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辣根过氧化物酶标记
辣根过氧化物酶标记 抗体技术及应用进展 王伟航实验原理（1）免疫标记技术 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏 感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这 些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗 体的性质与含量。常用的标记物包括荧光素、酶和放 射性核素等，用这3种标记物进行标记的免疫检测技术 被称为3大免疫标记技术。目前，使用的免疫标记物还 有化学发光物质、铁蛋白和胶体金等。2（2）辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体的原理 a. 辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP ） HRP广泛分布于植物界，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结 合而成的糖蛋白，糖含量18％。HRP由多个同功酶组成，分子量为 40,000,等电点为pH3～9，酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差 异，但多在pH5左右。酶溶于水和58％以下的硫酸铵溶液。HRP的辅 基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以 OD403nm ／OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯 度。 HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。供氢 体多为无色的还原型染料，通过反应可生成有色的氧化型染料(D)。 HRP DH2＋H2O2────→D＋2H2Ob. 辣根过氧化物酶标记方法 酶标记抗体的制备方法主要有两种，即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化 法。 辣根过氧化物酶的标记常用过碘酸盐氧化法，这种方法法只适用于含 糖量较高的酶。过碘酸钠将HRP分子表面的多糖氧化为醛基，醛基与抗 体分子上的氨基形成Schiff碱而结合。后者可进一步用NaBH４(或乙醇胺) 还原生成稳定的酶标记抗体。4在酶标过程中一般都混有未结合的酶和抗体。游离酶理论上不影响最 终的显色。但游离的抗体则不同，它会与酶标抗体竞争固相抗原，从而 减少了结合到固相上的酶标抗体的量。因此需要对制备的酶结合物进行 纯化，去除游离的酶和抗体。纯化的方法很多，硫酸铵盐析法最为简便， 但效果并不理想。用离子交换层析、分子筛法可得到最佳的分离效果， 但费用较贵。5四操作步骤4℃静置30（1）称取5mgHRP溶解于0.5ml蒸馏水中。（2）向溶液中加入0.5ml新配的0.1M NaIO４溶液，混匀， 分钟。（3）加入0.16M乙二醇水溶液0.5ml，混匀， 静置30分钟。（4）加入含 5mg抗体的水溶液1ml，混匀装入透析袋，pH9.5 碳酸盐缓冲液透析， 4℃过夜。6（5）加0.2 mL 新配的5 mg/mL NaBH４液，混匀，再置4 ℃, 2h。 （6）在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4 ℃ 1h。 （7）3000 r/min 离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗 二次，最后沉淀物溶于少量0.15moL/L pH7.4 的PBS中。 （8） 将上述溶液装入透析袋中，对0.15 moL/L pH7.4的PB缓冲 盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10,000 r/min 离心30 min 去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。7酶制剂及其底物◆凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均 可作为标记用。但作为标记抗体用的 ◆酶应满足下列要求：(1)来源方便，易于纯化；(2) 比活性高，性质稳定；(3)酶活性和量能 ◆用简单方法测定。目前在免疫酶技术中常用的酶 为辣根过氧化物酶(HRP)和硷性磷酸酶 ◆(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、 溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。8? ? ? ? ? ? ? ?由亍辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)比活性高，稳定，分子量小，纯 酶容 易制备，所以最常用。HRP广泛分布亍植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白 和棕 色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18％。HRP由多个同功酶组成，分子量为 40,000,等 电点为PH3～9,酶催化的最适PH因供氢体丌同而稍有差异，但多在PH5左右。