实时荧光定量pcr仪检测报告是什么意思

荧光定量PCR检测报告我看不懂求解,上传报告单
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荧光定量PCR检测报告我看不懂求解,上传报告单
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专长:肿瘤相关疾病
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病情分析: 你好,根据你所提供的信息,建议补充完整问题,或向上个解答的医生继续提问,以免延误对您的回复。意见建议:建议补充完整问题,或向上个解答的医生继续提问,以免延误对您的回复
问荧光定量PCR检测报告
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专长:心脏病,妇科疾病
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指导意见:治疗上主要为抗炎,首先得弄nrh 清病因,其次才谈得上治疗。希望你去正规的医院做相关的检查,弄清楚后在进行系统正规的治疗。
问荧光定量pcr检测报告
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专长:妇科综合
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病情分析:你好,你的情况肝脏有损伤,病毒复制很高,传染性强,应该去专业的医院对症治疗。
意见建议:祝你健康
问PCR荧光定量检测报告
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专长:脑发育不全,高血压,糖尿病,心血管
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病情分析: 您好,尖锐湿疣治疗主要的是用这样的方式先去掉疣体的;复发不复发,主要靠我们自己的免疫力来防止意见建议:所以,一般的激光治疗打下去就可以了;当然,这个疾病复发的几率是比较大的,可以治疗后打干扰素,可能有一定效果的
问关于荧光定量PCR检测报告
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专长:慢性乙肝的治疗与保养
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你好。正常数值是在1000以内。欢迎继续提问
问乙肝一五阳,全自动荧光定量PCR检测报告求解
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专长:甲状腺、乳腺、肠道、血管、传染病等。
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病情分析: 1阳性说明你感染了乙肝病毒,2阴性说明没有产生抗体,5阳性,说明有病毒复制,建议查肝功看是否有肝损害,并查病毒DNA,查看病毒复制情况。
问荧光定量PCR检验报告单
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专长:艾滋病,性病,肝炎
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病情分析:这个值说明你的病毒滴度不高,病毒复制不活跃。
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摘要 : SYBR Green I 的优点:SYBR Green I 的优点是因为其缺点产生,由于它能所有的双链 DNA相结合,所以对不同模板不需特别定制不同的特异性探针,通用性较好,并且价格相对较低。这对科研是很有利的,因此国内外在科研中使用比较普遍。
:以参照物为标准,对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测,从而达到评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。
常见检测方法可分为以下几类:
(1) SYBR Green I 检测模式
SYBR Green I 是一种能与双链 DNA 结合发光的荧光染料。其与双链 DNA 结合后, 荧光大大增强。因此, SYBR Green I 的荧光信号强度与双链 DNA 的数量相关,可以根据荧光信号检测出 PCR 体系存在的双链 DNA 数量。SYBR Green I 的最大吸收波长约为 497nm,发射波长最大约为 520nm。PCR 扩增程序一般为 94℃~55℃~72℃三步法,40 个循环。SYBR Green I 的缺点:由于 SYBR Green I 没有特异性,不能识别特定的双链,只要是双链就会结合发光,对 PCR 反应中的非特异性扩增或也会产生荧光,通常本底较高,所以在临床上使用可能会有假阳性发生。
SYBR Green I 的优点:SYBR Green I 的优点是因为其缺点产生,由于它能所有的双链 相结合,所以对不同模板不需特别定制不同的特异性探针,通用性较好,并且价格相对较低。这对科研是很有利的,因此国内外在科研中使用比较普遍。
(2) 水解探针模式(man探针)
