时为白色,大而突起、圆形、不透明、表面光滑,周围有溶血圈,而Baird－Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、
阴性对照试验目的：1,如果试验中用到缓冲液、稀释液等,可以说明该些缓冲液稀释液是无菌的,不影响正常实验结果的.2,可以说明在整个试验操作过程中,步骤方法操作都得当整确,无微生物带入.因此,如果阴性对照平板上有菌落,可能有如下原因：1,缓冲液、稀释液被污染2,实验过程中操作不当,将阳性菌大肠埃希菌不慎带入阴性对照3,试验
你想问的问题在网络上随便查查都能查到.你作为一个生物医药专业的学生居然这点搜寻信息的能力都没有,我为你感到悲哀.
一般来说营养琼脂是用来计数的,这些菌种长在营养琼脂上的菌落形态应该是没有什么大的差别的,如果你想看菌落形态我觉得最好是在不同的选择性培养基上面,这样菌落形态才会有特点才会区分.}