酶溶亍 水和 58％以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和 275nm，一 般以OD403nm ／OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。高纯度的 酶RZ值应 在3.0左右(最高可达3.4)。RZ值越小，非酶蛋白就越多。值得注意的是，纯度并丌表 示酶活 性，如当酶变性后，RZ值仍可丌变。9◆ HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。供氢体多为无色的还原型 ◆ 染料，通过反应可生成有色的氧化型染料(D)。酶促反应的过程如下: ◆ HRP ◆ DH2＋H2O2────→D＋2H2O ◆ 供氢体的种类很多，形成的产物特点不一。如DAB(3.3－二氨基联苯胺)的反应产物 为 ◆ 不溶性沉淀物，并有电子密度，故适宜于做免疫酶染色或电镜观察。5AS(5-氨基水杨酸) 早 ◆ 期曾用于ELISA，但其溶解度不够大，且空白孔不易控制到无色，现已很少应用。OT(邻 联 ◆ 甲苯胺)的特点是能产生鲜艳的蓝绿色产物且灵敏度较高，但反应中受温度影响较大， 而且 ◆ 由于产物不稳定，需要在短时间内进行测定。目前用得较广泛和较满意的供氢体是： OPD ◆ (邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺)。前者形成的产物为深桔黄色或棕色，后者产物为蓝 绿 ◆ 色，二者的可溶性均好，在避光处颜色稳定，空白可近于无色，灵敏度上据报道后者比 前 ◆ 者可高4倍以上。10? 另外，还有一种供氢体称ABTS[2, 2'-边氮基-双(3乙基苯并噻吡咯啉-6磺 ? 酸)]，其反应产物呈蓝绿色，且灵敏度和稳定性均 好。尤其是在致癌的潜在可能性方面， ? ABTS不TMB皆是值得被优选的供氢体。 ? 由亍HRP的底物H2O2本身又是酶的抑制剂， 因此酶促反应中使用的H2O2丌能过量。应 ? 控制在经较短时间反应后呈色即达高峰（说明H２ O２已消耗殆尽）。这样即使再延长时间 ? 也丌会增加反应产物的颜色。11HRP标记抗体的方法◆酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结 构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结 ◆合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。 尤以简易过碘酸钠法更为常用。12戊二醛二步法? 1. 原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛 基分别不酶和免疫球蛋白上的氨基共 ? 价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。132.标记步骤：◆(1) 称取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，于 室温静置过夜。 ◆ (2) 反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析 柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml／1分 ◆钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG 浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅 ◆拌。 ◆ (3) 将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释 至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。 ◆ (4) 用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml，继续搅 拌3?小时。14? (5) 加0.2M赖氨酸0.25ml，混匀后，置室温2小 时。 ? (6) 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵， 置4℃1小时。 ? (7) 3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半 饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶亍 ? 少量0.15M PH7.4的PBS中。 ? (8) 将上述溶液装入透析袋中，对0.15M PH7.4的PB缓冲盐水透析，去除铵离子后(用 ? 萘氏试剂检测)，10,000rpm离心30分钟去除沉淀， 上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保 ? 存。153.结果判定：◆(1) 定性及效价滴定：用特异性抗原(或 抗体)同酶标记抗体(或抗免疫球蛋白抗体) 作 ◆双向琼脂扩散试验或免疫电泳试验。然后 用酶的底物使沉淀弧显色，可初步鉴定其 活性。 ◆最后以直接ELISA法(或在正式实验系统里) 对酶结合物进行滴定( 见本节 (三)工作浓 度的选 ◆择)。16(2)?? ? ?定量和克分子比值测定：??(2) 定量和克分子比值测定：可用分光光度计测定 (光程1cm)。 