TaqMan 探针是一种探针,荧光基团连接在探针的 5&末端, 而淬灭剂则在 3&末端。当探针与靶序列配对时,荧光基团发射的荧光因与 3&端的淬灭剂接近而被淬灭。在进行延伸反应时,聚合酶的 5&外切酶活性将探针切断,使得荧光基团与淬灭剂分离,发射荧光。一分子的产物生成就伴随着一分子的荧光信号的产生。随着扩增循环数的增加,释放出来的荧光基团不断积累。因此 Taqman 探针检测的是积累荧光。PCR 扩增程序通常是:94℃~60 ℃ 40 个循环。常用的荧光基团是 FAM,TET,VIC,HEX。
(3) 探针模式(Beacon、FRET)
分子信标是一种呈发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,因此标记在一端的荧光基团与标记在另一端的淬灭基团紧紧靠近。荧光基团被激发后产生的光子被淬灭剂淬灭,由荧光基团产生的能量以红外而不是可见光形式释放出来。分子信标的茎环结构中,环一般为 15-30 个核苷酸长,并与目标序列互补;茎一般 5-7 个核苷酸长,并相互配对形成茎的结构。荧光基团标记在探针的一端,而淬灭剂则标记在另一端。在复性温度下,因为模板不存在时形成茎环结构,当加热变性会互补配对的茎环双链解开,如果有模板存在环序列将与模板配对。与模板配对后,分子信标将成链状而非发夹状,使得荧光基团与淬灭剂分开。当荧光基团被激发时,因淬灭作用被解除,发出激发光子。由于是酶切作用的存在,分子信标也是积累荧光。常用的荧光基团:FAM ,Texas Red 。PCR 扩增程序通常是:94~55~72 ℃三步法,40 个循环。
FRET 探针又称双杂交探针,FRET 探针由两条相邻探针组成,在一条探针的 5`端标记 FAM 荧光基团,另一探针的 3`端标记 Red 640 荧光基团。当复性时,探针结合在模板上,FAM 基团和 Red640 基团相邻,激发 FAM 产生的荧光,作为 Red640 基团的激发光被吸收,使 Red640发出波长为 640 的荧光。当变性时,探针游离,两基团距离远,不能产生 640 波长的荧光。由于 FRET 探针是靠近发光,所以检测信号是实时信号,非累积信号。常用的荧光基团是:LC-Red640,LC-Red705。
能用于实时荧光 PCR 定量的方法很多,各有优缺点,应根据实验的需要和当前的实验条件选择适合自己的方法。下面为各种方法的比较:
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&&荧光定量PCR中,结果内参基因的CT值有,但是目的基因的CT值没有,怎么办
荧光定量PCR中,结果内参基因的CT值有,但是目的基因的CT值没有,怎么办
请教各位,最近在做qRT-,内参选的是18s,结果发现,内参的CT值有,但是目的基因的CT值没有。程序的循环是34,内参的CT值到20几了,最高都达到30了,好像高了点,因为之前做的都只有十几左右,目的基因的CT值干脆就没了,是不是模板的浓度太低了,(ps:我的反转录产物是稀释过再用的),是不是通过增加模板量就可以,还是有没有其他有问题的地方呢,请各位指教一下,谢谢!
你好,谢谢指教。
我一共做了三个目的基因,就唯独其中一个没有,都是同一96孔板上的,有没有可能是那个目的基因还没检测到,反应就已经结束了,所以只有内参的CT值有。因此我想是不是那个基因的表达太低了还是模板浓度太低了。谢谢,
谢谢,我增加浓度试试
还有可能是引物设计不合理,我有一次做的也是目的基因压根就没有表达,可以考虑换引物试试。:hand:
你好,请问你是如何判断目的基因没有表达?和阴性对照对比吗?
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北京学而思教育科技有限公司 地址:北京市海淀区北三环甲18号中鼎大厦A座1层102室 电话:010-荧光定量PCR完全攻略&(转)
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nPCR100%PCRDNA2Y= X(1+E)n E E =
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Tn=Tn-11+En [0
EnTnnPCRTn-1n-1PCRT0PCR(K1010)CPcrossing point,K= T01+ECP
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SYBR Green I
SYBR Green
Green IPCRDNASYBR Green I 497nm520nmPCR94557240
SYBR Green
I SYBR Green
SYBR Green ISYBR Green IDNA
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1)genebankwww.ncbi.nlm.nih.gov
2)Primer5.0Oligo6.0beacon designs3.0www.
D2025bp,Tm5565GC40%60%100-250bp
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ATPATP-binding cassette
superfamilyMDR-1P-P-gpMRPLRPBCRPTopoGSH-S-GSTCPKCdeoxycytidine kinasebcl-2p53c-mycMDRreal-timePCRRT-PCRmRNA
Q-PCRPCRreal-time Q-PCRmRNARNARTPCRReal-time Q-PCR12real-time Q-PCRmultiplex3real-time Q-PCR
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