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摘要 : 膜蛋白具有多种功能，在细胞识别、细胞信号转导、运输等有着中着重要的角色，因此也是极佳的药物靶点。抽提膜蛋白主要是进行蛋白组分析：常用的实验是非变性胶电泳、酶活分析、SDS-PAGE、western blot等。本文叙述了总蛋白的抽提方法和膜蛋白的提取方法。
膜蛋白具有多种功能，在细胞识别、细胞信号转导、运输等有着中着重要的角色，因此也是极佳的药物靶点。抽提膜蛋白主要是进行蛋白组分析：常用的实验是非变性胶电泳、酶活分析、、western blot等。本文叙述了、和膜的提取方法。
一、从新鲜样品中(简易法)
1、自配裂解液(pH 8.5-9.0)：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用;用前加入100 &g/ml 溶菌酶，1&l/ml 的PMSF。该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。
2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。
缺点：结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol裂解液中分离
1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于，体积约为总体积的60%。
2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min， 2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。
5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g离心10min去除不溶物。
6、替代方案：将3中的酚醇上清液移至小分子量透析袋中，在2-8℃的1% SDS溶液中透析3次，1000g离心10min去除沉淀，上清可直接用于蛋白实验。
三、从新鲜样品中提取疏水性膜蛋白(Triton X-114去污剂法)
1、配制疏水性蛋白提取液(非裂解液)：1% Triton X-114，150mM NaCl, 10mM Tris-HCl，1mM EDTA，调pH值至8.0备用。
2、菌液于4℃条件下15000g离心15min收集菌体;用1ml 含有5mM MgCl2 的PBS洗涤3次，最后于4℃条件下15000g离心15min收集菌体。
3、菌体沉淀加入1ml冷提取液，于4℃条件下放置2h，17000g离心10min，去除沉淀取上清。
4、将上述上清中的Triton X-114含量增加到2%，再加入20mM的CaCl2抑制部分蛋白酶活性，37℃条件下放置10min使其分层。室温下1000g离心10min使液相和去污相充分分层。
5、将液相和去污相分开，分别用10倍体积的冷丙酮在冰上沉淀45min。
6、于4℃条件下17000g离心30min，用去离子水洗涤沉淀3次。
7、将沉淀溶解在1% SDS溶液中，测定蛋白浓度，比较液相和去污相中蛋白提取效率，一般是去污相中疏水性膜蛋白较多，适于进一步蛋白实验。
8、SDS-PAGE进一步分析液相和去污相的蛋白图谱。
注意事项：膜蛋白的含量比较少，需要收集比较多的细胞，最好是用试剂盒提取膜蛋白如：南京凯基的是试剂盒、Thermo膜蛋白提取试剂盒、碧云天膜蛋白提取试剂盒。
作者：青岚 点击：次
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蛋白质提纯的基本原理是什么?
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蛋白质提取与制备蛋白质种类很多,性质上的差异很大,既或是同类蛋白质,因选用材料不同,使用方法差别也很大,且又处于不同的体系中,因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离.但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的,大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中,少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中.因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶.蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异,主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例,其次取决于这些基团的排列和偶极矩.故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因.温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件.提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用.将细胞内蛋白质提取出来.并与其它不需要的物质分开.但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化硫等）中,可以不必经过提取直接进行分离.蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质,只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物,如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质,最后剩下的就是不溶性蛋白质.这些蛋白质经细胞破碎后,用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂,将蛋白质溶解出来,再用离心法除去不溶物,即得粗提取液.水适用于白蛋白类蛋白质的抽提.如果抽提物的pH用适当缓冲液控制时,共稳定性及溶解度均能增加.如球蛋白类能溶于稀盐溶液中,脂蛋白可用稀的去垢剂溶液如十二烷基硫酸钠、洋地黄皂苷（Digitonin）溶液或有机溶剂来抽提.其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱溶液抽提.
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