酶量(mg／ml)＝OD403nm×0.4 IgG量(mg／ml)＝OD280nmOD403nm×0.42)×0.94×0.62 酶量(mg／ml) IgG量(mg／ml) 酶量 克分子比值＝──────── ÷ ─────── ＝ ─── × 4 40,000 160,000 IgG量17注意事项（1）为提高标记效率，应严格掌握整个反应体系中 9的抗体含量。 （2）碘酸钠要新鲜配制。 （3.） 室温搅拌时须避光，室内温度一般在25℃ 为宜。标记物每次透析前，须认真检查，防止漏 液18注意事项? （4） 在具备高质量HRP的条件下，所要标记的抗体也 要活性高,效价高(最低1∶16),纯度高，亲和力好，这是保 证标记物效价高，免疫活性好的首要条件。 ? （5）所使用试剂的PH和浓度及用量必须严格掌握。所用 试剂，最好(或必需)新鲜配制。如在戊二醛标记法中所用 戊二醛应为新鲜纯品，因戊二醛储存过久可形成缩和体 (杂质)。否则，影响标记效果。 ? （6）浓的标记物相当稳定，常加入30～40％甘油亍-10℃ 下保存。4℃可保存1～2年，但稀释成1∶10，只能保存 数周。已配制的使用液应在12小时内用完。切忌反复冻融。19谢谢观看王伟航 学号： 20
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elisa试剂盒的制备三大流程
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&&& elisa试剂盒的制备三大流程&&& elisa试剂盒的制备流程一:&&& 酶标抗体（酶标抗体制备技术基本要求是将酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合既不改变抗体的免疫反应活性，也不影响酶的生物化学活性。用于标记抗体的酶较多，常用的有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化物酶和β-半乳糖苷酶等。）或抗抗体（抗免疫球蛋白）结合物可采用戊二醛法或过碘酸盐氧化法制备。郭春祥建立的辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。古朵生物王经理现将操作方法介绍如下：&&& （一）结合物的标记将5mgHRP溶于05ml蒸馏水中，加入新配制的006mol/LNaIO4水溶液05ml，混匀，置冰箱30min，取出加入016mol/L乙醇水溶液05ml，室温放置30min后，加入含5mg纯化抗体的水溶液（或PBS）1ml，混匀并装透析袋，以005mol/L、pH值95碳酸盐缓冲液缓慢搅拌透析6h使之结合，然后吸出加NaBH4溶液（5mg/ml）02ml，置冰箱2h。&&& （二）将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵，冰箱放置30min，离心，将所得沉淀物溶于少许002mol/L、pH值74PBS中，并对之透析。次日再离心除去不溶物，即得酶抗体结合物。用002mol/L、pH值74PBS加至5ml，进行测定后，冷冻干燥或低温保存。&&& （三）结合物稀释度的测定&&& ELISA试剂盒用酶结合物中抗体相应的抗原直接包被聚苯乙烯反应板，采用ELISA直接法测定酶结合物效价。通常本法制备的酶结合物作1∶10000稀释时，其OD403仍在01以上。&&& elisa试剂盒的制备流程二：&&& ELISA试剂盒结合物中辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase,HRP）与抗体量的测定酶标结合物于751型分光光度计上分别用280及403nm波长测定其光密度（OD），并计算出OD403与OD280之比值以及HRP与抗体的mol/L比。&&& 结合物中HRP浓度（mg/ml）=OD403×04&&& 结合物中IgG浓度（mg/ml）=（OD280-OD403×03）×062&&& 酶/抗体mol/L比=HRP浓度IgG浓度×4&&& ELISA试剂盒因此，免疫酶技术是一项定位、定性和定量（敏感度可达每毫升ng~pg水平）的综合技术。常用的酶是辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase,HRP）和碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,AKP）。
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& HRP标记抗体-简易过碘酸钠法
HRP标记抗体-简易过碘酸钠法
经典的过碘酸钠法中需采用二硝基氟苯封闭HRP上残留的&-和&氨基基以避免酶分子之间的交联。后来Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP，从而省去了二硝基氟苯封闭HRP步骤。HRP经NaIO4氧化后形成的醛化酶可与抗体分子的氨基相连，形成斯夫氏硷，后者可进一步用NaBH4(或乙醇胺)还原生成稳定的酶标记抗体。
1. 0.1M NaIO4：称取241mg高碘酸钠(广州化学试剂厂，批号830602)溶于蒸馏水10ml中。
2. 1mM PH4.4醋酸钠缓冲液：0.2M NaAc (1.361克/50ml) 3.7ml；0.2M HAc (0.601ml/50ml) 6.3ml；加蒸馏水至2,000ml。
3. 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液：Na2CO3 0.32g；NaHCO3 0.586g；加蒸馏水至50ml，再用蒸馏水作20倍稀释，即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。
