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缓存时间: 12:02:28花器喷雾法接种根癌农杆菌转化矮生菜豆条件的初步探索--《中国农业大学》2003年硕士论文
花器喷雾法接种根癌农杆菌转化矮生菜豆条件的初步探索
【摘要】:
目前菜豆基因转化研究的主要困难是植株再生系统难于建立和转化效率较低。农杆菌介导拟南芥的花器喷雾法(floral spray)是当前不需要组织培养及植株再生的最简单的转化方法,这种方法在其他作物上还没有成功应用。本论文是尝试将该方法用于转化矮生菜豆的研究。矮生菜豆生育期短,植株矮小直立,是比较理想的研究菜豆转化的材料。通过对农杆菌在矮生菜豆花器中的存活状况、vir基因的表达情况、T-DNA的转移情况的研究,初步探讨了该方法在农杆菌介导的矮生菜豆的遗传转化中的可行性。
为了更好的研究花器喷雾法的可行性,我们首先利用针刺注射花器的方法保证接种菌液进入到花器中去,对不同接种时期、不同接种菌液条件下的农杆菌存活、vir基因表达情况进行了研究。研究表明,接种的六个时期农杆菌存活都很好,vir基因表达水平也很高;接种菌液浓度(OD_(600)值表示)为0.8—1.3时,vir基因表达最好;糖类物质以及细胞分裂素BAP能够大大提高vir基因的表达水平,其中蔗糖的效果比葡萄糖好;接种菌液中是否加入乙酰丁香酮AS对vir基因的表达水平没有影响。我们进一步利用在T-DNA上含有GUS基因的农杆菌菌株LBA4404(pTOK233)研究最佳接种时期,结果表明,最佳接种时期应在授粉之前,菜豆花现蕾的第一天到第二天。
花器喷雾法转化植物的难点在于接种菌液能否进入到花器中去,并到达靶标位置。研究表明表面活性剂可对其有所帮助。目前花器浸蘸法所常用的表面活性剂为Silwet L-77,本研究显示该试剂用于花器喷雾时对农杆菌进入矮生菜豆花器的帮助不大。然而我们选用EMCOL 4012、渗透剂T和MORWET EFW可有效地使农杆菌进入到矮生菜豆花器内。这表明,这些表面活性剂可能有利于使菌液进入到其它植物花器中,从而有助于在其它植物上进行高效的花器转化。这对用农杆菌进行花器转化的方法改良提供了新的方向。
【关键词】:
【学位授予单位】:中国农业大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2003【分类号】:S643【目录】:
中文摘要6-7
英文摘要7-9
缩略词9-10
第一章 前言10-20
1.1 植物基因转化的研究概况10-12
1.1.1 受体系统10
1.1.2 选择标记基因和报告基因10-11
1.1.3 基因转移系统11-12
1.2 根癌农杆菌介导植物遗传转化的机理12-14
1.3 菜豆基因转化的研究进展14-16
1.4 根癌农杆菌介导基因转化的方法16-17
1.4.1 原生质体共培养转化法16
1.4.2 叶盘转化法16
1.4.3 整体植株接种共感染法16
1.4.4 非组培转化法16-17
1.5 表面活性剂17-19
1.5.1 表面活性剂在农药中的作用17-18
1.5.2 表面活性剂在花器浸蘸法转化植物中的应用18-19
1.6 本课题的研究目的和意义19-20
第二章 材料和方法20-26
2.1 试验材料20-22
2.1.1 植物材料20
2.1.2 根癌农杆菌菌株20-21
2.1.3 培养基及溶液21-22
2.1.4 供试表面活性剂22
2.1.5 生化试剂22
2.2 试验方法22-26
2.2.1 植物栽培条件22-23
2.2.2 农杆菌菌株的培养及保存23
2.2.3 接种菌液的制备23
2.2.4 植物接种方法23-24
2.2.5 表面活性剂的筛选24
2.2.6 GFP的CLSM检测24
2.2.7 GUS组织学检测24-25
2.2.8 矮生菜豆潮霉素抗性浓度的筛选25-26
第三章 结果与分析26-40
3.1 接种时期的确定26-29