4. NaBH4溶液(4mg/ml)：临用时称取NaBH4 4mg溶于1ml蒸馏水中。
5. 其它的试剂及器材可参见戊二醛标记法。
1. 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。
2. 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。
3. 将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。
4. 加20&l 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0-9.5，然后立即加入10mg IgG(抗体，或SPA 5mg)在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。
5. 加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混匀，再置4℃ 2小时。
6. 将上述液装入透析袋中，对0.15M PH7.4 PBS透析，4℃过夜。
7. 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃ 1小时。
8. 3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。
9. 将上述溶液装入透析袋中，对0.15M PH7.4的PBS缓冲盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10,000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。
10. 结果判定
除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。
IgG量(mg/ml)＝(OD280nm-OD403nm&0.3)&0.62
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【2017年整理】抗体HRP标记方法
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百科词条： （最后修订于 14:21:53）[共891字]摘要：国标编号51517CAS号中文名称碘酸钠英文名称sodiumiodate分子式NaIO3外观与性状白色棱形结晶或结晶性粉末分子量197.92熔点分解溶解性溶于水、丙酮，不溶于乙醇密度相对密度（水=1）4.28稳定性稳定危险标记11（氧化剂）主要用途用作分析试剂、药物、消毒剂、饲料添加剂健康危害侵入途径：吸入、食入、经皮吸收。健康危害：对眼睛、上呼吸道、粘膜和皮肤有刺激性。毒理学资料及环境行为急性毒性：LD50119mg/kg（小鼠腑腔内）危险特性：无机氧化剂。能与铝、砷、铜、碳、金属硫化物、有机物、磷、硒、硫剧烈反应。具有腐蚀性。燃烧（分解）产物：碘化氢。实验室监测方法2,2'-二喹喔啉基在分光光度测定锑（V）和氯酸盐、溴酸盐和碘酸盐中的应用[刊,波兰]/BaranowskaI.//Chem.Anal.（Warsaw）.-）.-245～253《分析化学文摘》1989.3.泄漏应急处理隔离泄漏污染区，限制出入。建议应急处理人员戴自吸过滤式防尘口罩，穿一般作业工作服。不要直接接触泄漏物。勿使泄漏物与还原剂、有机物、易燃物或金属粉末接触。小量泄漏：避免扬尘......&&&
相关文献：　鉴别：（1）取本品约50mg，加高碘酸钠试液2ml，钼酸铵试液数滴与硝酸数滴后，加热即发生黄色沉淀，分离，沉淀能在氨试液中溶解。（2）取本品约20mg，加高碘酸钠试液2ml，盐酸溶液（1→10）0.5ml，加热至有甲醛臭味，放冷，滴加亚硫酸钠液（1→10）至碘色出现到碘色褪去，然后加入品红亚硫酸试液数滴，1-2分钟后即显紫红色。（3）取含有本品的醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）1滴，滴在对二甲）。这样即使再延长时间也不会增加反应产物的颜色。　　　　(二)　HRP标记抗体的方法　　　　酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。　　　　戊二醛二步法　　　　1.　原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。　　　　2.　标记酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析中关键试剂的研究(pdf)【摘要】目的研制成镧系元素发光时间分辨荧光分析中的关键试剂。方法用过碘酸钠法研制成辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，用戊二醛二步法研制成碱性磷酸酶标记链霉亲和素和用化学合成法研制成5-氟水杨酸磷酸酯等关键试剂。结果HRP标记SA总蛋白回收率为29.8%，纯度为97%。ALP标记SA的总蛋白回收率为56%，纯度为98%，分子量为159kD，其FOMYCINITROMETAMOLI　　主要活性成分：含磷霉素氨丁三醇按磷霉素（C3H7O4P）计算，　　性状：白色粉末；味甜。　　鉴别：（1）取本品适量（约相当于磷霉素氨丁三醇50mg），加高碘酸钠试液2ml，钼酸铵试液数滴与硝酸数滴后，加热即发生黄色沉淀，分离，沉淀能在氨试液中溶解。（2）取本品适量（约相当于磷霉素氨丁三醇20mg），加高碘酸钠试液2ml，盐酸液（1→10）0.5ml，加热的结合剂应具备下列条件：（1）不影响酶及抗体活性，（2）不产生干扰物质，（3）抗体和酶结合后应有较高的产量，（4）不出现非特异性反应,(5)结合程序简便，（6）来源易、价廉。目前常用的有戊二醛和过碘酸钠二种。由于对所使用结合剂的针对性，因此标记的方法也有戊二醛交联法和过碘酸钠氧化法两类。1、戊二醛交联法：戊二醛是一种能使蛋白质与蛋白质联结最常用的双功能试剂。它有2个对称的活性醛基，可分别与酶蛋白用硫酸稀释至刻度，即得，临用配制）5ml，振摇混匀，置水浴中加热，应显蓝绿色。（2）取本品约10mg，滴加水少许研磨，再加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，置匀浆器中制成匀浆液，取10ml，加高碘酸钠溶液[取高碘酸钠（NaIO4）4.28g，加0.005mol/L硫酸溶液。溶解并稀释至1000ml]1ml，摇匀，立即取反应液4ml，以水为空白对照，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录ⅣA加硫酸100ml溶解，摇匀，临用配制）5ml，振摇混匀，置水浴中加热，应显蓝绿色。（2）取10mg，先滴加水少许研磨，再加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，置匀浆器中制成匀浆液，取10ml，加高碘酸钠溶液[取高碘酸钠（NalO4？？）4.28g，加硫酸液（0.005mol/L）溶解并稀释至1000ml］1ml，摇匀，立即取反应液4ml，以水为空白对照，照分光光度法（中国药典1990年版二部附录：①偶联剂与抗体和酶之间的连结，必须是不可逆的，即借共价键连结；②偶联剂不应影响酶和抗体的活性；③不能因偶联剂的加入，使酶与组织成分了生非特异结合。　　在HRP标记抗体中，常用的偶联剂有戊二醛、过碘酸钠及Maleimide等，现简介如下。　　1．戊二醛标记法　　戊二醛为制备各种酶标抗体最常用的偶联剂。市售戊二醛往往含有戊二酸、丙烯释及戊二醛自身聚合本等杂质，故需纯化后使用。戊二醛的纯度用含杂质的利于接下来的免疫组化检测，及各种分子生物学检测，为临床病理诊断及各种课题研究打下良好基础。1材料与方法1.1苏木精配置1.1.1材料苏木精2g，无水乙醇250ml，硫酸铝10g，蒸馏水750ml，碘酸钠0.5g，柠檬酸1g。1.1.2方法将苏木精溶于无水乙醇，将硫酸铝溶于水，两液混合置于电炉上加热至沸腾2min，加入碘酸钠及柠檬酸溶解。从电炉上移开，室温放置，即配即用，不用过滤。1.2伊红的配置odriguesM,RamosMG,VieiraMR.放射免疫分析与相关技术进展.北京：原子能出版社，6　　3　郭春祥.介绍一种简单，快速，高效的辣根过氧化物酶标记抗体的过碘酸钠法.上海免疫学杂志，）：97　　4　CruickshankDJ.CA125-responseassessmentinepithelialovariancancer.IntJCance：取1.0g，依法检查（中国药典1990年版二部附录48页），与标准硫酸钾溶液3.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.030%）。高碘酸盐的消耗值：取约15g，精密称定，加水25ml溶解后，加高碘酸钠溶液（取高碘酸钠5.4g，溶于100ml水中，加冰醋酸1900ml混匀）50ml，放置1小时，加碘化钾试液20ml，用硫代硫酸钠液（0.1mol/L）而定至姜黄色，加淀粉指示液3ml，继续而定至蓝组织抗原。固定时间为6～18h。　　5．PLP液　　PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液（Periodate-Lysine-paraform-alde－hydefixative）　　试剂：过碘酸钠　　赖氨酸盐酸盐（或盐酸赖氨酸）：　　多聚甲醛　　蒸馏水　　配制方法：　　（1）贮存液A（0.1mol/L赖氨酸-0.5mol/lNa3PO4,pH7.4）：称取赖氨酸盐酸盐1.827g溶于50m单抗的需要，我们制备了一株产生BrdU单抗的杂交瘤细胞株。本文对此细胞株制备过程及单抗鉴定情况作了简单叙述。　　由于BrdU是半抗原，需制备完全抗原BU-OVA进行免疫，BU-OVA的制备方法是过碘酸钠氧化法。BrdU单抗制备过程的关键是排除与胸腺嘧啶核苷(TdR)发生非特异交叉的抗体产生细胞，所以，还增加两种用于筛选的抗原即BU-BSA和MU-BSA，其制备方法同BU-OVA。　　融合用的细胞胃粘蛋白预处理过的滴定板，通过ELISA方法可以检测到这两种抗体。利用分型试剂盒，HGM72和HGM75的亚型分别被确定为IgM,κ和IgG,κ。胰蛋白酶消化处理抗原，不影响每个抗体的反应性，而过碘酸钠的处理却完全破坏了它们之间的结合力(表1)，表明抗体针对的抗原决定簇为粘蛋白的糖链部分［3］。表1　胃粘液处理后单克隆抗体的反应活性　　Tab.1　Reactivityofmonoclonalan油，然后加硫酸铝钾(约10g)至饱和，搅拌均匀，倒入瓶中。将瓶口用1层纱布包着小块棉花塞上，放在暗处通风的地方，并经常摇动促进“成熟”，直到液体颜色变为深红色为止。成熟时间约2-4周。若加0.4g碘酸钠可加快成熟。二、吉姆萨(Giemsa)氏母液将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66mL)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。