3.2 接种菌液条件的优化29-33
3.3 适合于花器喷雾法转化的表面活性剂的筛选33-38
3.3.1 所用表面活性剂浓度范围的确定33-35
3.3.2 花器喷雾法接种后农杆菌存活的检测35
3.3.3 花器喷雾法接种后vir基因表达的检测35-36
3.3.4 花器喷雾接种后GUS瞬时表达检测36-37
3.3.5 表面活性剂在花器喷雾法中作用的进一步验证37-38
3.4 矮生菜豆潮霉素抗性浓度的筛选38-40
第四章 讨论和结论40-44
4.1 讨论40-43
4.2 结论43-44
参考文献44-52
作者简历52-53
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京公网安备75号新型生物制剂细胞分裂素--《农药市场信息》2000年18期
新型生物制剂细胞分裂素
【摘要】:正 细胞分裂素是中国农科院植保所微生物室研制的。该产品是通过生物工程方法制成的新型生物制剂,含有以细胞分裂素为主(玉米素)的多种植物激素。它具有促进叶绿素的形成,增强光合作用,促进生长.促进蛋白质的合成,增加作物产量,还有保花保果,提前成熟,改善品质的作用。细胞分裂素有两种剂型,一种是含量为1ppm的植物细胞分裂素可溶性粉,一种是40PPm植物细胞分裂素可溶性粉。细胞分裂素使用方法简单。作物浸种使用浓度为0.01ppm,即500克粉加水50公斤;叶面喷雾使用浓度为0.02ppm,即100克粉剂加水5公斤,搅均匀后喷施作物表
【关键词】:
【分类号】:S482.8【正文快照】:
细胞分裂素是中国农科院植保所微生物室研制的。该产品是通过生物工程方法制成的新型生物制剂,含有以细胞分裂素为主(玉米素)的多种植物激素。它具有促进叶绿素的形成,增强光合作用,促进生长.促进蛋白质的合成,增加作物产量,还有保花保果,提前成熟,改善品质的作用。 细胞分裂
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  近期不少菜农朋友反映,西红柿茎秆上出现了大量的不定根,以前没有见过类似情况。植株长势很弱,有的已经出现花打顶,这到底是怎么回事呢?各种情况分析如下。
  一、原因分析
  西红柿植株本身能够产生不定根系,但是像菜农反映的不定根系过多不是一种正常情况。一般在植株根系发育不良,出现维管束病害、植株长势受到抑制时,植株为了自我调节,需要有更多的根系吸收营养,会产生大量的不定根系。所以说西红柿植株产生大量的不定根系,不是叶片的病害,而是属于一种系统性的危害。
  二、具体原因以及防治
  1、根系发育不良或者出现根腐等土传病害。
  不定根系过多主要原因是:雨水进棚或者露天西红柿遭受雨水危害。雨水进棚后,能够造成沤根或者有害物质对根系造成损伤,特别是主根,可以拔出植株详细检查。
  感染土传病害,例如根腐病、枯黄萎病都能造成根系腐烂,也会使植株出现大量不定根系。
  防治方法:及时将雨水排出,后期注意养护根系,可以冲施甲壳素、海藻酸等生根养根肥料;对于土传病害可以选择配方:恶甲水剂+松脂酸铜+甲壳素进行灌根。
  2、感染细菌病害
  特别是细菌性髓部坏死病和青枯病,导致植株的维管束系统遭到破坏,植株会在茎秆上产生大量不定根系。
  防治方法:关键在于预防,可以选择细菌药剂中生菌素、可杀得、氯溴异氰尿酸等药剂,同时可以灌根,中生菌素+松脂酸铜+甲壳素。
  3、烧根
  主要是底肥不科学,没有经过腐熟或者穴施农药不合理,导致烧根,也会使茎秆产生大量不定根系。
  防治方法:冲施EM生物菌肥或者甲壳素,解害促进生长。
  4、抑制剂过量使用
  有些菜农控制植株生长,总是要叶面喷雾一些控长剂,例如多效唑、B9、爱多收等药物,如果用量过重,植株长势受抑制过于严重,也会导致茎秆产生大量不定根系。
  防治方法:提头促长,可以选择甲壳素+细胞分裂素叶面喷雾,效果显着。
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