然后再加入甲醇(的葱、海里的鱼，都有微量的碘。海水中碘含量约为十万分之一，不过，海里倒有许多天然的“碘工厂”--海藻。它们从海水中吸收碘。据测定，在海藻灰中约含有1％的碘。世界上也有一些比较集中的碘矿，含有较多的碘酸钠和过碘酸钠。在智利硝石中，也含有一些碘化物。碘能微溶于水，但更易溶解于一些有机溶剂。碘溶液的颜色有紫色、红色、褐色、深褐色，颜色越深，表明碘溶解得越多。碘酒，便是碘的酒精溶液，它的颜色那么深，便是2min，抽搐间歇期吸氧浓度为35%～60%时作动脉血气分析，见表1。　　表1毒鼠强中毒8例的脉血气分析（略）　　注:AB指实际碳酸氢盐　　1.3治疗结果接诊后清水洗胃、导泻，并均予肌注二硫基丙碘酸钠（Na-DMPS），首剂0.125～0.25g，总用量0.75～7.65g，平均用量3.01g;并加用安定（10～50）mg/h静滴，甘露醇、速尿、地塞米松、白蛋白防治脑水肿等综合治疗。8例中死亡6例腔内，2～3周后再注入4×105杂交瘤细胞，10天后收集腹水。采用辛酸-硫酸铵二步法进行纯化［2］。　　2.4TgMcAbELISA双抗体夹心法的建立　　2.4.1TgMcAb酶标记及纯化　采用过碘酸钠法进行标记［3］。将辣根过氧化物酶标记TgMcAb,用辛酸-硫酸铵二步法进行纯化，结果表示，酶与IgG克分子比为2.19:1，ELISA检测酶联物1：25万稀释，测定OD值为2.39。纯化后的酶联原）的方法，此类方法中目前最常用的是戊二醛交联法，形成的结合物为：酶-戊二醛-抗体（抗原）（二）直接法直接法是用一活化剂首先将酶活化，被活化的酶分子上的基团直接可与抗体（抗原）结合形成标记物，如过碘酸钠法。形成的结合物为：酶-抗体（抗原）。三、酶免疫技术类型酶免疫技术按照抗原抗体系统是定位于组织细胞上还是存在于液体样品中分为酶免疫组化技术和酶免疫测定（EIA），酶免疫测定又可分为均相酶免疫测定和分解产生相同MMPB（赤-2-甲基-3-甲氧基-4-苯基酪酸，2-methyl-3-methoxy-4-phenylbutyricacid）基团，故日本学者研究了测定总MCYST的方法，其原理是用碘酸钠和高锰酸钾对MCYST进行氧化，产生共有的MMPB，再用气相色谱-质谱联用对MMPB进行定量测定，从中间接获得总MCYST的浓度，但无法对各种不同类型MCYST进行分别定量。　　液相色谱-质谱联用roteinAaffinitychromatography100％＜5minAsmall-mediumSimple　　2.5　纯化抗体的初步应用　兔抗DH5α酶标抗体的应用：采用文献［3］的改良过碘酸钠氧化法，对上面纯化的兔抗DH5α抗体标记辣根过氧化物酶。4mgHRP与6mg兔抗DH5α结合，得2ml，共4．194mg的HRP-IgG。当包被兔抗DH52IgG浓度为4μg／ml、DH52菌体蛋＞0.6者。同时，胃镜或胃粘膜病理证实有炎症或溃疡。尿素酶试验阳性。③阴性血清：选10岁以下正常儿童血清。1:100稀释后经ELISA测定后A490＜0.3者。④酶标羊抗人IgG的制备：按改良的过碘酸钠法，由本室制备。⑤酶标猪抗兔IgG：丹麦Daco公司产品，由上海市卫生防疫站生化免疫室惠赠。⑥硝酸纤维素（NC）纸：西德SS公司产品，由上海市卫生防疫站生化免疫室惠赠。⑦免疫印渍：按Towbin等l，加水至100ml，作对照溶液。精密量取供试品溶液、对照溶液及水各2.0ml，分别置于带塞离心沉淀管T、S及B内，各加入稀氢氧化钠试液1.0ml，并精确加入吸收光谱用n－已烷25ml，再加入偏高碘酸钠溶液4.0ml，强烈振摇混合10分钟后，离心分离。除去所分离的下层水液，再加稀氢氧化钠试液5ml，以同样操作洗n－已烷液，分液将n－已烷液作供试品溶液、比较液及空白试验液。以空白试验液作对照，测定)参照文献改良制备出PAF免疫原，皮下和足底加淋巴结注射免疫新西兰白兔，免疫5次。用饱和硫酸胺沉淀法与DEAE-23层析柱法提取免疫血清中的PAF抗体［2，3］，聚乙二醇浓缩后分装冻存。(2)用过碘酸钠氧化结合法制备HRP标记的PAF抗体，SephadeXG100过滤纯化，测酶标PAF抗体A280nm和A403nm值。(3)双向琼脂扩散试验和ELISA法测PAF抗体效价及鉴定其特异性，并鉴定酶标2：71）为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计应不低于4000。供试品溶液的制备：精密量取本品3ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。叶良君等经环己烷提取，高碘酸钠氧化后，用紫外分光光度法测定了小青龙合剂中盐酸麻黄碱的含量，测定波长为242nm。张素梅等文以四苯硼酸根与麻黄碱的离子缔合物为电活性物制备聚氯乙烯(PVC)膜离子选择电极，测定小青龙合剂中麻黄碱的P）。　　[附]酶标记物制备：应用抗原或抗体与酶分子的交联技术，交联物亦称酶结合物（conjugate）。根据酶与抗体（抗原）的激活顺序，交联反应可分一步法、二步法及三步法不等。其中以二步法中的过碘酸钠法多用，戊二醛一步法反应率较低，较适用于交联AKP。免疫球蛋白标记辣根过氧化物酶（过碘酸钠法）与免疫球蛋白标记碱性磷酸脂酶（戊二醛一步法），按常规方法制备。　　抗IgG型抗体酶结合物也可用金黄色葡【摘要】目的碘酸钾碘盐在存放和使用中碘的损失探讨。方法从随机抽样的80份经检测的碘盐选择碘含量高、中、低不同的具有代表性样品15份，模拟碘盐使用中的温度100℃和300℃，用直接容量滴定法测定使用中的碘盐在同一温度不同时间和同一时间不同温度条件下碘的含量。结果碘盐在同一时间不同温度（40℃～300℃）条件下每升高10℃碘损失11.99%，其中40℃～100℃之间每升高10℃碘损失4.06%，100语拼音：DiansuanjiaKoufurongye　　标准号：WS-165(X-149)-99(2)　　拉丁文或英文：PotassiumIodateOralSolution　　主要活性成分：本品含碘酸钾（KIO3）　　性状：?本品为无色的澄清液体，味微酸甜。　　鉴别：?（1）取本品50ml，置水浴上蒸发至干，加稀硝酸1ml使溶解，加硝酸银试液数滴，溶液变混浊。(2)将上述（1）所得溶液分成两份，正式名：碘酸钾颗粒　　汉语拼音：DianSuanJiaKeli　　标准号：WS-106（X-088）-95　　拉丁文或英文：GRANULAEKALHIODAS　　主要活性成分：含碘酸钾（K1O3）应为标示量的90.0～110.0%。　　性状：白色颗粒。　　鉴别：（1）取本品10包的内容物，研细，加水5ml振摇后，滤过，滤液加硝酸银试液10滴，即生成白色凝乳状沉淀，沉淀溶于氨试液，不溶于稀硝酸。（2正式名：碘酸钾片　　汉语拼音：DianSuanJiaPian　　标准号：WS-105（X-087）-95（2）　　拉丁文或英文：TABELLAEKALIIIODAS　　主要活性成分：碘酸钾（KlO3）应为标示量的90.0～110.0%。　　性状：白色片。　　鉴别：（1）取本品10片，研细，加水5mL振摇后，滤过，滤液加硝酸银试液10滴，即生成白色凝乳状沉淀，沉淀溶于氨试液，不溶于稀硝酸。（2）取本【摘要】目的探讨盐酸布比卡因+甲磺酸罗哌卡因混合蛛网膜下腔硬膜外联合麻醉，应用于妊娠高血压综合征剖宫产的安全性和临床效果。方法行妊娠高血压综合征剖宫产术的孕妇30例，以0.75%布比卡因与1.19%罗哌卡因2：1原液1.25~1.3ml缓慢注入蛛网膜下腔。结果麻醉效果好，血压改变慢而且幅度小，影响循环较小。结论盐酸布比卡因+甲磺酸罗哌卡因混合蛛网膜下腔硬膜外联合麻醉应用于妊娠高血压综合征剖宫产中，药品名称碘酸钾拼音名Diansuanjia英文名POTASSIUMIODATE来源(分子式)与标准本品按干燥品计算，含KIO3不得少于99.0％。性状　　本品为无色或白色结晶或粉末，无臭，味微涩。　　本品在水中溶解，在乙醇中几乎不溶。检查　　酸碱度　　取本品3.0g，加水40ml溶解后，加酚酞指示液3滴，应无色，再加氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)0.2ml，应显粉红色。　　氯酸盐　　取本品性Wistar大鼠随机分为8组，每组10只。分别给予含不同剂量的KIO3去离子饮水，各组均饲以正常大鼠粉状饲料喂养3个月后心脏采血处死大鼠，分离血清测定甲状腺激素（TT3、TT4和rT3）水平。结果碘酸钾使脾体比升高,6000μg/L组血白细胞与对照组相比明显升高，最高剂量组rT3水平降低，与对照组相比，差异具有显著性意义（P<0.05）。随着剂量升高,血胆固醇明显升高、总蛋白明显下降（P<0.019%硫酸钠，45℃水浴中充分搅拌溶解，再离心，用适量蒸馏水溶解沉淀置透析袋中4℃透析过夜，收集分装后置-20℃保存备用；复苏本实验室保留的NP28?5B阳性杂交瘤细胞株，传代培养后收集培养细胞上清，用50%饱和硫酸铵沉淀后，溶解于0.01M，pH7.4的PBS,充分透析后放置-70℃冰箱备用。经免疫双扩散鉴定，NP28?5B的同型为IgG1，其靶抗原分子量为140kD。采用简易过碘酸钠法，将辣根泻，若中毒超过8小时，用温水高位灌肠适于无腹泻者；⑸如红色捕蝇蕈、斑毒蕈等中毒进，可皮下注射阿托品；⑹抗蕈毒血清40ml肌注；（先作皮试），对阿托品无效者可试用；⑺如瓢蕈、白毒伞蕈中毒，可用二基丙碘酸钠或二基丁二酸钠（见726页）解毒，但不宜用二基丙醇；⑻可试用L半胱氨酸盐酸盐；⑼抗休克治疗，纠正电解质紊乱，失水及酸中毒中毒；⑽出现脑水肿高血压时可用脱水剂；⑾有溶血现象，除给肾上腺皮质激素外并口.线性评价和干扰试验中NCCLS价方案的应用.临床检验杂志，）:184-186.3黄维嘉，阳萍，陈宏础.双试剂自动分析法测定血清胆红素.临床检验杂志，）:30-31.4邱谷.高碘酸钠氧化法测定血清总胆红素.临床检验杂志，）:345-346.作者单位:512300广东省韶关市仁化县人民医院检验科（收稿日期:）（编辑作者：余勤\r双凤展翅图\pn-n29a.bmp\r专治肺经受寒。医用两手中、食二指，捻儿两耳尖，向上三提毕。次掐承浆，又次掐两颊，以及听会、太阴、太阳、眉心、人中诸穴。《厘正按摩要术》清张振鉴，被报道在哮喘患者的气道上皮中的表达增加。近期国外的一项研究主要是关注于氯化物通道抑制剂在治疗IL-13诱导的哮喘中的作用。他们选用的特异性的氯化物通道抑制剂(CLCA)是niflumicacid(NA),主要观察在气道内注入IL-13后，使用了NA后对杯状细胞的增生、嗜酸细胞的积聚及气道高反应性的作用。结果显示，NA不仅抑制了IL-13诱导的杯状细胞的增生，而且抑制了气道的高反应及嗜酸细胞的浸润nt]医学空间（）8月22日消息，虽然药物性和老年性听力减退影响到数百万人，已成为最常见的耳科疾病，但是发病机制仍然不明。美国加利福尼亚戴维斯医学院的研究人员最新的实验发现，Na,K-ATP酶和NKCC1同时突变能起到对听力的保护作用。蜗内电位(EP)为正电位，是驱动毛细胞感受器电位的原动力，使内耳产生听力。EP下降，导致听力下降或耳聋。EP的产生是多种离子通道保持内耳钾循【摘要】目的探讨蛛网膜下腔出血（SAH）低钠血症与脑利钠肽（BNP）的相关性。方法26例蛛网膜下腔出血患者设为A组（分低血钠组、血钠正常组两个亚组），设健康对照组20例为B组，分别于入院的第3天、第1周、2周、3周测定血浆BNP浓度同期比较，同时进行两个亚组预后比较。结果SAH组血浆BNP质量浓度高于健康组（P<0.01）；其中低血钠组与正常血钠组比较BNP浓度差异有显著性（P<0.05）；且低　汉语拼音：ZhasheyongShubatanna　　标准号：WS-23（X-20）-93　　拉丁文或英文：SulbactamumNatricumProInjectione　　主要活性成分：舒巴坦钠的无菌粉末或无菌冻于品。按无水物计算，每1mg的效价不得少于850舒巴坦单位，按平均装量计算，含舒巴坦（C8H11NO5S）　　性状：白色或类白色粉末或结晶性粉末，或冻干块状物。　　鉴别：照舒巴坦钠笔者对利尿钠因子在重症颅脑损伤后低钠血症中的作用进行了探讨，现报告如下。1临床资料1.1一般资料格拉斯哥昏迷计分(GCS)8分以下颅脑损伤70例,其中脑挫伤17例，硬膜下血肿25例，硬膜外血肿21例，弥漫性轴索损伤7例。1.2方法观察组病人分别于受伤24h内、3天、第7天晨空腹血清；对照者同样；采肘静脉血3ml，置含30μl10%EDTA和50μl抑肽酶的塑料离心管中，混匀，离心，分离血浆500【关键词】注射用阿洛西林钠奥硝唑氯化钠注射液配伍　　阿洛西林钠是一广谱的半合成青霉素，临床常用于治疗革兰阴性或阳性菌所引起的各种感染，如尿路感染、呼吸道感染等;奥硝唑氯化钠注射液是硝基咪唑类抗菌药物，可治疗由敏感厌氧菌所致的多种感染性疾病，如腹部感染、盆腔感染、口腔感染等;临床上二者常联用，疗效显著。关于二者连续静脉滴注时，是否出现配伍反应，偶见报道，但未见其原因分析、讨论等。为此，笔者通过对发摘要目的：建立他唑巴坦及其制剂注射用哌拉西林钠/他唑巴坦钠的HPLC含量测定方法。方法：他唑巴坦的HPLC含量测定色谱条件：C18柱，流动相：pH4.0的乙腈-0.05mol.L-1的磷酸二氢钾水溶液-2.5mmol.L-1四丁基氢氧化铵(180∶805∶15)，检测波长为230nm，流速：1mL.min-1；注射用哌拉西林钠/他唑巴坦钠的HPLC含量测定色谱条件：C18柱，流动相为pH3.5的摘要　目的：建立反相离子对高效液相色谱法测定注射用美洛西林钠-舒巴坦钠含量。方法：采用μBondapakC18色谱柱，0.005mol.L-1氢氧化四丁基铵-乙腈(68∶32，pH5.0±0.1)为流动相，230nm为检测波长，30℃柱温下对美洛西林和舒巴坦进行分离和测定。结果：能同时测定制剂中美洛西林和舒巴坦的含量。美洛西林在0.25～1.5mg.mL-1，舒巴坦在0.125～0.75mg.m《中华胸心血管外科杂志》2007年第23卷第3期中国研究者对重组人脑钠素（rhBNP）用于心脏手术围术期处理的可行性、安全性和有效性进行初步观察，并与硝普钠的作用进行比较。研究者选择择期心脏手术病人22例，随机分为rhBNP组（B组）和硝普钠（SNP）组（s组），每组11例。比较rhBNP与SNP对病人血流动力学和肝肾功能的影响。结果发现与给药前和S组比较，B组用药后15、30、60、120和1【摘要】本文主要研究希美钠（甘氨双唑钠）在人体内药代动力学特征，通过对33例肿瘤患者在临床试验和治疗过程中，对相关指标进行检测分析，并对人体的不良反应进行观察，确定了在静脉用药情况下患者的最大耐受剂量，认为每周3次（隔日）连续6周静脉滴注甘氨双唑钠（800mg/m2）是可以耐受的，并建议为II期临床试验用剂量。【关键词】甘氨双唑钠；放射增敏剂；药动学；最大耐受剂量；药物不良反应希美钠（甘氨双唑钠【摘要】目的对头孢哌酮钠/舒巴坦钠治疗儿童肠炎进行药物经济学评价，为临床合理用药提供科学依据。方法采用随机分组，对照分析头孢哌酮钠/舒巴坦钠与头孢他啶的治疗成本和治疗效果。结果每例头孢哌酮钠/舒巴坦钠和头孢他啶的治疗费用分别为65.80元；有效率分别为95.6%、97.7%；费用/有效率比分别为12.38、17.05。结论头孢哌酮钠/舒巴坦钠（1：1）组治疗儿童肠炎比头孢他啶Medicis制药公司日前宣布，FDA批准10%苯乙酸钠＋10%苯甲酸钠的复方制剂（sodiumphenylacetate＋sodiumbenzoate，Ammonul）用于辅助治疗急性高氨血症及尿素循环酶缺乏患者的相关脑病。尿素循环障碍（UreaCycleDisorder，UCD）是一种遗传的先天代谢缺陷疾病。因缺乏尿素循环酶致使UCD患者的生命受到高氨血症等疾病的威胁。本品为静脉注射剂，作为【摘要】目的比较术中输入乳酸钠林格液和醋酸钠林格液血乳酸盐及血气的变化。方法40例择期手术患者按随机数字表随机分为乳酸钠组（L组）和醋酸钠组（A组），每组各20例，采用静吸复合全身麻醉。L组术中输入乳酸钠林格液，A组术中输入醋酸钠林格液，两组术中不交叉输入其他晶体液，输入胶体液均为菲克血隆（内含聚明胶肽）。观察诱导前，诱导后1h、2h、3h及4h的血乳酸盐、SpO2、PETCO2、呼末异氟醚浓度ldbereversiblyinducedbyswitchingbetweenNa+-richandNa+-freebathsolutions.Inexcisedinside-outpatches,Na+reducedtheamplitudeofsingle-channelcurrents,indicativeofrapidblockandunblockofthepore.Mutationsint
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